酶修复法在翼状胬肉免疫组化中应用的探索

张纯涛 何媛 贾俊710038陕西省西安医学院第二附属医院

酶修复法在翼状胬肉免疫组化中应用的探索

张纯涛 何媛 贾俊
710038陕西省西安医学院第二附属医院

目的：分析3种抗原修复方法在翼状胬肉免疫组织化学染色过程中所得切片的优劣。方法：分别用3种不同抗原修复方法包括微波修复、酶修复和高压修复，对翼状胬肉组织蜡块的连续切片加抗TGF-ΒrⅡ抗体并染色。对所得切片的掉片结果进行分析。结果：3种方法间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；微波修复与高压修复，酶修复与高压修复间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：对翼状胬肉组织进行组织抗原修复的最佳选择是酶修复法，掉片少，简单易行，且没有危险性。

翼状胬肉；免疫组化；抗原修复

免疫组织化学利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色以确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），并对其进行定位、定性及定量的研究，是医学中常用的研究方法。抗原修复是免疫组织化学染色过程中的关键一步，对以后的抗原抗体结合及染色剂结合都有较大影响。抗原修复有许多方法，微波修复比较常用。但在翼状胬肉的免疫组织化学实验过程中，用3种抗原修复方法包括微波修复、酶修复和高压修复，对翼状胬肉组织中的抗原进行修复，发现经过酶修复的切片不易掉片，且简单易行，现报告如下。

酶修复：滴0.1％胰蛋白酶溶液于玻片上，使溶液完全遮盖组织，室温下放置15 min。

高压修复：先将高压锅里的液体煮沸腾，然后打开高压锅盖，将载有玻片的铁架子置于沸腾的水中，盖好锅盖，待沸腾后再煮2 min，关火，自然冷却约2.5 h。

统计学方法：所有数据采用SPSS 16.0进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；P＜0.05为差异具有统计学意义。进行χ2检验：三者间比较χ2=25.625，P＜0.001差异有统计学意义；微波修复与酶修复间比较χ2=1.753，P＞0.05差异无统计学意义；微波修复与高压修复间比较χ2=14.543，P＜0.001差异有统计学意义；酶修复与高压修复间比较χ2= 22.556，P＜0.001差异有统计学意义。

同一组织蜡块均加抗TGF-βRⅡ（转化生长因子-βⅡ型受体）抗体，各步骤均相同，只是抗原修复方法不同。

资料与方法

微波修复：配枸橼酸100 mL+蒸馏水至1 000 mL，加入搅拌子在搅拌器上混匀，将切片立于塑料架上并置于溶液中，用保鲜膜封顶，扎4个眼，平放于微波炉中，依次经高火9 min，低火9 min，取出来自然冷却约2.5 h。

结果

结果判断：将掉片面积大于整张片子的1/2记为掉片。

3种抗原修复法的掉片记录：①微波修复：染色片子数30，掉片数9，掉片率30％。②酶修复：染色片子数20，掉片数2，掉片率10％。③高压修复：染色片子数20，掉片数17，掉片率85％。

用统计学软件SPSS 13.0对所得结果

讨论

翼状胬肉表现为呈翼状增厚的球结膜组织病变，其头部侵袭性生长入角膜，体部位于睑裂区的一侧，是眼科的常见病、多发病，发病机制仍不清楚[1-5]。在对其组织进行免疫组织化学加抗TGF-βRⅡ抗体的实验过程中，发现不同抗原修复方法所得切片效果不同，对其掉片率进行χ2检验结果表明，三者间比较差异有统计学意义；二者间比较只有微波修复和酶修复之间差异没有统计学意义，余差异均有统计学意义，提示微波修复法和酶修复法优于高压修复法。

在实际操作中进一步体会到：经过酶修复的切片掉片率少，小于另两种修复法；不需要微波炉、高压锅和枸橼酸工作液等，只用消化酶和一个孵育盒即可，操作简单；少了微波修复和高压修复后冷却2个多小时这一步骤，节省时间；不接触电源，没有危险性。因此，我们得出结论：酶修复是翼状胬肉组织抗原修复的较理想方法。

[1] 葛坚，赵家良，崔浩，等.眼科学（供8年制及7年制临床医学等专业用）[M].北京：人民卫生出版社，2005.

[2]Solomon AS.Pterygium[J].British Journal of Ophthalmology，2006，90（6）：665-666.

[3]刘阳.翼状胬肉发病机制的研究[J].国外医学眼科学分册，1999，23（4）：204-212.

[4]Nolan TM，DiGirolamo N，Sachdev NH，et al. The Role of ultraviolet irradiation and heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the pathogenesis of pterygium[J].American Journal of Pathology，2003， 162（2）：567-574.

[5]Peng Lü，Xiaoming Chen.Prevalence and risk factors ofpterygium[J].International JournalofOphthalmology，2008，8（5）：871-874.

Exploration of the application of enzymatic repair method in pterygium immunohistochemistry

Zhang Chuntao，He Yuan，Jia Jun
The Second Affiliated Hospital of Shanxi Province Xi'an Medical University 710038

Foundation item Xi'an Medical University School Level 12FZ07

Objective：To explore the advantages and disadvantages of received section of 3 antigen repair methods in the pterygium immunohistochemical dyeing process.Methods：The serial sections of pterygium organization wax block were given anti TGF-ΒrⅡantibody and dye by using three different antigen repair methods，including microwave repair，enzymatic repair and high-pressure repair.Results：The differences were statistically significant between the three methods（P＜0.05）.The differences between microwave repair and high-pressure repair，enzymatic repair and high-pressure repair were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：The best choice of organization antigen repair for pterygium organization is enzymatic repair method.It has less chip shell.Iis simple and easy，and no danger.

Pterygium；Immunohistochemistry；Antigen repair

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.16.3

西安医学院校级项目12FZ07