乳腺癌分子分型与新辅助化疗前后GST-π和Topo-Ⅱ表达的相关性研究

张艳霞，马东华，孙冬霞，李军澎，骆向利，石晓鹏

(1. 河北省邯郸市妇幼保健院,河北 邯郸 056301；2. 河北省大名县妇幼保健院,河北 大名 056000；3. 河北省涉县妇幼保健院，河北 涉县 056400；4. 河北省曲周县妇幼保健院，河北 曲周 057250；5. 河北省武安市第一人民医院，河北 武安 056300)

乳腺癌分子分型与新辅助化疗前后GST-π和Topo-Ⅱ表达的相关性研究

张艳霞1，马东华2，孙冬霞1，李军澎3，骆向利4，石晓鹏5

(1. 河北省邯郸市妇幼保健院,河北 邯郸 056301；2. 河北省大名县妇幼保健院,河北 大名 056000；3. 河北省涉县妇幼保健院，河北 涉县 056400；4. 河北省曲周县妇幼保健院，河北 曲周 057250；5. 河北省武安市第一人民医院，河北 武安 056300)

目的 探讨乳腺癌不同分子分型与新辅助化疗前后GST-π和Topo-Ⅱ表达的相关性。方法 对155例乳腺癌患者进行分子分型，采用免疫组织化学EnVison二步法检测不同分型患者GST-π和Topo-Ⅱ表达情况,并结合病理特点进行分析。结果HER2过表达型及Basal-like型GST-π表达率高于LuminalA型和LuminalB型(P均<0.05)。HER2过表达型及Basal-like型Topo-Ⅱ表达率低于LuminalA型和LuminalB型,但差异无统计学意义(P均>0.05)。不同分型患者GST-π表达情况与患者新辅助化疗疗效之间无明显相关性(P>0.05)，不同分型患者Topo-Ⅱ表达情况与新辅助化疗疗效有关(P<0.05)。结论 乳腺癌中GST-π的表达情况与化疗药物作用无明显相关性，而Topo-Ⅱ表达量的高低与化疗药物作用成正相关性，Topo-Ⅱ的表达有助于判断乳腺癌的预后及为用药提供选择依据。

乳腺癌；分子分型；新辅助化疗；免疫组化

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其发病率居女性恶性肿瘤第一位[1]。目前新辅助化疗作为局部晚期乳腺癌的首选治疗方法，使手术的适应证越来越宽。有研究报道，乳腺癌新辅助化疗的病理完全缓解率为4%～34%[2-3]。但是，多药耐药(Multidrug resistance,MDR) 是临床肿瘤化疗中常常遇到的难题，导致患者生存期缩短，是化疗方案无效的主要原因。为寻找反映化疗效果的生物学标志物，指导临床选择个体化的治疗方案，新辅助化疗可以作为疗效的预测模型来指导。谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π) 是肿瘤及组织细胞中最常见的同工酶, 能够催化机体内谷胱甘肽与亲电性化合物结合，使有毒化合物的水溶性增加，加速毒性排出体外[4], 从而增加GST-π活性的代谢而产生耐药性。拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)在多种抗肿瘤药中起靶点作用，由于它位于染色体17q21,在DNA的复制、转录以及染色体分离中起着至关重要的作用[5]。临床研究发现, Topo-Ⅱ可能成为预测蒽环类化疗药疗效的有效指标[6]。目前研究发现不同分子分型的乳腺癌患者对化疗敏感程度不同，其治疗已经进入个体化的治疗时代。本研究采用免疫组织化学方法检测新辅助化疗前后不同分子分型乳腺癌患者病理组织中GST-π和Topo-Ⅱ多种耐药基因蛋白表达情况, 探讨GST-π和Topo-Ⅱ表达与新辅助化疗疗效间的关系，旨在为临床治疗方案选择提供参考。

1 临床资料

1.1一般资料 选取2008年1月—2013年12月在邯郸市妇幼保健院治疗的155例女性乳腺癌患者，均自愿按照新辅助化疗方案治疗, 患者对用药情况知情同意。治疗前均做双乳彩超及X射线检查，明确肿瘤的最大径，均行粗针穿刺，并明确病理诊断及做免疫组化；治疗后，取手术切除的病理标本再次确定肿瘤的大小及免疫组化。患者年龄33～72岁，中位年龄53岁；病理诊断均为浸润性导管癌，其中T2期60例，T3期71例，T4期24例; 采用2013年St Gallen最新乳腺癌分子分型方法[7]：LuminalA型42例，Luminal B型43例，HER-2过表达型38例,Basal-like型32例。

1.2 新辅助化疗方案 采用FEC方案:在第1天、第8天静脉注射400 mg/m2环磷酰胺、表柔比星50 mg/m2、氟尿嘧啶500 mg/m2，28 d为1个周期，治疗4个周期后休息2个周期再行手术治疗，化疗期间可给予支持、对症治疗，治疗方案可根据患者实际情况进行调整。

1.3 观察指标 化疗前后采用免疫组织化学EnVison二步法检测不同分型患者GST-π和Topo-Ⅱ表达情况。免疫组化试剂盒购自北京中衫生物技术开发有限公司， GST-π和Topo-Ⅱ多抗均为中衫公司提供的工作液;采用中衫公司提供的乳腺癌免疫组化预实验阳性片作为阳性对照结果。操作过程按试剂盒说明书进行。化疗前及化疗后结果均由2位有经验的病理医师在单盲的情况下评定。GST-π的表达多位于细胞浆,Topo-Ⅱ位于细胞核。阳性判定标准为细胞核为清晰的黄色或棕黄色弥漫性染色，细胞浆为黄色或棕黄色。根据阳性细胞数及着色强度分为4个等级，分别为(-)(±)(+)()，其中(-)(±)判定为阴性，(+)()判定为阳性。

1.4 化疗疗效判定标准 完全缓解：化疗后肿瘤病灶完全消失；部分缓解：肿瘤大小减少50%或增加<25%；无变化：肿瘤大小减少<50%或增加<25%；进展(PD)：肿瘤大小增加>25%或出现新病灶。其中完全缓解和部分缓解为有效，无变化和进展为无效。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计分析,组间比较采用2检验, 采用Spearman检验进行相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1乳腺癌组织中GST-π、Topo-Ⅱ表达情况 乳腺癌组织中GST-π和Topo-Ⅱ染色阳性表达率分别为42.6%(66/155)、40.6%(63/155)。

2.2 不同分子分型患者乳腺癌组织中GST-π和Topo-Ⅱ表达情况 HER2过表达型及Basal-like型中GST-π阳性表达率高于Luminal A型和Luminal B型(P均<0.05)；Topo-Ⅱ阳性率低于Luminal A型和Luminal B型,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 化疗前不同分子分型患者乳腺癌组织中GST-π、Topo-Ⅱ表达情况 例(%)

注：①与Luminal A型和Luminal B型比较，P<0.05。

2.3 化疗前不同GSP-π和Topo-Ⅱ表达情况患者的化疗效果 Topo-Ⅱ表达阳性有效率高于表达阴性的(P<0.05)；GST-π表达阳性的有效率与表达阴性的有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 化疗前不同GSP-π和Topo-Ⅱ表达患者的化疗效果 例(%)

注：①与Topo-Ⅱ表达阴性比较，P<0.05。

2.4 不同分子分型患者GST-π和Topo-Ⅱ表达情况化疗效果 不同分子分型间Topo-Ⅱ表达阳性的有效率高于表达阴性的(P<0.05)，而不同分子分型间GST-π表达阳性有效率与阴性有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.5 化疗后不同GST-π和Topo-Ⅱ表达改变情况疗效比较 患者化疗前后GST-π表达情况比较差异无统计学意义，且化疗前后GST-π表达的改变与化疗疗效也无相关性(P>0.05)；Topo-Ⅱ表达由阳性转阴性的有效率最高，Topo-Ⅱ表达由阴性转阳的有效率最低(P<0.05)。见表4。

表3 不同分子分型患者GST-π和TOPⅡ表达情况化疗效果 例(%)

注：①与同型表达阴性比较，P<0.05。

表4 化疗后GST-π和Topo-Ⅱ表达改变情况化疗效果 例(%)

注：①与阳转阴比较，P<0.05。

3 讨 论

近年来，随着病理学研究的发展，人类在乳腺癌的治疗方面取得了巨大的成功，在其手段和策略方面也发生了重大的转变，但在标志肿瘤生物学行为方面和对临床治疗提供指导性作用的组织学分类方法方面，沿用先前的组织学分类和解剖学分期已经远远不能满足临床诊治需求[8]，而正确评价和预测疗效和疾病转归将成为重要的研究内容。2000年Perou等[9]利用cDNA 芯片检测技术对乳腺癌进行了分子分型，经不断研究证明，这种分型是正确的，并且这种分子检测要比传统的组织病理能更好指导乳腺癌的临床治疗[10-11]。

新辅助化疗是一种术前先进行化疗再手术的新方法，这样可以提高乳腺癌患者的缓解率，提高保乳概率，可使手术切除范围缩小，改善患者术后的生活质量，同时可以寻找预测化疗疗效的生物标记物[12-13]。而Rocque等[14]研究表明个体化治疗要依据乳腺癌的分子分型。在乳腺癌患者的分子分型中，Luminal A型的内分泌治疗疗效明显好于Luminal B型。由于Luminal B型的HER-2表达阳性, 对他莫昔芬的反应性低于Luminal A型,而用其他的内分泌治疗仍有效果。HER-2过表达型由于激素受体表达阴性,一般内分泌治疗没有明显疗效,但患者的化疗疗效好,并且适用于赫塞汀靶向治疗。Basal-like型乳腺癌易发生局部及远处转移,且组织学类型多为Ⅲ级[15]。本研究结果发现，GST-π和Topo-Ⅱ在化疗前阳性表达率分别为42.6% 和40.6%,与文献[16]相一致；按分型分类进行分析，发现HER2过表达型及Basal-like型中GST-π阳性率高于Luminal A型和Luminal B型(P<0.05)，Topo-Ⅱ阳性率低于Luminal A型和Luminal B型,但差异无统计学意义，与岳玉函等[17]研究结果相一致；另外Topo-Ⅱ表达阳性的有效率高于表达阴性的， GST-π表达阳性的有效率与表达阴性的有效率比较差异无统计学意义；不同分子分型间Topo-Ⅱ表达阳性的有效率高于表达阴性的，而不同分子分型间GST-π表达阳性有效率与阴性有效率比较差异无统计学意义；患者化疗前后GST-π表达情况差异无统计学意义，且化疗前后GST-π表达的改变与化疗疗效也无相关性； Topo-Ⅱ表达由阳性转阴性的有效率最高，Topo-Ⅱ表达由阴性转阳的有效率最低(P<0.05)。提示GST-π、Topo-Ⅱ可能与乳腺癌的发生、发展有一定的关系,GST-π、Topo-Ⅱ的表达可能对判断不同类型乳腺癌预后以及在用药选择方面提供有利的依据。

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Research on the correlation of breast cancer molecular classification with the expression of GST-π and Topo-Ⅱ before and after neoadjuvant chemotherapy

ZHANG Yanxia1, MA Donghua2, SUN Dongxia1, LI Junpeng3, LUO Xiangli4, SHI Xiaopeng5

(1.Maternal and Child Health-Care Hospital of Handan, Handan 056301, Hebei, China; 2.Maternal and Child Health-Care Hospital of Daming, Daming 056000, Hebei, China; 3.Maternal and Child Health-Care Hospital of Shexian, Shexian 056400, Hebei, China; 4.Maternal and Child Health-Care Hospital of Quzhou, Quzhou 057250, Hebei, China; 5.The First People’s Hospital of Wuan, Wuan 056300, Hebei, China)

Objective It is to investigate the correlation of breast cancer molecular classification with the expression of GST-π and Topo-Ⅱbefore and after neoadjuvant chemotherapy. Methods 155 patients with breast cancer were selected to carry on the molecular classification, the expression of GST-π and Topo-Ⅱwere detected by using immunohistochemical detection EnVison ldpe-g-nvp in patients with different parting, and the data were analyzed combining the pathological features. Results The expression of GST-π in HER2 expression type and Basal-like type was higher than LuminalA and LuminalB type (allP<0.05). The expression of Topo-Ⅱ in HER2 expression type and Basal-like type was lower than LuminalA and LuminalB type, but there was no significant difference (allP>0.05). There was no significant correlation between the expression of GST-π in patients with different parting and neoadjuvant chemotherapy curative effect (P>0.05), but the Topo-II expression in different classification was related to the curative effect of neoadjuvant chemotherapy in patients with difference parting (P<0.05). Conclusion The expression of GST-π in breast cancer has no significant correlation with neoadjuvant chemotherapy curative effect, but the Topo-Ⅱ expression in different classification is related to the curative effect of neoadjuvant chemotherapy in patients with difference parting. The expression of Topo-Ⅱ can help to judge the prognosis of breast cancer and provide basis for the selection of drug.

breast cancer; molecular classification; neoadjuvant chemotherapy; immunohistochemical

张艳霞，女，主治医师，主要从事乳腺外科工作。

石晓鹏，E-mail：shixiaopengxing@163.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.24.007

R737.9

A

1008-8849(2015)24-2643-04

2015-02-10