某区PCR法检测HPV感染的临床意义及分析

骆跃兴 邓秀美

（福建省南平市第二医院，福建 南平 354200）

某区PCR法检测HPV感染的临床意义及分析

骆跃兴 邓秀美

（福建省南平市第二医院，福建 南平 354200）

目的 探讨闽北建阳区PCR-反向点杂交法在检查患者HPV感染病变中的临床意义及分析。方法 回顾性分析我院检测的1624例HPV感染患者的临床资料，采用PCR-反向点杂交法对病变标本进行HPV分型检测。结果 共进行1624次HPV分型检测，检出感染患者504例，检出率为31.0%，感染较多的是16、52、58、81型，并以高危型感染为主。单种分型感染共346例，两种及以上感染158例。结论 PCR-反向点杂交法在HPV感染的诊断率较高，特异性较强，对闽北地区HPV感染病变的早期发现，判断预后及指导治疗有重要价值。

反向点杂交法；人乳头瘤病毒（HPV）；临床价值

人乳头瘤病毒，简称HPV，是一组病毒的总称。目前，HPV感染的主要途径是性接触，根据感染的部位可以分为皮肤型HPV和生殖道上皮HPV，感染的早期患者的局部皮肤、黏膜通常都会形成疣状增生，像生殖器部位的尖锐湿疣，甚至可能引起宫颈癌的发生。从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变最终发展为宫颈癌大约需要5～10年[1]。在早期通过检测手段发现亚临床及潜伏性HPV感染。本次采用PCR-反向点杂交法对我院就诊HPV感染患者进行HPV分型检测，现总结报道如下。

1　资料与方法

1.1标本来源：回顾性分析建阳区我院检测的1624例HPV感染患者的临床资料，男5例，女1619例，年龄18～56岁，平均年龄（36.2± 4.23）岁，病程为0.5～9个月，平均病程（3.1±0.67）个月，所有患者均有性生活史，均有不同程度的瘙痒，其中男性常见于冠状沟、包皮内板、龟头、系带及肛门周围，女性常见于大小阴唇、阴道口、阴道内及会阴处。

1.2仪器与试剂：高速离心机（Thermo-2），基因扩增仪（Hema9600），恒温杂交仪（YN-H16），各种小型器材，人乳头瘤病毒基因分型（23型）检测试剂盒，包括高危型和低危型，购自亚能生物技术有限公司。

1.3HPV DNA提取与检测

1.3.1标本采集：本次实验的标本为采集患者泌尿道分泌物，外阴赘生物、溃疡处分泌物和组织液等。男性患者用咽拭子采集尿道分泌物，女性患者以专用宫颈脱落细胞采集器（宫颈刷）进行采集，将宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入提取缓冲液管中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，并保持提取缓冲液管直立送检。

1.3.2实验过程：将送检的标本充分洗脱后取1 mL液体转移到离心管中于13000 r/min离心10 min后弃去上清液，加入裂解液悬浮沉淀，沸水浴加热再离心，上清液作提取样本DNA。再进行PCR扩增、杂交、洗膜、显色，并观察结果。每次实验设置一个阴性质控和一个阳性质控，作为质量控制[2]。

1.3.3结果判读：根据膜条上蓝色斑点显现的位置，读取相应位。仅一个基因型位点出现蓝色班点，则为相应基因型单一感染；多个基因型位点出现蓝色斑点，则为相应基因型的混合感染；检测位点无显色信号，则为阴性或低于检测限[3]。

2　结 果

本次检测HPV阳性患者504例（31.0%）。各型均有检测出感染，单型感染患者346例（68.7%）；混合型感染158例（31.3%）；其中高危型381例，占75.6%，高危型感染以16、52、53、58型感染较多；低危型123例，占24.4%，低危型感染以42、43、81型感染较多。

病理诊断显示，12例阴道内损害，呈乳头状，5例小阴唇损害，呈丝状。年龄段情况比较，感染高峰人群为30～39岁，其次20～29岁，达到40岁以后感染率骤然减少，见表1。

3　讨 论

随着社会经济的不断发展，性传播类的疾病发病率越来越高，通过生殖道传播、感染的HPV的概率也不断增多，目前，流行病学和分子生物学的研究结果说明，人乳头状瘤病毒和宫颈癌、癌前病变都存有密切的联系[4]。人乳头状瘤病毒也是引发宫颈癌的主要病毒，虽然感染HPV的患者在临床上没有明显的症状，或处于一种亚临床感染，但是会导致严重的后果发生，病死率较高，严重影响了患者的生活质量。PCR-反向点杂交法通过PCR体外的扩增及DNA反向点杂交技术相结合，分子杂交的特异性较高，属于HPV检测的新方法，提高了检测的敏感性[5]。

本院采用PCR-反向点杂交法可对患者分泌物进行基因分型，了解各型感染情况，总检出率达31.0%。本研究表明HPV感染高峰人群为30～39岁，这可能与此阶段年龄妇女性生活频繁、忽略性行为卫生及个人卫生习惯、生活工作压力大等原因有关，而达到40岁以后感染率又骤然减少。在所有检测HPV型别中，以高危型HPV感染为主。已有研究表明，高危型HPV感染且年轻化是影响宫颈癌发生的发生的重要因素[6]。

PCR-反向点杂交法检测HPV结合临床表现及病理细胞学检查，诊断率高，特异性强，对HPV感染病变的早期发现，判断预后及治疗有重要价值，对降低宫颈癌的发病率有重要的指导意义。

[1] 向华国，黎国，曾锦婷，等.PCR-反向点杂交技术在女性下生殖道人乳头瘤病毒感染分型检测的应用研究[J].国际检验医学杂志，2012，33(8):916-917.

[2] 徐闽，李静，张婷婷，等.人乳头瘤病毒分型联合TCT检测及宫颈活检对宫颈癌早期诊治的临床应用分析[J].河北医药，2014，(6):841-844.

[3] 黄佩芬，陈莲芬，甘钊杏.高危型HPV感染与宫颈癌前病变及宫颈癌的相关性研究[J].中国当代医药，2013，20(9):54-55.

[4] 邵佳，陈曾燕，王洁，等.实时荧光定量PCR检测宫颈癌患者血浆HPV的临床意义[J].中国肿瘤外科杂志，2010，2(5):288-291.

[5] 章涛，李彦，肖瑜.宫颈疾病HPV亚型感染的导流杂交法检测及意义[J].中国妇幼保健，2009，24(8):1126-1129.

[6] 陈昕华，周蓓蓓，虞斌，等.高危型HPV检测在宫颈病变筛查中的临床应用[J].中国妇幼保健，2010，25(7):898-899.

The Clinical Significance and Diagnostic Value of PCR- Reverse Dot Blot Hybridization in HPV Infection Lesions Inspection in North Fujian

LUO Yue-xing， DENG Xiu-mei
（The Second Hospital of Nanping， Nanping 354200， China）

Objective To investigate the clinical significance and diagnostic value of PCR-reverse dot blot hybridization in HPV infection lesions inspection. Method Clinical data of 1624 cases of HPV-infected patients checked in our hospital retrospectively. All the patients used PCR-reverse dot blot hybridization to type test HPV of pathological specimens. Result The 1624 cases of HPV-infected patients type were tested by PCR-reverse dot blot hybridization， there were 504 infected cases， the detection rate was 31.0%. Among them， the infections of 16， 52， 58， 81 type occurred in a higher proportion， and the 346 were high-risk infections， which were most single type of infection. The amount of cases which infected by two or more types was 158. Conclusion PCR-reverse dot blot hybridization is high diagnosis rate in HPV infection and strong specificity， and might be of important significance in early detection of disease infection， diagnosis and guiding treatment.

PCR-reverse dot blot hybridization； HPV； Clinical significance

R737.33

B

1671-8194（2015）34-0089-02