2014年度风疹病毒IgM抗体检测试剂盒国家监督抽验质量分析

【作　者】于　婷，曲守方，张小燕，孙　楠，高尚先，李海宁，黄　杰

1 中国食品药品检定研究院体外诊断试剂一室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京市，100050

2 江苏省医疗器械检验所，南京市，210022

2014年度风疹病毒IgM抗体检测试剂盒国家监督抽验质量分析

【作者】于婷1，曲守方1，张小燕2，孙楠1，高尚先1，李海宁1，黄杰1

1 中国食品药品检定研究院体外诊断试剂一室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京市，100050

2 江苏省医疗器械检验所，南京市，210022

目的 对风疹病毒IgM抗体检测试剂盒进行国家监督抽验，评价其质量现状。方法 采用法定检验结合探索性研究，对阴阳性符合率、检测限和重复性项目进行检验，结果 法定检验显示16批次中15批次合格（93.8%），不合格项目为阴性符合率；探索性研究中仅11批次满足行业标准要求（68.8%），不合格项为阳性样本符合率、检测限和重复性。结论 目前上市的风疹病毒IgM抗体检测试剂盒存在一定的质量问题，建议今后在注册检验中，统一采用行业标准和国家参考盘，以促进企业改进产品质量。

风疹病毒IgM抗体检测试剂盒；国家监督抽验；质量分析

风疹病毒（Rubella Virus，RV）属于疱疹类病毒中的披膜病毒科风疹病毒属，为单链RNA病毒。人群对其普遍敏感，是其唯一自然宿主。RV主要通过呼吸道传播，潜伏期约2～3周[1-2]。临床表现类似麻疹，但较麻疹感染症状轻，感染的成年人，预后良好。RV对人类健康的最大威胁是它的致畸性，RV感染孕妇可对胎儿产生先天性的损害，尤其是妊娠前12周，病毒可经过血液传播侵犯胎儿，导致自发流产、死产或胎儿感染[3-4]；被风疹病毒感染的胎儿会有严重的出生缺陷，包括白内障、耳聋、心脏病或智力低下等，这些被称为先天性风疹综合征。据报道，母体感染发生在受孕后的8周，会影响胎儿多种器官的发育，致畸率100%。风疹病毒可以通过注射疫苗来预防，但是一旦感染，就没有特效的治疗方法，因此，近几年风疹病毒的检测作为优生优育项目之一，应用范围越来越广[5]。

临床上通过检测孕妇血清中风疹病毒IgM抗体，以确定新近感染或急性感染。目前人体血清中风疹病毒IgM抗体的检测主要有酶联免疫法、化学发光法、胶体金法和时间分辨免疫荧光法，前两种方法试剂盒为主流产品。风疹病毒IgM抗体检测试剂盒生产企业众多，在试剂原材料选择和参考品制备方面存在差异，导致质量参差不齐，因此为了加强对风疹病毒IgM抗体检测试剂盒的监督管理，规范市场秩序，保障产品使用安全有效，2014年6月中国食品药品检定研究院起草了《风疹病毒IgM抗体检测试剂盒抽验方案》，并于2014年10月中旬前完成检验检测工作，现将抽验情况及结果汇报如下。

1　仪器与试剂

仪器 酶标仪（型号：MULTISKAN MK3，美国热电公司）；全自动化学发光免疫分析仪（型号：Liaison XL型，DiaSorin S.p.A公司）；化学发光免疫分析仪（型号：MP280，北京泰格科信生物科技有限公司），化学发光仪（型号：Maglumi 2000，深圳市新产业生物医学工程股份有限公司）；化学发光微粒子免疫分析仪（型号：ARCHITECT i2000，Abbott Ireland Diagnostics Division公司）。

参考品 风疹病毒IgM抗体国家参考品：批号：360006-201101，由19份样品组成，包含5份阳性参考品、10份阴性参考品、1份重复性参考品和3份最低检测限参考品，均由中国食品药品检定研究院提供；企业参考品均由各企业提供。

样品 本次抽验共收到来自14家生产企业的17批次试剂，其中酶联免疫类试剂13批次，化学发光类试剂4批次。样品中，国产试剂15批次，进口试剂2批次；主要抽自生产企业15批次，仅2批次抽自使用单位（临床医院）。

2　检验依据和方法

法定检验 按照企业产品注册标准，采用企业参考品，对各试剂进行检测，检验项目包括阳性符合率、阴性符合率、重复性和检测限。各项目要求参见各标准。试验中操作步骤严格按照各自说明书进行。

探索性试验 按照风疹病毒IgM抗体检测试剂盒行业标准，采用风疹病毒IgM抗体国家参考盘，对各试剂进行检测，检验项目同法定检验。各项目要求分别如下： 5份RV IgM抗体阳性参考品，应不得出现假阴性（阳性符合率）； 10份RV IgM抗体阴性参考品，应不得出现假阳性（阴性符合率）；重复性参考品应检测为阳性，且批内精密度变异系数（CV%）应不大于15.0%（精密度）； 3份最低检测限参考品，L1和L2应能检出（检测限）。试验中操作步骤严格按照各自说明书进行。

3　检验结果

除1批次试剂盒因企业不提供参考品，无法进行检验予以退检，其余16批试剂结果如下：

法定检验 按照企业产品注册标准和企业参考品进行检验，16批次中15批次试剂的阴、阳性符合率、检测限均满足要求，合格率为93.8%。批内精密度变异系数在1.6%～7.3%范围内，均小于10.0%。1批次试剂部分阴性样本出现阳性结果，阴性符合率不符合规定，判为不合格。

探索性试验 采用行业标准和国家参考品进行检验，16批次中仅11批次试剂合格，合格率为68.8%，5批次不合格试剂主要不符合项及表现分别为：重复性参考品检测结果为阴性（5批次）；检测限参考品L1～L3均为阴性或者L2～L3均为阴性（3批次）；阳性参考品P1～P5均为阴性（1批次）。

4　讨论

国家食品药品监督管理总局网站上的信息统计结果显示，截止至2015年1月，风疹病毒IgM抗体检测试剂盒国产注册证28个，进口注册证14个。主要为酶联免疫法试剂盒，其次为化学发光法试剂盒。国产生产企业为24家，主要集中北京和广东省，其余散布于浙江、河南、福建和山东。进口代理企业有12家，分布于上海、北京和广东省。此次监督抽样仅抽取了来自5个省市的生产企业或使用单位的试剂，共计14家企业的17批产品，抽样生产或代理企业仅占38.9%。建议今后加大抽验力度，完善和优化抽样模式，使抽验产品可以反映该类产品的真实情况，抽验结果可以成为有效的参考数据。

法定检验中，依据企业注册标准和企业参考品进行检测，1批次试剂不合格，阴性参考品检测结果为阳性，其产生的主要原因可能是：①阴性参考品在分装的时候被污染了；②与同种属病毒发生交叉反应；③与其他抗体类型如IgG等发生交叉反应；④阴性参考品在分装的时候被污染，或者分装错误。

风疹病毒IgM抗体已有国家参考品和行业标准（YY/T 1235—2014），故本次监督抽验中还开展了探索性实验，参照行业标准要求，以国家参考品为样本进行检测。在探索性研究实验中，不合格批次上升至5批次，合格率下降至68.8%。主要体现为假阴性表现，其产生的主要原因可能是：①企业选择的风疹病毒IgM抗体的配对抗原或抗抗体，亲和力不足，在识别风疹病毒IgM抗体的时候，识别效率低；②包被的抗原或抗抗体浓度较低；③企业检测限或灵敏度参考品设置不合理，导致试剂盒质量无法保证。

通过对此次监督抽验结果的分析，我们认为，由企业提供企业参考品进行注册检验，在判定产品合格方面存在着一定的风险。因为检验机构无法有效确认企业参考品信息的真实性，难以进行合理的监督和管理。建议今后检验机构采用国家参考品进行注册检验，企业则尽量采用国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品，用于试剂的质量控制。因为国家参考品来源信息清楚，多种方法确认并经协作标定，质量可靠，判断标准客观公正。

同时，我们发现企业注册标准也存在以下问题：①2家企业产品注册标准中缺少关键性条款——检测限 而检测限是反映试剂可检测的最低样本浓度，是判断试剂敏感性、关系产品质量的重要指标之一，不应省略，故建议在延续注册时，补充该条款。②标准中条款内容措辞不严谨或不完整 如“生产企业最低检测限参考品应不低于1:800倍稀释”，这句话从字面的理解，只是描述了最低检测限参考品的情况，并没有说明对检测限项目的要求，此即措词不严谨，应有明确的限定：“生产企业最低检测限参考品1:800倍稀释后，应能检出”。又比如下面这项对最低检出限的描述：“系列稀释度参考品S1～S5（系列稀释度从1:2～1:32）：S1～S3须检测为阳性，S4可检测为阴性或阳性”，缺少S5的检测结果。此即措词不完整，应增加：“S5检测应为阴性”。以上问题虽非原则性问题，但企业在制定标准时，应遵循科学、严谨、准确、完整的基本原则。③标准项目表述不一 本次抽验检测4个项目，各项目表述五花八门，如阳/阴性参考品符合率、阳/阴性符合率、阳/阴性样本符合率等；而对于检测限，也有灵敏度、最低检出限、最低检出量等多种表述；同样，精密度、精密性、重复性、批内不精密性、批内精密度、分析内精密度。虽然这些表述都无原则性错误，但建议今后的企业标准项目的书写应参考行标表述，规范用词。

针对本次监督抽验中发现的问题，建议将监督抽验工作作为一项延续性的工作，对问题原因进行深入分析，促使企业改进产品质量，之后再次启动风疹病毒IgM抗体检测试剂盒的监督抽验，在不同年度通过连续跟踪的方式动态评价其质量变化，最终达到促进企业提高产品质量的目的。

[1] 马静, 郝利新, 罗会明. 风疹病毒及其免疫策略研究进展[J]. 中国疫苗和免疫, 2010, 16(1): 69-71.

[2] Goodson JL, Masresha B, Dosseh A, et al. Rubella epidemiology in Africa in the prevaccine era, 2002-2009[J]. J Infect Dis, 2011, 204 (Suppl) : S215-225.

[3] 崔晓榕. 浅谈风疹病毒对孕期的危害及其预防[J]. 中国伤残医学, 2013, 21(12): 388-388.

[4] 龙训琴, 刘韧, 高建萍, 等. 孕妇血清风疹病毒抗体IgM检测的临床意义[J]. 临床医药文献杂志, 2014, 1(9): 1481-1482.

[5] 索庆丽, 胡晞江, 姚婷. 36254例妊娠期孕妇风疹病毒感染状况分析[J]. 重庆医学, 2012, 41(32): 3380-3382.

The Quality Analysis of National Supervising Sampling for Rubella Virus IgM Diagnostic Kits in 2014

【 Writers 】YU Ting1, QU Shoufang1, ZHANG Xiaoyan2, SUN Nan1, GAO Shangxian1, LI Haining1, HUANG Jie1
1 The 1st Department of In Vitro Diagnostic Products, NIFDC, Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Product, Beijing, 100050
2 Jiangsu Institute of Medical Device Testing, Nanjing, 210022

Objective To evaluate the quality status of rubella virus IgM diagnostic kits by national supervising sampling. Methods Using legal inspection combining with exploratory study, the positive and negative coincidence rate, detection limit and repeatability of kits were verified. Results The results showed that 15 of 16 batches of kits were qualified using legal inspection, and the passing rate was 93.8%. The unqualified item was negative coincidence rate. In exploratory study, only 11 batches (68.8%) complied with industry standard. The unqualified items were negative coincidence rate, detection limit and repeatability. Conclusion At present, rubella virus IgM diagnostic Kits have some quality problems in the market. It is recommended that we adopt industry standard and national reference panel in the registration inspection for the future, which will prompt enterprises to improve quality.

rubella virus diagnostic kit, national supervision, quality analysis

R450；TH771

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2015.04.013

1671-7104(2015)04-0282-03

2015-03-26

国家高技术研究发展计划( 863 计划) (2011AA02A115)

于婷，E-mail: yuting@nifdc.org.cn

黄杰，E-mail: jhuang5522@126.com