提高种公牛冷冻精液品质的综合措施

王春兰，李贵有，马艳茹，金显栋，王 喆，张继才，亐开兴*（.云南省种畜繁育推广中心冷冻精液站，云南昆明650；.云南省草地动物科学研究院，云南昆明650）

提高种公牛冷冻精液品质的综合措施

王春兰1，李贵有1，马艳茹1，金显栋2，王 喆2，张继才2，亐开兴2*
（1.云南省种畜繁育推广中心冷冻精液站，云南昆明650212；2.云南省草地动物科学研究院，云南昆明650212）

【目的】冷冻精液的品质直接关系到家畜品种改良工作的成效，通过改进和规范冻精制作操作规程，为家畜品种改良生产并提供高品质的冻精。【方法】结合多年从事种公牛饲养管理、采精技术、冻精生产、保存与运输等多方面的工作经验，综合了整体提高牛冷冻精液的质量措施以及相应的关键配套技术。【结果】采用上述措施，本站生产的鲜精精子正常形态率达99%，冻精精子正常形态率为84%，冻精活力提高5%～10%，充分挖掘了种公牛的生产潜力。【结论】通过采用本套技术措施，有效提高了种公牛冻精质量，并且冻精产量增加，冻后品质也有提高。

种公牛；采精技术；冷冻精液；饲养管理

随着科技进步，畜牧业得以迅猛发展，畜牧业已成为我国农业和农村经济的重要产业，近些年来牛冻改技术得到大力推广，冻精改良成为云南省牛品种改良的主导力量，牛冷冻精液的品质好坏，决定着牛冻改的成效与进度，是牛品种改良持续发展的前提。生产优质的冷冻精液成为每个冻精站的首要任务，因此，如何提高种公牛冷冻精液的品质也是冻精站的基本任务，有待不断优化冷冻精液生产中各个环节的有机协调发展，本文就种公牛饲养管理、采精技术、冻精生产、保存与运输等多方面的质量控制措施以及相应的关键配套技术做全面的阐述，以供公牛站同仁借鉴与交流。

1　加强种公牛饲养管理

1.1种公牛的饲养目标

种公牛要求体质健壮，肌肉发达，精力充沛，性欲旺盛，精液品质好，精子耐冻性强。保持适宜的膘情和良好的体况，才能得到良好的精液品质，种公牛不可过肥，也不可过瘦，无草腹，过肥的种公牛性欲较差，过瘦的种公牛精液品质不佳。

1.2种公牛的饲养措施

1.2.1科学的日粮配制，合理的营养搭配 依据种公牛不同生长阶段的营养需求，配制营养全价，适口性好，精、青、粗搭配适当，满足种公牛生长和采精对蛋白质、维生素、矿物质及微量元素的需要量，采精公牛还必须根据精液质量的好坏，及时调整饲料配方。

1.2.2精料的主要营养成分 成年种公牛的饲料必须保证充足的营养，一般混合精饲料中粗蛋白质含量为14%～18%，能量为6.7～7.5M J/kg，粗纤维不高于4%，Ca、P比例为1～2∶1，食盐1%。矿物质、微量元素、维生素是动物生长不可缺少的营养物质，种公牛日粮中含有适宜的矿物质、微量元素、维生素，对精液质量的好坏起着关键性的作用。

1.2.3精饲料配制要求 饲料配制时间过长，容易造成氧化与变质，饲料混合不均匀对饲料的营养成分有很大的影响，对种公牛健康有潜在的危害性，为了保证饲料质量，一般10d左右配一次饲料比较合适。禁止饲喂霉变、有杂质草料，以免影响种公牛的健康，减少疾病的发生，降低种公牛的淘汰率，延长使用年限。

适宜的营养成分对提高精液品质起着关键作用，蛋白质饲料属于生理酸性饲料，过多的喂量会在体内产生大量的有机酸，对精子的形成不利；青贮饲料属于生理碱性饲料，本身含有大量的有机酸，多喂同样会对精子的形成造成影响；维生素、食盐和C a、P等矿物质元素对促进消化机能、维持食欲和精液品质影响很大，必须按照需要适量供给。

1.2.4饲喂量 干草和精料每头每日喂量为种公牛体重的1%和0.4%～0.5%。

1.2.5饲喂方式 喂量根据不同季节温度和牛体况的变化进行凋整，冬季提高能量饲料，夏季减少日粮能量及蛋白质。本站从2014年5月采用全日粮混合机饲喂，临喂前精、青、粗料加适量水用搅拌均匀，经过搅拌后的混合日粮增强了种公牛适口性，每天定时定量分二次饲喂。

1.2.6供给充足干净饮水 可采用自动饮水器供水，公牛自由饮水。

1.3种公牛的管理措施

1.3.1专人饲喂与管理 饲养员相对稳定，不随意换人；为使饲养员熟悉公牛的秉性，从幼龄开始饲养，并由饲养员亲自调教公牛，养成温顺而活泼的习性。因种公牛记忆力强，防御反射强，所以饲养员平时不能逗弄、鞭打和训示，以免公牛记仇或养成恶癖；如果公牛不驯服时应厉声呵斥制止。在饲喂过程中，要仔细观察牛群，发现异常情况应及时向主管领导或兽医汇报，做到早发现、早预防、早治疗。

1.3.2适时的驯化和加强运动 10～12月龄后备种公牛必须穿戴鼻环，种公牛穿戴鼻环后应经常牵引训练，以养成温顺的性格。加强运动是保证种公牛肌肉、韧带、骨骼健康，防止蹄变形和体态过肥，增强性欲，保证精液质量的重要措施，因而必须保证每天有一定的运动量，除自由运动外，牵引运动不能少于1～2h。

1.3.3称重与刷试 成年种公牛应每月称重一次，根据体重变化情况及时调整日粮配方，种公牛以保持中等膘情为宜。种公牛要每天刷试1～2次，种公牛站可以安装淋浴设施或设置药浴池以便牛体定期淋浴和驱虫，保持牛体干净卫生。

1.3.4按摩和护理睾丸 每天必须用温水清洗和按摩睾丸，兽医定期对睾丸及阴囊进行检查和护理。1.3.5护蹄 经常观察并检查蹄趾有无异常，保持蹄壁和蹄叉的清洁。种公牛要经常修蹄、护蹄，保证公牛四肢健康；每年春秋两季各进行一次检蹄、修蹄。

1.4疫病防治

在疫病防治上，坚持“防重于治，以防为主”的方针。按照本地动物疫控中心要求，对强制免疫和计划免疫的疫病，根据实际在停采或节假日进行防疫和免疫接种，坚持每年春秋两季防疫接种；平时做到封闭管理，谢绝非工作人员，外来人员进入生产区，饲养员每天经过消毒通道后方可进入生产区上班，严格按照有关规定，每天清扫圈舍，并每周消毒一次，工作通道每月消毒一次，以确保种公牛健康。

2　加强采精技术措施

采精前的充分准备工作，正确掌握采精技术，合理采精频率，是采得鲜精量多质优的保证，而采精技术的娴熟度则直接影响新鲜精液品质和数量。

2.1做好采精前的准备

2.1.1器械消毒的准备 洁净的器械是保证精液不受外界污染的先决条件。玻璃器皿洗干净后，置160℃干燥箱中干燥消毒；假阴道、三角套等橡胶器械清洗干净，晾干后用75%酒精消毒；载玻片、冷冻架包装用的纱布等物品紫外线下照射消毒0.5h，备用。

2.1.2稀释液配制的准备 筛选出最适宜的配方，采精前按配方准确称取所需试剂基础液，置75℃水浴锅中消毒30min；冷却后加入卵黄15～20mL用磁力搅拌器充分搅拌均匀后备用。或放入3～5℃冰箱内待用。使用前每100mL稀释液加青链霉素各5～10万IU搅匀，放置时间不宜超过24h。

2.1.3假阴道润滑剂的准备 白凡士林与液状石蜡按1：1比例调制，用75℃水浴消毒。

2.1.4场地的准备 采精场所应保持安静，地面保持清洁卫生，无污染并铺垫防滑设施，在每次使用前对采精架等设施进行安全检查。

2.1.5台牛的准备 选择健壮、性情温顺、无疫病的母牛或公牛做台牛，并保定于采精架内并将尾巴拴系，台牛的外阴、臀部、肛门和公牛体表及包皮等在采精前应冲洗干净。

2.1.6采精人员的准备 采精员挑选热爱工作，熟悉每个采精公牛习性，业务熟练的人担当。采精时要身穿工作服，戴工作帽，穿长筒雨鞋，并剪短、磨光指甲，戴好一次性塑料手套。

2.1.7采精公牛的准备 采精日将种公牛牵至采精棚，彻底清洗消毒种公牛下腹部及外阴，消毒液浓度符合标准要求，不准擅自增减，每周剪一次阴毛，而后进入待采架拴系候采。

2.1.8假阴道的准备 将准备好的假阴道内可提前注入温水（38℃左右），并用消毒纱布将假阴道口包裹，放置于调整好的恒温箱内（44℃左右）待用。青年牛用光面内胎，成年牛可用纹状面内胎，采精前假阴道内温度可能会下降；采精时内胎温度控制在38～40℃之间，根据不同的牛，温度可做适当调整，最高不得超过43℃。

采精前在假阴道内胎的前三分之一段用涂抹棒均匀涂擦适量消毒过的润滑剂，并从活塞孔打气，使假阴道有适度的压力（假阴道口呈三角形状为宜）后即可进行采精。

2.2种公牛采精技术

1）为提高公牛的性欲可采取空爬、抑制爬跨、间隔爬跨、更换台牛、更换地点、观摩、引诱、被爬跨、按摩等措施使之有充分的性准备，种公牛空爬2～3次，每次间隔5min，防止阴茎触及台牛，充分刺激公牛性欲，待公牛性欲旺盛时采精。

2）不同品种、个体及年龄应使用不同类型假阴道，使采精器个体个性化，安装好的假阴道只能使用一次，不得重复使用。

3）使用独特润滑剂配制以改进润滑效果，方法是白凡士林与液状石蜡按1：1比例调制，用75℃水浴消毒。

4）种公牛的采精方法：采精员右手持假阴道，站在公牛右后方，当公牛起跳、前肢爬上台牛时，迅速向前用左手托着公牛包皮，右手持假阴道与台牛成40度角；假阴道入口斜向下方，左右手配合将公牛阴茎自然引入假阴道口内（切勿用手捉拿阴茎或用假阴道去套阴茎），如果假阴道条件适宜，公牛往前一冲即完成射精动作，公牛随即而下，此时采精员右手紧握假阴道，随公牛阴茎而下，待公牛前肢落地时，缓慢地把假阴道脱出，并立即将假阴道入口斜向上方，打开活塞放气，使精液尽快、充分地流入集精管内，然后小心取下集精管，迅速转移至精液处理室。

采精时饲养员与采精员要积极配合，采精员的动作要迅速而正确，胆大心细，注意人畜安全。每天采精结束后应及时清扫场地用水冲洗干净，假阴道等采精器械清洗干净后应尽快消毒。

2.2.5制定合理采精频率：根据公牛体况改进采精频率，通常成年公牛（24月龄以上）每周采精2d，每天采精2次；18～24月龄后备公牛，每周采精1d，每天采精2次；14月龄后备公牛开始采精，隔周采精1d，每天采1次。每天采精两次的公牛，时间必须间隔30min以上。

3　冻精的制作

3.1制作前的准备

凡是接触精液的器皿应放在30～35℃恒温箱中，稀释液放在34℃恒温水浴箱水浴中备用。盛装稀释精液的稀释管，应做明显标记，以防不同公牛精液相互混淆。不同品种公牛的稀释液按牛冷冻精液标准用不同的颜色予以区别。

3.2密度测定

采集的精液通过专用窗口传递入精液处理室，及时记录牛号、采精量等有关数据。用精子密度仪、血球计数器或称量的方法，准确进行精液的密度测定，精子密度≥6×108个/mL。随后计算出加稀释液量、预计制作细管数等信息。要使测定值准确，所用仪器需精确，操作必须正确。

3.3镜检

活力是判断精液质量的一项重要指标，可取1滴精液样品在37℃环境温度中在相差显微镜镜下检查评定（用百分率表示），活力≥65%方为合格，可以使用。

3.4稀释、封装及平衡

稀释操作原则：加稀释液要缓慢、轻轻摇匀，稀释液与精液等温，加稀释液量要准确。使用一次稀释方法将精液稀释后，在低于20℃环境温度下精液封装，封装后的细管精液放入不透光的塑料盒内，每盒以盛放300支为宜，1头牛的细管精液数量大可分放在二个塑料盒中，把盒放入4℃低温柜中避光平衡3～4h。

封装精液使用细管分装一体机操作，这是一套在完成灌装与封口后即刻进行喷墨印字的一体化设备，它的工作程序在尽可能不被外界污染的情况下完成细管精液的灌装、封口和喷墨印字，这对提高产品的卫生质量极为有利。

4　冷冻

4.1细管精液上冷冻架

细管精液上架码放时应注意细管摆放的方向，把棉塞封口端靠操作者内侧，封口端远离操作者外侧，入冷冻箱时亦应如此放置。每架上放有标记物，便于识别牛号。同一架上只能放置1头牛的细管精液。

4.2使用全自动冷冻仪对精液进行冷冻

冷冻仪是一个由计算机控制的全自动冷冻容器，可根据使用者的需要设置不同的冷冻温度曲线，首先设置好牛冷冻精液最佳的冷冻温度曲线，开启液氮阀门把冷冻仪降温至4℃，关闭风扇电源，待风扇完全停止后，把已排满待冻细管精液的迅速放入冷冻仪，盖严盖子，按预先设定的最佳冷冻温度自动完成冷冻过程。

4.3冻精收集

冷冻结束打开盖子，细管冷冻精液按牛号分别投入盛满液氮的不同容器中，细管的超声波封口端在上，棉塞端向下，不可倒置，应迅速浸泡在液氮中，这样可避免细管棉塞端爆脱的发生，入临时贮存库。

5　冻精活力检查

精液冷冻完成并在液氮中存放48h后进行质量检查，因为冷冻后精液需要在此环境中有一个稳定过程，此时检查的活力才是本批次冻精的真实反应。用镊子取一支冷冻后的细管精液放入事先调好的38～40℃温水中轻摇晃动，待解冻后立即取出，用吸水纸或纱布擦干水珠，再用细管剪剪去超声波封口端，滴小滴精液于载玻片上，即可用相差显微镜镜检，进行活力评定，肉牛活力≥35%，水牛≥30%为合格冻精，镜检合格者方可进行包装。

6　冻精包装

检验合格的冻精在-140℃以下的环境中进行包装，常规0.25mL微型细管用25支定量贮精管进行第一次包装，然后再用标记好品种、数量、生产日期等信息的纱布袋进行二次包装，每袋包装8个贮精管共计200支细管冻精。包装过程中细管超声波封口端一致朝外，包装好的细管冻精入贮存库。

7　冻精贮存与运输

冻精贮存于液氮罐的液氮中，设专人保管，每周定时加一次液氮，应经常检查液氮罐的状况，发现液氮罐有问题要及时处理。包装好的冻精由一个液氮罐转换到另一个液氮罐时，在液氮罐外停留时间不得超过3s，取存冻精后要盖好液氮罐塞，再取放管塞，要垂直轻拿轻放，不得用力过猛，防止液氮罐塞折断或损坏。移动液氮罐时，不得在地上拖行，应提握液氮罐手柄抬起罐体后再移动。冻精运输过程中要有专人负责，液氮罐不得横倒、不得碰撞和强烈震动，保证冻精始终浸在液氮中。

8　注重质检工作，保证冻精质量

牛冷冻精液生产及产品质量检验中，严格按《牛冷冻精液国家标准》（GB4l43-2008）以及牛冷冻精液检测技术规程执行。冻精产品质量由相对独立部门技术人员负责检测与监督，每个月对每个公牛鲜精及冻精产品的质量作一次检验，发现异常及时查找原因，及时解决。对重复检验，不合格冻精，坚决淘汰。冻精出站时再进行复检，合格后方交付使用。

冻精质量的控制按陆汉希等的程序进行：鲜精采集→鲜精检查（不合格淘汰）→鲜精稀释→鲜精平衡→制作冻精→冻精检查（不合格淘汰）→冻精暂存→复检（不合格淘汰）→贮存→冻精出站质检（不合格淘汰）→出站。冻精生产及销售各环节中做好详细记录，严把质量关。

9　结语

冻精产量的增加和冻后品质的提高，是一个综合体现的过程。通过我们多年来的工作经验证明，采用上述措施，通常情况下本站种公牛鲜精精子正常形态率达99%，冻精精子正常形态率为84%，冻精活力提高了5%～10%，充分挖掘了种公牛的生产潜力。因此，科学的饲养管理，科学的采精技术，先进的生产工艺和严格的质量管理是提高种公牛冻精质量的关键措施。

Comprehensive Measures to Improve the Quality of Stock Bull Frozen Semen

WANG Chun-lan1，LI Gui-you1，Ma Yan-ru1，JIN Xian-dong2， WANG Zhe2，ZHANG Ji-cai2，QU Kai-xing2*
（1.Frozen Semen Station of Yunnan Livestock Breeding and Extending Center，Kunming，Yunnan，650212，China； 2.Yunnan Academy of Grassland and Animal Science，Kunming，Yunnan，650212，China）

【Objective】The quality of frozen semen directly affected the effects of livestock improvement. We can provide high-quality frozen semen for livestock improvement by improving and regulating the making rules of frozen semen.【Method】In this paper，the comprehensive strategies for improving the quality of stock bull frozen semen and the key counterpart techniques were illuminated，integrating the techniques of semen collection，frozen semen production，storage and transportation with feeding management for decades.【Result】With above measures，the rate of fresh semen sperms with normal morphology was 99％，the rate of frozen semen sperms with normal morphology was 84％，and it raised the vitality of frozen semen by 5％～10％，so the productive potential of stock bull was fully explored.【Conclusion】The quality of stock bull frozen semen was improved effectively by using these measures，and then，the production of frozen semen was increased，and the quality was improved after freezing too.

stock bull；semen collection；frozen semen；feeding management

S815.4

A

1001-9111（2015）

2015-06-20 修改日期：2015-07-10

云南省重大生物专项（2012Z A 024）、基础研究计划重大项目（2013F C 004）及面上项目（2012F B 199）；国家肉牛（牦牛）产业技术体系（C A R S-38）。

王春兰（1970-），女，汉族，云南江川人，畜牧师，从事种公牛管理与冻精改良技术推广工作。E-mail：w-c l a n@ 163.com。

亐开兴（1975-），男，云南祥云人，博士，副研究员，从事动物遗传育种。E-mail：k a i x q u@y n bp.c n。