畜禽血液采集、血清分离及保存技术

陈正林

（安龙县动物疫病预防控制中心，贵州安龙 550024）

畜禽血液采集、血清分离及保存技术

陈正林

（安龙县动物疫病预防控制中心，贵州安龙 550024）

随着畜禽养殖业的迅速发展，交通运输便利，畜禽交易半径扩大，畜禽疾病流行机会增加，提高了动物疫病防控难度。在疫病防控工作中，仅靠流行病学、临床症状、病理剖检等手段已经不能对疫病做出准确的诊断，兽医实验室诊断技术已成为判定动物疫病的重要依据。各级加强了兽医实验室能力建设，对动物血液样品的采集、制备与保存有较高的要求，所以，畜禽血液的采集、血清的规范分离、保存是获得准确的实验室诊断、监测结果、疾病确诊的基础，对及时做出诊断结论，迅速采取相应防控措施，扑灭疫情和控制疫情至关重要，同时，进行免疫效果监测，评估畜禽群体免疫抗体水平，及时为养殖户提供免疫技术指导，加强畜禽疫病免疫工作，保护养殖安全具有重要意义。

1 采血用具准备

止血钳2把（消毒）、毛剪2把（消毒）、酒精、碘酒、棉球、一次性采血器（10 ml）或真空采血管（含有抗凝剂，使用量根据采血数量准备）、1.5～2 ml弹头离心管、胶布、记号笔1支、口罩、白大褂、瓷盘（消毒）、消毒药等。

2 畜禽血液的采集方法

采血过程中应严格保持无菌操作。

2.1 牛、羊血液的采集方法

2.1.1 牛、羊颈静脉采血

将被采血动物保定，稍抬头颈，于经脉沟上1/3与中1/3交界部剪毛消毒，一手拇指按压采血部位下方颈静脉沟血管，使静脉怒张，另一手持针头，与皮肤呈45°，由下向上斜刺入，插入真空采血管，待血量达到要求后，拔下针头，用消毒棉球按压针眼，轻按止血，立即将采血管轻轻倒置使血液与抗凝剂混合，静置15 min，待血液凝固后分离血清。

2.1.2 牛尾静脉采血

固定牛，使牛尾往上翘，在尾部约30 cm处用手握住，离尾根10 cm左右中点凹陷处，先用酒精棉球消毒，然后将采血针垂直刺入（约1 cm深），针头触及尾骨后再退出1 mm进行抽血，采血结束，消毒并按压止血。

2.2 猪血液的采集方法

2.2.1 耳静脉采血

耳静脉采血 一般用于体格较大的猪。保定后，耳部消毒灭菌，以手指压迫心端耳部静脉，使血管怒张，针头刺入血管采集血液。针头刺入血管后，动作要轻柔，采血要缓慢，否则血液不回流使静脉瘪陷而采不到血液。

2.2.2 前腔静脉采血

前腔静脉采血方法，比耳静脉采血节约时间，而且采出的血样卫生干净。猪的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，要求使用的针头是不一样的，针头太短，刺不到前腔静脉，针头太长，则可能刺穿前腔静脉，采不到血。一般75～100 kg公母猪宜选用16#×40 mm针头；30 kg以上的中大猪，宜选用12#×30 mm针头；10～30 kg小猪，可选用12#×25 mm；10 kg以下乳猪，应选择9#×20 mm针头。

猪只的固定：猪用保定绳固定，要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈30°以上角度，方便采血人员察看采血部位，使前腔静脉向外突出，静脉充胀。25 kg以上的中大猪，由1～2个饲养员用捉猪器（或保定绳）拉住，头昂起，偏向右侧；20 kg以下的小猪，可由1～2个饲养员抓起，倒立，后背紧靠在保定台上，按住头部和四肢。

采血部位：猪的前腔静脉，越往头部越浅，但也越细，越靠胸部越粗，但也越深，所以，采血应选择适当的部位，小猪采血的部位太靠前，血管太小，很难扎中，而且扎中了也很难抽到血液，所以，小猪的采血部位应稍靠后。中大猪和公母猪血管比较大，往后太深，针头够不到血管，所以，应略靠前。根据经验，25 kg以下的小猪采两前肢与气管交汇处，25 kg以上中大猪可选颈部最低凹处，对准下针部位，使针头偏向气管约15°方向下针，拉紧针筒活塞，若扎中，可见血液流出。在工作中，操作熟练后，针头有没有扎中，凭手是可以感觉得到的，当针头扎破静脉壁时，可以感觉得到轻微“卟”的一声。

2.3 鸡血液的采集方法

在工作中常用的有心脏采血法和翅静脉采血法

2.3.1 鸡心脏采血法

右侧卧保定，在左侧胸部触摸心搏动最明显的地方进行穿刺，连接注射器采取血液。成年鸡心脏穿刺部位从胸骨峭前端至背部下凹处连接线的1/2处，用细针头在穿刺部位与皮肤垂直刺入约2～3 cm即可。家禽品种和个体大小不同进针位置和深度不同要作适当调整。心脏采血可大量采血，但不宜连续使用，因有一定的死亡率。

2.3.2 鸡翅静脉采血法

翅静脉位于家禽翅膀下，此静脉明显易找，可采血10～20 ml，操作方便，单人即可完成，采血量极易控制，止血彻底，对家禽影响小。方法是技术人员右手持注射器或采血针，左手将家禽双翅提起，露出翅静脉的采血位置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管。采血时用左手大拇指夹住覆盖静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针，针头在距静脉血管0.3～0.5 cm一旁倾斜刺入皮肤，再与血管平行进针0.2～0.4 cm后刺入血管，见有少量回血即可采集血液，采血完成后马上用手压迫止血。

3 血清的分离及保存

3.1 血清分离

在采血器内加入适量的抗凝剂或直接选择抗凝管，采血后，轻轻倒置采血器，使抗凝剂与血液充分混匀，将采集的血液样品置室温0.5 h，待血液凝固后用离心机2 000～3 000 r/min离心5～10 min分离血清，上清液即为血清，用干净吸管收集血清于清洁无菌的1.5～2 ml弹头离心管中，贴上标签备用。如血清溶血严重，应剔出样品。

3.2 血液样品的保存与运输

（1）若能在4 h内送到实验室，可用保温箱冰袋冷藏运输。如果超过4 h，要作冷冻处理，应先将样品置于-20 ℃冻结，然后再在保温箱内加冰袋运输，经冻结的样品必须在24 h内送到。

（2）样品置于保温容器中运输，保温容器必须密封，防止渗漏，保温容器外贴封条，封条有贴封人（单位）签字（盖章），并注明贴封日期。

4 采血、分离血清注意事项

（1）采血前，应事先通知被采血单位或农户，做好清洁卫生、消毒工作，准备好被采血动物。

（2）认真填写动物疫病检（监）测采样表。

（3）采血用的试管必须清洁无菌，最好用一次性真空采血管，每采集一头（只）动物，必须更换采血针头。

（4）每头（只）动物采血量必须在3 ml以上，采完血的试管必须按规定编号，然后静置10～15 min，使血液凝固，才能带走。

（5）在血清还没有析出前，不能把所采血液放入冰箱，以免红细胞破裂发生溶血现象，待血清析出或分离后，要在24 h内把血清倒入1.5～2 ml弹头离心管内，并按原编号编好号，若不能立即做检（监）测试验，把分离好的血清冷冻保存。