磷脂酶C-ε1基因单核苷酸多态性及基因表达与胃癌发病风险相关性探讨

利基林 冯 雁 宁淑芳 韦文娥 蔡政民 张力图

磷脂酶C-ε1基因单核苷酸多态性及基因表达与胃癌发病风险相关性探讨

利基林 冯 雁 宁淑芳 韦文娥 蔡政民 张力图

目的 探究磷脂酶C-ε1(PLCE1)基因单核苷酸多态性及基因表达和胃癌发病风险相关性。方法 选取300例胃癌患者及同期300例正常人群, 对其DNA进行提取以及测定。结果 经研究结果表明其PLCE1基因和胃癌存在一定的易感性相关。结论 经研究PLCE1基因单核苷酸多态性及基因表达与胃癌发病具有一定的相关性, 并为胃癌以及相关组织来源肿瘤的预警起到了一定的作用。

磷脂酶C-ε1；单核苷酸多态性；基因表达；胃癌

就目前而言, 我国胃癌的发病率逐年呈上升趋势, 其发生会给我国人民带来一定的负担, 对胃癌防治的主要方法则是及早诊断、及早治疗、及早预防, 因此需要找到可以适用于临床的肿瘤标志物［1］。本次研究对本院2005年2月～2015年3月收治的300例胃癌患者的临床资料进行分析, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2005年2月～2015年3月收治的300例胃癌患者, 将其设为观察组, 所有患者经诊断后均为胃癌；选择同期300例正常人群, 将其设为对照组。观察组中男192例, 女108例, 年龄42～68岁, 平均年龄(52.7±6.7)岁；对照组中男188例, 女112例, 年龄43～69岁, 平均年龄(53.2±7.8)岁。所有研究对象均签署了知情同意书。两组研究对象的一般资料比较, 差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 选用罗氏480PGR仪对受试者的DNA进行提取,震荡混匀装有血液的冻存管, 时间为10 s, 随后将其转入到离心管中, 并向离心管中增加CL, 在对其震荡20 s之后将上清液舍去。并向离心管中加入CL(5 ml), 并用振荡器将其充分混匀, 使其能够溶解, 并将上清液进行舍去, 并将离心管倒扣放置在吸水纸处。

制备FG：蛋白酶K工作液, 使其在低温下进行工作。同时向每个样本离心管中加入2.5 ml FG&PK工作液, 随后选用涡旋振荡器将其均匀混合。在65℃恒温进行30 min水浴,使得蛋白酶能够发挥自身的作用。随后对核算进行相应的沉淀工作, 在对其进行沉淀的过程中应先用手指进行敲打, 随后进行5 s震荡, 并将上清液进行舍去, 并将离心管倒扣放置在吸水纸处。选用空气干燥DNA沉淀, 时间为5 min。当核酸沉淀完成后, 选择65℃水浴将DNA进行溶解, 时间为60 min, 从而完成核酸溶解。并通过分光光度计对DNA进行定量提取。

1.3 选取SNP位点 选择Y、C2以及RA结构域, 按照HapMap 数据库所提供的SNP位点基因型频率分布, 将最小等位基因频率以及＜0.05的位点进行删除后, 获取了7个候选标签SNP(tSNP)位点, 位于Y结构域的则是rs3765524、rs3818432 , 位于C2结构域的是rs2274223、rs10509670 , 位于RA结构域的则是rs11187852、rs3781264、 rs11187866。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 统计两组间频数 经研究后, 其SNP片段呈现增大趋势, 并选用飞行时间质谱生物芯片系统对其SNP位点进行检查, 具有较高的检测成功率。利用HWE对SNP位点进行检查后能够看出, 其SNP位点的分布具有一定随机性, 因此遵循了遗传学定律, 两组比较差异无统计学意义(P＞0.05), 从而证实了分析结果较为准确。对比两组患者的rs10509670位点基因分布, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 且两组间rs3765524、 rs3818432位点基因分布差异有统计学意义(P＜0.05), 由此说明PLCE1基因和胃癌存在一定的易感性相关。

2.2 分析单个SNP位点遗传模型 选取基因型、显性以及等位基因三种模型, 从而创建模型并对其进行分析。在基因模型中, 其rs3765524、rs2274223、rs10509670 所存在相关的杂合基因和胃癌发病风险存在一定的相关性。而经过显性模型检测后, 均确定了上述三个位点和胃癌所具有的关联性。而经过等位基因模型分析后, 其rs3765524 中的T等位基因以及rs10509670 中的G等位基因和胃癌发病存在一定的风险关系。除此之外, 其rs3818432中的CA 基因型也可能和胃癌发病存在一定的关系。但上述数据差异无统计学意义(P＞0.05)。由此能够看出, 在创建遗传模型构建的过程中,其PLCE1基因中的rs3765524、rs2274223、rs10509670三个SNP位点多态性和胃癌易感性存在一定的关系。

3 讨论

对于SNP技术而言, Massarry是采用质谱检测方法来对其核酸进行探究, 同时将PCR技术自身所具有灵敏度以及质谱技术进行相互结合, 从而提升了准确度［2］。此项技术能够灵活的选取位点, 检测的最终结果较为准确, 且具备较高的检测通量, 完全适应当前医学对基因疾病研究的发展趋势。与此同时, 此研究选取了部分病例来对其进行检验, 进而确定了Massarry的真实性。

PLCE1是磷脂酶C中的一种, 在其蛋白分子中包含了Y以及C2共同的结构域, 还包含了2个PLCE1中的RA结构域［3］。其Y结构域能利用折叠方法逐渐形成酶催化活动位置, C2结构域则是磷脂结合所形成的结构域。然而激活PLCE1蛋白的方法较多, 因此受到作用的结构域也存在相应的差异性。

经过分析发现, rs2274223是PLCE1基因中的第26外显子, 能够引发PLCE1蛋白在此位点所产生的突变现象。rs3765524则是PLCE1基因中的第24外显子, 会形苏氨酸直至异亮氨酸产生相应的突变现象。与此同时, 此研究还找出rs10509670 位点多态性和胃癌风险所存在的关系。

综上所述, 采用创建模型方法所获取与胃癌发病风险的相关因素和PLCE1基因中的SNP位点存在一定的差异性。但将PLCE基因中的SPN位点进行联合分析, 能够为防治胃癌提供相关临床依据。

［1］ 周广宇, 孙延霞, 周立祥, 等.特发性膜性肾病与M型磷脂酶A2受体基因多态性的相关性.中华肾脏病杂志, 2013, 29(1): 1-5.

［2］ 岳志红, 菅广敏, 贾玫, 等.脂蛋白相关磷脂酶A2酶活性水平及其I198T基因多态性与冠心病的相关性研究.中华检验医学杂志, 2013, 36(2):156-160.

［3］ 颜怀军, 周越球, 徐超, 等.中国浙江汉族成年男性Apo C-1基因型与脂蛋白相关磷脂酶A2活性的关系.检验医学, 2010, 25(11):879-882.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.30.015

2015-05-25］

530021 广西医科大学附属肿瘤医院