宫颈病变患者HPV-DNA、IL-17检测的临床意义及其相关性

周 辉，陈小兰

(衢州市柯城区妇幼保健院检验科，浙江 衢州 324000)

宫颈病变患者HPV-DNA、IL-17检测的临床意义及其相关性

周 辉，陈小兰

(衢州市柯城区妇幼保健院检验科，浙江 衢州 324000)

目的 探讨宫颈病变患者人乳头状瘤病毒DNA(HPV-DNA)、白细胞介素17(IL-17)检测的临床意义及其相关性。方法 2011年5月至2013年5月从衢州市柯城区妇幼保健院收治的宫颈病变患者中随机选择60例检测其宫颈组织中HPV-DNA和IL-17含量。结果 60例宫颈病变患者中，HPV呈阴性的患者占41.67%(25/60)，阳性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)为宫颈癌患者，3组构成比无显著性差异(χ2=12.21，P>0.05)。HPV阳性组和宫颈癌组的IL-17水平均显著高于阴性组(t=8.11，11.13，P<0.05)，阳性组和宫颈癌组比较，无显著性差异(t=2.15，P>0.05)。结论 IL-17和宫颈癌的发生发展有一定相关性，临床对宫颈癌进行诊断和治疗以及预后判断时，可以积极的对患者进行高危HPV联合IL-17水平检测。

宫颈病变；人乳头状瘤病毒DNA；白细胞介素17；相关性

宫颈病变是妇科疾病中常见的疾病，其对女性生殖健康危害较大。因此，有效的检测方法对提高此病诊断、治疗和预后效果至关重要[1-2]。本研究通过对60例宫颈病变患者进行检测人乳头状瘤病毒DNA(humna panillmoa virus DNA, HPV-DNA)、白细胞介素17(interleukin 17, IL-17)含量，以探讨两者的临床意义及其相关性。

1 材料和方法

1.1 材料

从衢州市柯城区妇幼保健院2010年5月至2013年5月收治的宫颈病变患者中随机选择60例进行研究，年龄19 ～ 68岁，平均年龄49.12±2.33 岁。研究获得医学伦理学相关部门同意，所有患者均了解研究情况，并签署知情同意书，自愿参与研究。利用一次性宫颈细胞取样器进行取样，取样之前要将患者宫颈口过多的分泌物擦拭干净，然后将取样器插入患者子宫颈外口，转动5圈之后将取样器缓慢取出。并放入含有保存液的小瓶中，折断多余刷柄，并旋紧管盖，标注编号之后立即送检。

1.2 方法

使用的仪器为全自动流式细胞分析仪(购自美国贝克曼库尔特有限公司，型号FC 500 MCL/MPL)，DA7600扩增仪，试剂为配套的IL-17PE试剂以及人乳头瘤病毒(HPV)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒(购自深圳康生保生物技术有限公司，S20060039)。

1.2.1 制备标本

将200μL宫颈脱落细胞悬液加入20μL荧光标记抗体IL-17之中，充分振荡混合均匀之后，置于避光、室温条件下进行孵育。20min之后 用0.1mol pH 7.0 PBS×2mL，离心、洗涤，弃去上清液之后，加入500μL PBS充分振荡混合均匀之后，制成悬浮细胞备用。

1.2.2 流式细胞术测定

利用全自动流式细胞仪的CELLQuest功能获得数据分析，以波长512nm，15mW的氩离子激光作为光源，利用标准荧光微球进行仪器校对之后，保持半峰变异系数小于2%。利用前向角散射光对侧向角散射点图来对淋巴细胞群进行确定，得出IL-17 PE的表达，并以百分比表示。同期，利用同一患者的宫颈细胞标本，不予处理，进行自身阴性对照。

1.2.3 人乳头状瘤病毒DNA检测

利用多重PCR法进行HPV-DNA检测。取适量宫颈脱落细胞，进行5min的13 000rpm离心，弃去上清液之后，加入DNA提取液50μL，并置于100℃环境下进行10min干浴。然后进行10min的13 000rpm离心。取上清液进行PCR扩增，不同温度下的反应条件分别为：50℃、2min，95℃、10min，1循环；95℃、15s，52℃、30s，62℃、60s，40循环。 以36为临界阳性Ct值，利用仪器分析样本的Ct值，并按照说明书上的方法对结果进行判定。

1.3 统计学方法

采用SPSS 15.0统计软件对研究所得数据进行统一的录入和分析，计量资料采用t检验，并用 表示，计数资料采用χ2检验。以P<0.05定为结果有统计学差异。

2 结果

2.1 人乳头状瘤病毒检测结果分析

在60例宫颈病变患者中，HPV呈阴性的患者占41.67%(25/60)，阳性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)为宫颈癌患者，3组构成比无显著性差异(χ2=12.21，P>0.05)，见表1。

表1 HPV检测结果

Table 1 Results of HPV detecting

2.2 白细胞介素17水平分析

将患者按照HPV检测结果分为阳性组和阴性组以及宫颈癌组，检测其IL-17水平可得，阳性组和宫颈癌组的IL-17水平显著高于阴性组(t=8.11，11.13，均P<0.05)，阳性组和宫颈癌组比较，无显著性差异(t=2.15，P>0.05)，见表2。

注：▲为与阴性组比较，P<0.05。

3 讨论

3.1 人乳头状瘤病毒DNA与宫颈癌

宫颈的人乳头瘤病毒(humna panillmoa virus，HPV)感染是诱发宫颈癌的重要因素之一，大多数宫颈癌患者均可检测到HPV。因此，HPV检测是临床筛查宫颈癌有效方法。多数女性一生中可感染HPV，但并非所有的HPV感染都会导致宫颈癌的出现。HPV按照其致病力可分为高危和低危两种类型。其中，高危HPV大多会导致宫颈癌，而低危HPV导致的一些感染大多属于“一过性”，会导致扁平湿疣等[3]。

3.2 人乳头状瘤病毒DNA和白细胞介素17应用于宫颈病变的检测

IL-17是一种前炎症细胞因子，它是由Th17细胞高水平分泌，和其他一些细胞亚群，例如Th1、Th2还有Treg存在较大的差异[4]。研究发现，IL-17会诱发涉于炎症相关的多种趋化因子和细胞因子的产生，因此具有较强的促炎作用，和人体很多炎症性疾病以及自身免疫疾病之间存在较为密切的关系。

本研究中选择了60例宫颈病变患者进行研究，检测其HPV-DNA、IL-17含量，研究结果显示，IL-17在HPV阳性患者以及宫颈癌患者中的表达显著高于HPV阴性组(P<0.05)，提示IL-17的高表达可能参与了宫颈癌的发生和发展。分析原因，一方面是因为IL-17 可以促肿瘤血管的生成；另一方面，IL-17并不直接促进血管内皮细胞的生长，但会对血管内皮细胞的迁移产生促进作用，从而使得由成纤维细胞或肿瘤细胞生成的前血管生成因子表达明显上调。另外，IL-17还可以对肿瘤细胞表达IL-6产生较强的刺激，从而诱导巨噬细胞募集，并对肿瘤细胞表型进行调节，促使其生长快速一致[5]。有学者报道IL-17具有促肿瘤血管生成的作用有关，也与IL-17虽然不直接促进血管内皮细胞生长，但可促进血管内皮细胞的迁移，明显上调由成纤维细胞或肿瘤细胞生成的前血管生成因子表达和IL-17通过刺激肿瘤细胞表达IL-6，诱导巨噬细胞募集及调节肿瘤细胞表型，使其生长快速[6]，这与与本研究结果IL-17在宫颈癌组和HPV阳性组表达增高一致，提示IL-17的高表达参与了宫颈癌的发生发展过程，其在宫颈癌的诊断、治疗及预后判断方面具有一定的价值。

综上所述，IL-17和宫颈癌的发生发展有一定的相关性，对宫颈病变患者应进行高危HPV联合IL-17水平检测，以提供宫颈癌在早诊断率。

[1]张哲雄,徐承来,曹永涛,等.高危型人乳头状病毒和IL-17在宫颈病变患者宫颈脱落细胞中表达的相关性和临床意义[J].中国实验诊断学,2012,16(2):252-254.

[2]Salih M M,Sail M E,Hart K,elal.Genotypes of human papilloma virus in Sudanese women with cervical pathology[J].Infect Agent Cancer,2010,5:26.

[3]康慧杰,王金桃,高晨菲,等.DNA甲基转移酶1与甲基-CpG-结合蛋白2异常表达在宫颈病变中的作用及相互关系[J].中华流行病学杂志,2013,34(12):1223-1227.

[4]苏艳霞.北京密云地区妇女宫颈病变与人乳头瘤病毒感染相关性研究[J].中国妇幼健康研究,2012,23(2):232-234.

[5]唐艳,张静,房春玉,等.丰台区已婚妇女宫颈病变与HPV感染的分析[J].中国妇幼健康研究,2011,22(4):418-419,422.

[6]Dogan N U, Salman M C, Yuce K.The role of HPV DNA testing in the follow-up of cervical intraepithelial neoplasia after loop electrosurgical excision procedure[J].Arch Gynecol Obstet,2011,283(4):871-877.

[专业责任编辑：安瑞芳]

Clinical significance of detecting HPV-DNA and IL-17 in patients with cervical lesion and their correlation

ZHOU Hui, CHEN Xiao-lan

(DepartmentofLaboratory,MaternalandChildHealthHospitalofKechengDistrictinQuzhouCity,ZhejiangQuzhou324000,China)

Objective To explore the clinical significance of human papilloma virus DNA (HPV-DNA) and interleukin 17 (IL-17) detecting among patients with cervical lesions and their correlation. Methods Sixty cases of cervical lesions were selected from the patients admitted in Maternal and Child Health Hospital of Kecheng District in Quzhou City from May 2011 to May 2013, and HPV-DNA and IL-17 contents of them were detected. Results HPV was negative in 41.67% of patients (25/60), HPV was positive in 30.00% (18/60), and the rest were cases of cervical cancer. There was no significant difference in percentage (χ2=12.21,P>0.05). IL-17 level of HPV positive group and that of cervical cancer group was significantly lower than that of HPV negative group (tvalue was 8.11 and 11.13, respectively, bothP<0.05), but there was no significant difference in the level of IL-17 between HPV positive group and cervical cancer group (t=2.15,P>0.05).Conclusion There is certain correlation between IL-17 level and the development of cervical cancer. Detecting of high risk HPV combined with IL-17 level could be done actively at diagnosis, treatment and prognosis judgment of cervical cancer.

cervical lesions; humna panillmoa virus DNA (HPV-DNA); interleukin 17 (IL-17); correlation

2014-03-18

周辉(1982-)，女，检验师，主要从事临床检验研究。

陈小兰，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.04.073

R711.7

A

1673-5293(2015)04-0861-02