浅谈结核病临床诊断技术

李余良

浅谈结核病临床诊断技术

李余良

结核病本身比较复杂，涉及到全身各个器官，随着人们对结核病的不断认识，结核病临床诊断技术也有了很大的发展。本文主要对实验室几种常见的诊断方法进行论述。

结核诊断；MTB；细菌学；IGRAs

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染引起的慢性肉芽肿性炎症，根据感染部位的不同，可以分为肺结核和肺外结核，以肺结核最常见，占85%～90%。世

界卫生组织统计，当前全球有近1/3的人感染了结核分枝杆菌，每年有1 000万新发病例，约320万人死于结核病[1]。目前，结核病临床诊断方法有多种，根据原理和方法学的不同，可以分为影像学诊断、细菌学诊断、免疫学诊断。下面就以上几种诊断方法进行介绍。

1 影像学诊断

常规胸片（CXR）由于X线摄影（CR）和数字X线摄影（DR）等影像技术的应用[2]，图像清晰度有较大的提高。高分辨率CT（HRCT）作为常规CT的一种补充，能够清晰地显示肺组织细微结构，被认为是目前诊断肺弥漫性病变的首选方法，但HRCT对屏气要求较高并且不能代替常规CT。另外，近年来多层螺旋CT（MDCT）的应用，图像的质量有了提高，结核病影像学诊断有了新的方法。目前影像学诊断仍然是肺结核病检查的主要方法，由于属于非特异性检测，其特异性较差，而且检测阳性率低。

2 细菌学诊断

包括涂片法、分离培养法、噬菌体生物扩增法等，为结核病的临床诊断提供了重要的依据。

2.1 涂片法

涂片法因其设备简单、费用低廉，便于在基层推广，一般作为检测结核分枝杆菌的首选方法，但其存在阳性率低，无法区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌、死菌和活菌，肺外结核取样困难等缺点。涂片镜检对发现结核病传染源、选择治疗方案、考核疗效、评价防治效果仍具有重要的作用[3]。

2.2 细菌分离培养

2.2.1 普通培养法 采用改良罗氏培养法，可鉴定死、活菌，作为临床治疗主要监测指标。分离培养能保持结核杆菌的典型形态、菌落形态、耐药性试验和菌型鉴定等。但培养时间过长，往往要60天才能报告结果，并且灵敏度低，国内报道约为40%左右[4]。

2.2.2 Bactec 460 TB检测系统 Bactec 460 TB检测阳性率比改良罗氏培养法提高了10%。检测时间缩短至9～14天。但无法观察菌落形态、容易污染，而且由于核污染问题，发达国家已限制使用。

2.2.3 BACTEC MGIT 960系统 BACTEC MGIT 960（全自动分枝杆菌培养/药敏）系统是BD公司研发的专业快速检测分枝杆菌的检验设备，也是目前唯一专门用于分枝杆菌培养/药敏的系统。国外报道[5]MGIT 960系统对结核杆菌的培养阳性为94%（涂阳痰标本)，所需时间为12天左右。国内彭丽[1]报道，MGIT 960的灵敏度和特异性与Bactec 460 TB相同。从上述报道可以看出，此法检出率较高、特异性强、所需时间较短、无核污染，但仪器、试剂昂贵，不宜临床推广应用。

2.2.4 噬菌体生物扩增法 噬菌体生物扩增法（phaB）是由Wilson等[6]建立的一种MTB快速检测新技术，该技术采用分枝杆菌噬菌体D 29感染标本中的结核分枝杆菌，裂解释放的噬菌体感染敏感细胞，出现噬菌斑。根据噬菌斑的有无、多少，即可判断待检标本中是否存在活的MTB或其他少数几种NTM。该方法简单、仪器设备要求较低，且成本低廉，但无法区分死菌和活菌。除此之外，还有自动连续监测系统（BACTEC 9 000 MB）系统、分枝杆菌生长指示管（MGIT）法、分枝杆菌快速变色培养基法等，这些方法或因检测仪器、试剂昂贵，或因污染率高而成为临床应用的缺陷。

3 免疫学诊断

3.1 细胞免疫学诊断

3.1.1 结核菌素皮肤试验（the tuberculin skin test，TST） 结核菌素皮肤试验（TST）从1890年发明以来仍广泛应用于结核的检测，特点成本低，易于开展。但同时也存在缺点：（1）特异性低，尤其是针对卡介苗（BCG）作为常规接种疫苗的国家。（2）同时不能排除非结核分枝杆菌（NTM）的感染。（3）TST对潜伏性结核分枝杆菌感染的灵敏度较差，而且对于免疫抑制患者的检测结果难以确定[7]。

3.1.2 干扰素释放试验（interferon-gamma release assays，IGRAs）为克服TST检测方法的不足，近年来发展的以T细胞为基础的IFN-γ释放实验为诊断结核分枝杆菌的潜伏感染带来新的希望。该方法原理是：被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生IFN-γ，产生高水平的IFN-γ意味着结核分枝杆菌的感染。检测用抗原选自结核分枝杆菌基因组差异区1（RD 1）基因编码的特异性蛋白ESAT-6（早期分泌抗原靶600 0蛋白）和CFP-10（培养滤出液蛋白-10），避免了卡介苗和大多数非结核分枝杆菌的干扰。Soysal A等人[8]对113例PPD阳性的儿童病例进行研究，发现其中只有23%（是T-SPOT阳性。大量试验数据证明，该方法用于结核菌潜伏性感染以及肺外结核的检测均有90%左右的灵敏度和特异性[9]。除此之外还有分子生物学诊断，血清学诊断，DNA指纹图谱技术和生物芯片技术等方法，这些分子生物学诊断方法由于需要的试剂和设备昂贵，对实验室环境和操作技术人员要求高，因此不利于临床应用的推广。

4 结论

由于结核分枝杆菌本身的特性以及其感染的广泛性和发病的复杂性，使得结核病的检查项目繁多，涉及多种技术学科。不同的检测方法根据自身的特点适用于临床诊断、疗效评价、流行病学调查等不同方面。今后，随着对结核分枝杆菌生物学特性的深入了解，诊断技术将逐步完善，从而改善生活质量、保障公众身体健康和生命安全。

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[5]Toroli E，Cichero P，Chinllo MG，et al.Diagnostics："Multicenter Comparison of ESP Culture System II With BACTEC 460TB and With Lowenstein-Jensen Medium for Recovery of Mycobacteria From Different Clinical Specimens, Including Blood．"[J].Blood Weekly，1998，36（5）：1378-1381．

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To Explore the Diagnosis Technology of Tuberculosis

LI Yuliang Tuberculosis Hospital in Jilin Province Department of Pathology, Changchun 130500, China

Tuberculosis is complex disease involve the whole body organs, with the awareness of tuberculosis, tuberculosis clinical diagnosis technology also has the development. This article mainly discusses the laboratory diagnosis of several common methods.

Tuberculosis diagnosis, MTB, Bacteriology, IGRAs

R52

B

1674-9308（2015）16-0054-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2015．16．042

130500吉林省结核病医院病理科