实时荧光定量PCR 检测对HCV抗体弱阳性标本的确认价值

张美华 徐清芳 杨敏

实时荧光定量PCR 检测对HCV抗体弱阳性标本的确认价值

张美华 徐清芳 杨敏

目的 探讨和分析实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR) 检测对丙型肝炎病毒(HCV)抗体弱阳性标本的确认价值。方法 50例谷丙转氨酶(ALT)指标正常, 无恶心、呕吐、乏力、发热等临床症状, 但行胃肠组织检查的患者。使用荧光剂定量PCR对其HCV抗体弱阳性进行检测分析。结果 对于ALT指标正常且抗阳性在1～20 S/CO的患者行荧光剂定量PCR检测的过程中, 发现2例(4%)患者检测结果高于最低检测值。对患者使用荧光定量PCR的方法对于HCV阳性血清进行检测, 并且对于ALT指标正常的患者, 行HCV抗体检测, 发现3例(6%)丙肝阴性抗体。结论 对于HCV抗体弱阳性的检测,虽然在一定程度上存在局限性, 对于HCV-RNA含量较低的情况下存在一定的失误性, 但能够较为准确的对患者HCV抗体弱阳性进行检测。具有较高的临床医学价值, 值得在HCV抗体检测领域得到进一步的完善、推广和应用。

荧光定量聚合酶链式反应；检测；丙型肝炎病毒抗体；谷丙转氨酶

在当今社会生活中, 虽然人们的生活水平得到了一定的提升, 但由于人们对于生活质量的忽视, 丙型肝炎在生活中出现的频率也越来越高。丙型肝炎作为一种传染性极强的疾病, 在人体内部变异性也极强, 现在医学中还未见对其特效药, 这就在很大程度上要求人们加强对于HCV的预防, 为了很好的对其预防, 应该提高HCV的检测准确度［1］。在现代医学研究中, 对于HCV的诊断多为综合诊断, 在临床医学中, HCV抗体弱阳性的检测多采用荧光定量的方法, 在传统医学中对于HCV的检测上, 荧光定量PCR的使用作出了卓越的贡献, 大大提高了HCV抗体弱阳性的检测精准度, 具有较为深远的意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象选取本院2009年4～11月收治50例ALT指标正常, 无恶心、呕吐、乏力、发热等临床症状,但行胃肠组织检查的患者。患者年龄45～63岁, 平均年龄(51.65±4.69)岁。

1.2 方法 由于患者胃肠功能较差, 在检查前需要对HCV进行检测, 使用荧光定量PCR的方式对于HCV-RNA阳性血清进行必要的检测, 进而实行对于HCV抗体的检测。定量荧光PCR检测使用的仪器是由美国应用生物公司制造的PCR Prism7500型仪器, 使用由上海捷瑞生物工程有限公司生产的荧光定量检测试剂盒。经患者及其家属知情同意后进行 HCV抗体检测。

2 结果

对于ALT指标正常且抗阳性在1～20 S/CO的患者行荧光定量PCR检测的过程中, 发现2例(4%)患者检测结果高于最低检测值。对患者使用荧光定量PCR的方法对于HCV阳性血清进行检测, 并且对于ALT 指标正常的患者, 行HCV抗体检测, 发现3例(6%)丙肝阴性抗体。虽检测结果个别存在失误性, 但对于绝大多数HCV抗体的检测都较为准确。

3 讨论

随着时代的进步和发展, HCV抗体的检测技术由常规PCR检测发展为现今荧光定量PCR检测［2］。新兴的PCR检测技术相较于常规PCR检测而言, 存在极大的检测优势, 使其检测精准度得到了大幅度的提升。具有特异性强、操作简便、灵敏度极高等各方面优点, 已然成为了国内外对于HCV抗体检测的生物研究活动中的主流技术［3］。实时荧光定量PCR检测系统, 主要是充分的利用了荧光信号随着PCR产物增加而增加的技术原理。在PCR产物不断增加和扩大的过程中, 对于反应系统中有关荧光信号的变化进行有效和精准的检测, 是实时荧光定量PCR检测的核心内容。根据在反应系统中的荧光信号在不断的变化过程中得出的平均值以及其平均标准差, 并且在99.7%的置信度的具体情况下所计算出来的荧光值数据在定量荧光PCR进行HCV检测过程中显得十分重要。在HCV抗体检测过程中选取实时定量荧光PCR技术与传统常规的PCR技术而言, 能够在很大程度上增加抗体定量检测的精准度［4］。

在试验过程中, 选取的50例ALT指标正常, 并无恶心、呕吐、乏力、发热反应的患者使用实时荧光定量PCR对其HCV-RNA阳性血清进行精确的检测和分析。存在2例(4%)患者检测出HCV-RNA的含量高于最低检出限, 48例(96%)患者见检测低于最低检出限, 为阴性。造成这种现象的原因可能是既往感染带来的免疫反应, 由于患者自身机能抵抗力强, 体内病毒少量存在, 未出现任何临床反应, 病毒逐步消失, 但抗体仍然存在于体内。由国内外学者研究和查阅相关文献得知, 荧光定量PCR检测的敏感度极强, 降低了检测过程中RNA的耗费。在一定意义上, 荧光定量PCR检测方法作为只用于被确诊为携带HCV的患者的好办法, 在医学研究上也做出了卓越贡献。另外在检测结果中, 存在3例(6%)患者检测结果表明HCV抗体呈阴性, 其余47例(94%)患者在检测后得出的HCV抗体具体数值均在80～150 S/CO的正常范围之内。由于试验选取的患者具体情况存在一定的差异,并且选取患者例数有限, 不排除部分患者HCV-RNA血清呈阳性但并未产生HCV抗体的情况。

综上所述, 实时荧光定量PCR检测技术在国内外HCV抗体弱阳性的检测领域发展尤为迅速, 也在不断的完善。但在HCV抗体弱阳性的检测过程中, 还需对HCV-RNA进行一定的检测, 并根据患者的临床表现对丙肝抗体病毒进行综合评定。而实时荧光定量PCR检测方法不失为一种好办法,值得得到广泛应用。

［1］ 范文勇.实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较.中国医药导报, 2011, 8(2):83-84.

［2］ 刘义庆, 邹建文, 田文君, 等.化学发光免疫分析检测抗-HCV抗体与HCV-RNA的关联研究.国际检验医学杂志, 2014, 35(13): 1749-1750.

［3］ 邵芳.HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性及其临床意义.中国中西医结合消化杂志, 2014, 22(2): 80-82.

［4］ 姚仁南, 陈复兴, 陈玲, 等.化学发光免疫分析法检测献血者HCV抗体的应用评价.中华全科医学, 2011, 9(3):450-453.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.019

2015-01-20］

463000 驻马店市第一人民医院检验科(张美华徐清芳)；驻马店市第四人民医院检验科(杨敏)