动物炭疽病的血清学诊断

（黑龙江省动物疫病预防与控制中心 150069）

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1 沉淀反应

当尸体腐败、致使细菌学诊断得不到正确的结果，以及检查大量的畜产品时，可进行血清学沉淀反应诊断。炭疽沉淀原（炭疽菌溶解产物）存在于炭疽尸体的组织中，具有极高的耐酸和耐腐败的特性，炭疽沉淀原对炭疽免疫血清（沉淀素抗体）可发生特异性的沉淀现象，甚至死后一年半以上的腐败炭疽尸体，仍有沉淀原存在。试验证明，病畜在死前20～22 h血液中即有沉淀原出现，因此本法也可应用与生前诊断，并且由于本法操作简单，短时间内即可得出结果，所以在生前诊断方面，可能比镜检和细菌培养更具有应用的价值。

为了使炭疽沉淀反应的结果正确可靠，必须特别注意材料的采取、沉淀原的浸出、炭疽沉淀素血清的质量以及其他可能影响结果的因素等。由于炭疽尸体各部组织中沉淀原的含量不同，因此其反应的表现也不一样。新鲜的组织材料，以脾脏的含量最高，制成2560倍稀释的浸出液仍可出现阳性反应。而鲜皮及肌肉则含量很低，患最急性炭疽死亡的动物有时呈阴性反应。各组织器官沉淀原的含量，与其所含炭疽杆菌的数量成正比例，故采取材料以脾、肾、肝及血液等为宜。用这些材料做沉淀反应，1～2 min即可观察到结果，如检验材料为鲜皮或肌肉时，则先置于37℃中2～3天或更长的时间，使其中的细菌增殖，以增加沉淀原的含量，待迅速干燥（必须注意保证安全），然后再进行检验。为了操作安全常将已干燥的被检材料先高压消毒（避免进入水分，否则沉淀原会溶于水中而受损失）。皮样须在消毒后进行浸出。如果鲜皮或湿皮没有事先干燥就高压消毒，则皮样会形成胶体而不易得到透明的浸出液，皮张浸出液须完全透明，方能进行沉淀反应。为了容易使浸出液透明，皮张常用冷浸法，使用的生理盐┫加入0.3%～0.5%的石碳酸防腐。以皮张和肌肉进行沉淀反应，须观察1～10 min方能保证诊断的正确性。

由于一定pH值的溶液可使诊断血清中的蛋白物质发生凝固或絮状沉淀，所以用于沉淀反应的浸出液以接近中性的为宜。据经验，浸出液的pH值在5～8不会影响沉淀反应的结果，超出这个限度就会出现假阳性反应，影响判断的正确性。

被检材料为盐干皮或盐浸皮时，则浸出液中含盐过多，比重加大，不能与血清重积。一般都用透析方法除去浸出液中多余的盐分，但此法手续较繁且延长了检验时间。我国兽医工作者试验证明，在炭疽沉淀素中加入4%的食盐，即可改变血清的比重，使盐皮抗原液能重积于其上，仍能得到正确的结果。一般未经过盐处理的皮张的反应，虽在10～15 min即可观察到结果，但这种反应仍须延长至20 min。

温度对沉淀反应出现的速度也有影响，于16～30℃10 min所达到的反应程度，若低于16℃，则须延长至15 min才能达到，故一般以20℃室温为宜。

炭疽沉淀素血清的特异性对沉淀反应的准确性有很大的关系，特异性不高的血清，常对非炭疽材料出现类属反应，招致诊断的错误。用标准炭疽抗原（5万倍稀释）检验时，于30～60 s内出现的阳性反应，对干燥炭疽皮抗原（10倍稀释）于1～2 min发生阳性反应，而对健康皮抗原（10倍稀释）于15 min不发生反应，对类炭疽杆菌及枯草菌均呈阴性反应。

2 荧光抗体快速诊断法

本法是一种特异性强、检出率高、方法简便而快速的诊断方法，可对可疑炭疽病死畜的血液或颌下淋巴结、扁桃体的病料，利用荧光抗体法检查，只需1～2 h就可得出结果。将病料涂片、干燥、固定后用异硫氰酸荧光标记提纯的抗炭疽荚膜血清抗体（γ—球蛋白），在炭疽荚膜荧光抗体染色后，用荧光显微镜观察。具有荚膜的炭疽菌，菌体高度膨大，菌体荚膜呈明亮黄绿色荧光或菌体周围呈明亮的黄绿色荧光环，荧光亮度强，很易辨认。

3 炭凝集反应

据报道，有人曾研究过应用平板炭疽凝集反应检出炭疽芽孢的方法，结果初步认为对检查炭疽芽孢污染的标本是直接、快速、准确的诊断方法。制备炭疽炭血清的方法是：将用pH值为7.2磷酸缓冲液40倍稀释的未提纯的抗炭疽血清（12 mL）以60℃水浴加湿处理30 min后，加入1 g湿木炭末在56℃的水浴中致敏10 min，即成炭疽炭血清。反应操作时，先将可疑含炭疽杆菌芽孢的被检标本倍比稀释液各0.1 mL分别滴于玻板上，并以生理盐水、磷酸缓冲液各0.1 mL为对照，然后分别加入炭疽炭血清各0.05 mL，混匀后，在室温下静置1～20 min，在对照为阴性反应的条件下判定结果。结果此法可检出每毫升含有39000个纯炭疽杆菌芽孢的培养物和每毫升含40万个以上炭疽芽孢而混有杂菌的污染标本。

动物炭疽病的血清学诊断

赵晓春，王宁宁，李 鹏