老年急性淋巴细胞白血病患者免疫表型差异

刘艳春 (唐山市工人医院血液科，河北 唐山 063000)

急性淋巴细胞白血病老年发病率仅占14%〔1〕。由于老年人主动接受诊断的人较少，且缺乏快速准确的诊断方法，故老年急性淋巴细胞白血病常常被人们忽视。急性淋巴细胞白血病免疫分型包括B型、T型和B/T混合型，不同年龄阶段细胞表面分子特征不一样，可为老年急性淋巴细胞白血病诊断提供依据〔2〕。本文拟分析老年急性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞表型，从中找出老年患者的发病特征，为临床诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 资料和标本 选择2011年1月至2013年11月来我院接受治疗的老年急性白血病患者55例，纳入标准〔3〕:(1)骨髓穿刺，骨髓涂片结果为阳性;(2)免疫分型检测诊断为急性白血病;(3)生化检查血清乳酸蛋白和血尿酸水平均升高;(4)外周血涂片以原始和幼稚淋巴细胞为主，骨髓象有白血病细胞;(4)年龄≥60岁。排除标准〔4〕:(1)年龄＜60岁;(2)伴发其他类型的白血病;(3)有家族遗传史;(4)外周血涂片未见原始和幼稚淋巴细胞。男27例，女28例，平均年龄(68.2±11.7)岁。抽取所有患者静脉血，并且分离外周血淋巴细胞进行流式细胞仪分析。

1.2 外周血淋巴细胞制备 将外周血用完全1640按1∶2稀释，然后轻轻加到分离液(货号:170891-01，Pharmacia)上，注意不要将两者混合，比例是2∶1。1 500 r/min离心10 min，20℃ ～25℃。可见分为三层，中间一层白色为淋巴细胞。轻轻吸取淋巴细胞层(不吸取下面的分离液)，加入到6～8 ml 1640中洗脱;1 500 r/min离心10 min;去掉上清，加6～8 ml 1640再洗脱;1 500 r/min离心10 min，去上清，用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬底部细胞即为外周血淋巴细胞。

1.3 流式细胞检测 所有患者的细胞用PBS重悬使细胞浓度为1×106/ml，然后用3%的甲醛固定，PBS洗涤3次后，按照一定体积加入相应的抗体，37℃孵育1 h，然后PBS洗涤3次后上机检测。所有荧光标记的抗CD3(货号:ab1669)、CD2(货号:ab131276)、CD4(货号:ab25475)、CD7(货号:ab3121)、CD5(货号:ab24873)、CD19(货号:ab31947)、CD79a(货号:ab3121)、CD20(货号:ab9475)和 CD10(货号:ab951)、Ig(SmIg)(货号:ab10558)单克隆抗体均购于Abcam公司。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，计数资料均采用χ2检验。

2 结果

2.1 淋巴细胞免疫表型情况 55例老年急性白血病患者中有35例(63.64%)是B型淋巴细胞白血病，9例(16.36%)T型(CD4)淋巴细胞白血病，11例(20.00%)B/T混合型淋巴细胞白血病，其中B型显著多于T型(χ2=25.606，P=0.000)。

2.2 B型免疫表型分化抗原情况 55例老年急性白血病患者中有46例表现出B型淋巴细胞分化抗原表达异常，B型淋巴细胞分化抗原表达异常患者中有33例(71.74%)CD19阳性，18例(39.13%)CD79a阳性，2例(4.35%)CD20阳性和3例(6.52%)CD10阳性。

2.3 T型免疫表型分化抗原情况 55例老年急性白血病患者中有20例表现出T型淋巴细胞分化抗原表达异常。T型淋巴细胞分化抗原表达异常患者中有5例(25.00%)CyCD3阳性，19例(95.00%)CD2阳性，18例(90.00%)CD4阳性，2例(10.00%)CD7阳性，2例(10.00%)CD5阳性。

3 讨论

临床上，急性淋巴细胞白血病典型病例的诊断主要是通过病史、血象(粒细胞、单核细胞和淋巴细胞比例)和骨髓象(骨髓涂片和细胞化学)等进行〔5〕，但有些病例常常被误诊，特别是老年淋巴细胞白血病病例〔4〕。不易确诊的病例常与贫血、恶性肿瘤骨髓瘤、风湿性类风湿、传染性单核细胞增多症、传染性淋巴细胞增多症等疾病难以区分，误诊率较高。近年来，免疫分型成为诊断急性细胞白血病的一种新的有效诊断方法，根据免疫分型，可将急性淋巴细胞白血病分成B型急性淋巴细胞白血病(CD19、CD22、CD79a、CD10阳性)和T型急性淋巴细胞白血病(CD3、CD7、CD4、CD8阳性)，且这种诊断方法已经得到广泛应用〔6～8〕。此外，以往骨髓象诊断的标本是通过骨髓穿刺取骨髓标本进行分析，给患者带来巨大痛苦;而免疫分型只需要抽取外周血进行分析，简单易行，在很大程度上减少了患者的疼痛。

免疫系统中淋巴细胞(B和T细胞)除在脾和淋巴系统外，还大量游离于外周血中，这提示外周血淋巴细胞表型可能也能反映淋巴细胞免疫分型。陶慧等〔9〕发现B类型和T类型比例无显著差异，且CD34表型为主。马顺高等〔10〕分析所有淋巴细胞均表达淋巴系抗原。巫翠萍等〔7〕对35例急性淋巴细胞白血病患者研究发现22例为B型，13例为T型，且B型主要以CD19为主，T型主要以CD7为主。但较少人对老年急性淋巴细胞白血病淋巴细胞表型特征进行分析，本研究发现老年急性淋巴细胞白血病主要以B型类型为主，且以CD19和CD79a阳性为主。揭示了老年急性白血病患者免疫表型特征，为老年急性白血病诊断提供了科学参考。

综上所述，本文较系统地分析出了老年急性淋巴细胞白血病淋巴细胞免疫表型特征，但研究对象数量较少，还需要收集更多患者的外周血淋巴细胞进行分析。但可初步表明对老年患者外周血淋巴细胞免疫表型的检测分析可能会成为一种快速老年急性淋巴细胞白血病的潜在诊断方法。

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5 中华医学会血液学分会，中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会.中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗专家共识〔J〕.中华血液学杂志，2012;33(9):789-92.

6 王颖超，殷楚云，徐学聚，等.儿童急性淋巴细胞白血病128例免疫分型〔J〕.郑州大学学报(医学版)，2009;44(6):1238-41.

7 巫翠萍，覃 西，巫翠云，等.急性淋巴细胞白血病的免疫分型及CD4+CD25+T调节细胞检测〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2011;15(45):8487-90.

8 姚丹丹，张航帆，戴海滨.急性淋巴细胞白血病免疫表型的研究及其临床意义〔J〕.哈尔滨医科大学学报，2012;46(2):128-31.

9 陶 慧，徐 杰，何海龙.73例儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型特点〔J〕.苏州医学院学报，2000;20(9):866-70.

10 马顺高，何秋阳，杨国顺，等.细胞免疫表型检测在急性淋巴细胞白血病诊断中的应用价值〔J〕.中国医药导刊，2008;10(8):1245-6.