丹皮酚对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响

刘柏林

丹皮酚对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响

刘柏林

【摘要】目的 探讨丹皮酚（paeonol）对人舌癌TCA8113细胞生物学行为的影响。方法 用MTT法检测不同浓度的丹皮酚对TCA8113细胞增殖的抑制的作用；用ELISA实验检测细胞血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达水平。结果 MTT实验表明丹皮酚对TCA8113 细胞的增殖有抑制作用，并随浓度增加抑制作用增强；ELISA实验提示丹皮酚抑制TCA8113 细胞分泌VEGF蛋白。结论 丹皮酚可以抑制TCA8113 细胞增殖，抑制VEGF蛋白的分泌。

【关键词】舌癌；TCA8113；丹皮酚

舌癌是最常见的口腔恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的1%～3%[1]。虽然发病率相对低于其他恶性肿瘤，但它影响人的颊，舌，腭，下嘴唇，口腔，牙齿等，患者由于外貌被破坏，其心理影响巨大。舌癌的常规治疗是手术切除，辅助化疗，放射治疗，但预后不良，迫切需要寻找新的能有效治疗舌鳞癌的化疗药物。近期我们用丹皮酚作用于人舌癌TCA8113 细胞系，研究其在舌癌中的治疗作用。

1　材料和方法

1.1实验材料

人舌癌TCA8113 细胞系购自美国ATCC公司。TCA8113 细胞生长于含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM（100 IU/ml青霉素，100 mg/L链霉素）培养液中，并置于饱和湿度，37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

1.2药品与试剂

丹皮酚购自上海第一制药厂（10 mg：2 ml）。 MTT购于Serva公司，DMEM培养基购自美国Gibico公司。VEGF ELISA试剂盒为德国IBL公司产品。MODE1680酶联免疫分析仪购自Bio-RAD公司。

1.3方法

1.3.1MTT法测定去丹皮酚对TCA8113 细胞增殖的影响 TCA8113细胞接种于96孔板，其密度为2～4×104细胞/孔，常规设3个复孔，每孔细胞总量100 μL，然后常规培养24 h，后开始添加入不同浓度的丹皮酚，添加等量的DMEM培养液到空白对照组中，等量的1% DMSO添加到溶剂对照组中。温箱中继续培养48 h后，每孔加入MTT（10 mg/Ml）20 μl，再培养4 h后，吸弃上清液，每孔加入DMSO，震荡器混匀，上酶标仪检测490 nm波长处的光密度（OD）值。肿瘤细胞生长抑制率=[1-（实验组OD值组/空白对照组OD值）]×100%。

1.3.2ELISA法测定丹皮酚对TCA8113细胞分泌VEGF的影响 将细胞接种在6孔板内，置入37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中培养24 h，然后添加32 mg/L，128 mg/L丹皮酚到相应孔中，空白对照添加同体积培养液体。继续常规培养48 h，收集细胞上清，离心5 min（400 g），然后吸取上清，保存于-80℃，待上机检测取出用。上机检测时严格按照操作说明进行操作。

1.4统计学方法

采用SPAS 17.0统计软件进行分析，各组测量所得数据用（±s）表示，组间数据比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1MTT法测定丹皮酚作用48 h后对TCA8113 细胞增殖的影响

分别用4、8、16、32、64、128、256 mg/L浓度的丹皮酚作用于TCA8113细胞，48 h后，MTT法测得丹皮酚对TCA8113细胞的抑制率为（3.17±0.4）%，（7.28±1.23）%，（15.36±1.59）%，（25.16±2.68）%，（39.34±3.12）%，（51.35±2.18）%，（89.24±2.53）%，其分别与空白对照组（0%）相比，P＜0.05。

2.2ELISA法测定丹皮酚对VEGF的影响

根据MTT结果，选取空白对照组，32 mg/L和128 mg/L丹皮酚组（实验组）进行后续实验，ELISA实验测到VEGF表达量分别为（13.76±1.52）μg/L，（3.52±1.34）μg/L，（2.44 ±1.2）μg/L。32 mg/L和128 mg/L丹皮酚组低于空白组细胞，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3　讨论

丹皮酚是从中药材牡丹根皮及徐长卿全草中提取的一种活性成分，分子式为C9H10O3，分子量为166.18。近年来，多名学者研究表明丹皮酚具有良好的抗癌活性，其对软骨肉瘤，纤维肉瘤，卵巢癌等多种肿瘤有治疗作用[2-5]。 研究发现，丹皮酚可诱导细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长[4]。

血管内皮生长因子是公认的促进血管生长的因子，其参与肿瘤的侵袭转移，其高表达的患者示预后不良[5]。Lee等[3]研究表明丹皮酚可以抑制纤维肉瘤细胞VEGF的分泌，从而抑制肿瘤新生血管的生长，来抑制肿瘤生长，迁移。笔者的研究中，ELISA实验提示空白组细胞VEGF表达量，明显高于32 mg/L和128 mg/L丹皮酚组细胞，表明丹皮酚能够抑制TCA8113细胞分泌VEGF。VEGF促进肿瘤新生血管形成，当VEGF分泌下降时，肿瘤新生血管形成减少，TCA8113细胞迁移，侵袭力必然降低。MTT结果提示丹皮酚对TCA8113 细胞有明显增殖抑制作用，而且随丹皮酚浓度升高，抑制率也相应增加，呈明显的剂量效应关系。

综上所述，丹皮酚能明显抑制TCA8113细胞的增殖和肿瘤新生血管的能力，对其进一步研究，可为舌癌治疗提供新的方法。

参考文献

[1] Warnakulasuriya S. Global epidemiology of oral and oropharyngeal cancer [J]. Oral Oncol.，2009，45（4-5）：309-316.

[2] Horng CT，Shieh PC，Tan TW，et al. Paeonol suppresses chondrosarcoma metastasis through up-regulation of miR-141 by modulating PKCδ and c-Src signaling pathway[J]. Int J Mol Sci.，2014，15（7）：11760-11772.

[3] Lee HJ，Kim SA，Jeong SJ，et al. Paeonol Oxime Inhibits bFGFInduced Angiogenesis and Reduces VEGF Levels in Fibrosarcoma Cells[J]. PLoS One，2010，5（8）：e12358.

[4] Yin J，Wu N，Zeng F，et al. Paeonol induces apoptosis in human ovarian cancer cells[J]. Acta Histochem，2013，115（8）：835-839.

[5] 王阿曼，蔡欣，周涛，等. MMP-2、VEGF、CD105和Ki-67在小细胞肺癌中的表达及预后相关性研究[J]. 临床肿瘤学杂志，2012，17（11）：988-993.

作者单位：223300淮安，江苏护理职业学院检验药学系

Effect of Paeonol on Proliferation of Human Tongue Carcinoma in Tca8113 Cell

LIU Bolin, Department of Laboratory and Pharmacy, Jiangshu Vocational College of Nursing, Huai’an 223300, China

[Abstract]Objective It is to research the effect of paeonol on the biological behavior of human tongue carcinoma in TCA8113 cells. Methods MTT was used to detect the inhibition of paeonol on the proliferation of TCA8113 cells, with different concentration. Expression level of VEGF was detected by ELISA assay. Results MTT results showed that paeonol has inhibition effects on the proliferation of TCA8113 cell. The inhibition effects are enhanced with the increase of its concentration. ELISA assay indicates that paeonol has inhibited TCA8113 cells secrete VEGF. Conclusion The proliferation of TCA8113 cells can be inhibited by paeonol, and paeonol can inhibi TCA8113 cells secrete VEGF.

[Key words]Tongue carcinoma, TCA8113, Paeonol

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.20.147

【文章编号】1674-9308（2015）20-0200-02

【文献标识码】B

【中图分类号】R285