藏药抑菌作用研究进展△

贺 平 袁东亚 孙芳云

(西藏民族大学医学院，陕西 咸阳 712082)

藏药是我国传统医药宝库的重要组成部分，至今已有2500 多年的历史，在漫长的医药实践过程中形成了其独特的理论体系和浓厚的民族特色。藏药大多取材于高原地区的动植物和矿物石。这些药材资源长期生存于高海拔、强日照、大温差、高寒缺氧的高原地理环境，促进了其体内特有动植物代谢产物的形成，这些产物往往是新药研发的先导化合物，而且藏药作用靶点多不易产生耐药性，因此近年来藏药的研究及应用日益得到重视。本文对近年来藏药抑菌作用研究概况作一综述。

1 抑菌实验方法

1.1 藏药体外抑菌实验：这类实验方法在藏药抑菌作用研究中应用最普遍，主要包括肉汤稀释法、琼脂稀释法、纸片扩散法、杯碟法、打孔法等。然而这些方法也存在一定局限性，例如试管稀释法经常用于MIC 测定，操作繁琐，工作量大，一个系列稀释度含药培养基只能检测一种细菌，而且苛养菌常无法培养。琼脂稀释法操作简便，一个系列稀释度含药平板可同时检测多种细菌，但必须警惕细菌之间交叉污染。杯碟法、打孔法与纸片法扩散原理相似，操作简单，且能形成规则的抑菌圈;但是藏药成分较复杂，不同成分之间存在扩散差异，而且没有标准纸片，实验结果质量控制较难。因此应根据实际情况选择较合适的实验方法。

1.2 含药血清体外抑菌实验：藏药材化学成分极其复杂，经口服以后在体内会发生一系列变化，含药血清能更好的反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程。马兴铭等［1］通过灌胃给实验动物用药，然后获取含药血清并进行山生柳体外抑菌实验研究，发现未灭活的小鼠含药血清对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺菌均有抑制作用，而血清灭活后仅对痢疾志贺菌有抑菌作用。

1.3 体内抑菌实验方法：格桑顿珠等［2］研究小鼠急性细菌感染模型发现藏药四臣止咳颗粒能显著降低金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及肺炎克雷伯杆菌引起的小鼠死亡率，而且这一作用随着剂量增加而增强，显示四臣止咳颗粒具有体内抗菌活性。

2 藏药抑菌作用研究

2.1 单味藏药抑菌研究：目前单味藏药抑菌研究主要集中于清热解毒类藏药对常见致病菌的抑菌作用。杜宝中等［3］发现螃蟹甲的水和乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌标准菌株有抑菌活性，而且对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌耐药菌株也有抑菌活性。鲍敏等［4，5］实验结果显示翁布和雪灵芝的水及乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌、梭状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、四联球菌、八叠球菌、大肠杆菌等有不同程度的抑菌作用。王双等［6］研究了诃子鞣质对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的抑菌作用，发现0.05g/mL 时仅对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有作用，0.005g/mL 时对四种供试菌均无效。姜华等［7］研究表明镰形棘豆总黄酮苷元对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎双球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、产气假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌均有较强的抑菌作用，其中对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.38mg/mL，其他各菌的MIC 范围在0.75 ～3mg/mL 之间。该课题组还证实了甘青青兰［8］提取物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌有确切的抑菌作用，但对大肠杆菌和粪肠杆菌无抑菌作用。张乾等［9］研究了3 种藏药对口腔致龋菌抑菌作用，发现兔耳草和独一味的提取物对变形链球菌和乳酸杆菌的生长和产酸都有抑制作用，诃子提取物仅对乳酸杆菌的生长和产酸有抑制作用且强于兔耳草和独一味。吴瑞等［10］研究发现篦齿虎耳草乙酸乙酯部位和正丁醇部位浸膏对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎双球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、地衣芽孢杆菌都有明显抑制作用，乙酸乙酯部位浸膏抑制作用大于正丁醇部位浸膏。张春江等［11］用琼脂扩散法研究了8 种藏药水及醇提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的抑菌作用，异叶青兰、甘青乌头、獐牙菜、铁棒锤、蒺藜、兔耳草在0.1g/mL 时抑菌作用明显，五脉绿绒蒿及乌奴龙胆作用微弱。董开忠等［12］研究表明铁棒锤对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、产气杆菌、粪肠球菌等7 种常见肠道致病菌有明显外抑制作用，MIC 在12.5 ～20mg/mL 范围内。刘彦平等［13］发现唐古特大黄中鞣质、蒽醌苷类对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌和白色念珠菌抑菌作用较强，其MIC 均小于0.0625g/mL。李文娟等［14］发现瑞香狼毒根乙酸乙酯部位在33.33mg/mL时对金黄色葡萄球菌和石膏样小孢子菌有抑菌作用。李珍等［15］比较了云杉的水提物和乙醇提取物对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、蜂房哈夫尼亚菌的抑菌效果。其中水提物(80mg/mL)对6种供试菌作用显著，而乙醇提取液抑菌作用极微弱。

除临床病原菌研究外，也有学者对植物性致病菌进行了抑菌研究。例如张忠等［16］用琼脂扩散法研究了两种兔耳草不同提取部位对果蔬采后致病性真菌和食品腐败菌的抑菌活性，发现短管兔耳草对金黄色葡萄球菌、荧光假单胞菌、半裸镰刀菌和扩展青霉有抑菌活性;而短穗兔耳草对扩展青霉菌、互格交链孢和金黄色葡萄球菌、荧光假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有作用。苏印泉等［17］发现长松萝提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用明显，而对大肠杆菌、白色假丝酵母菌、青霉菌、西瓜枯萎菌的抑菌作用较弱。

2.2 藏药复方制剂抑菌研究：单味药材的功用各有所长，也各有所偏，通过合理的配伍可以增强其原有的功用。基于相辅相成的理论，传统藏药在临床应用中以复方制剂为主，有的学者对藏药复方进行了抗菌作用研究。李巧云等［18］研究表明十味龙胆花胶囊对甲型溶血性链菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌等6 种临床分离且菌株有抑制作用，对小鼠肺炎克雷伯杆菌感染的ED50 为673 ±82mg/kg。张春江等［19］发现二十五味松石丸对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、耐药表皮葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、白色念珠菌等革兰阳性菌有明显抑菌作用，但对大肠杆菌、铜绿假单胞菌作用较弱。格桑顿珠等［2］用杯碟法研究显示四臣止咳颗粒对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及肺炎克雷伯杆菌抑菌作用较强，但对乙型溶血性链球菌、甲型溶血性链球菌、流感嗜血杆菌抑制作用微弱。杨全余等［20］发现青鹏胶囊对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌抑制作用明显，其MIC 均为62.5mg/mL，并且该药能增强小鼠吞噬细胞的免疫功能。李红玉等［21，22］研究了十八味诃子利尿丸及二十五味鬼臼丸的体外抑菌作用，发现两种复方对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、耐药表皮葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌等革兰阳性菌均有明显抑菌作用。刘有菊等［23］研究发现藏药玛奴西汤颗粒对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果，对大肠埃希菌、沙门氏菌及铜绿假单胞菌的抑菌作用较弱。

2.3 藏药化学成分抑菌作用：多年来藏药抑菌研究一直沿用传统方法，针对药材采用不同的提取纯化方法，对各种病原菌进行体内外抑菌实验。近年来随着一些先进科研设备(如NMRI、HPLC-MS 等)的应用，藏药抗菌活性成分的分离提取工艺、研究水平及其临床应用不断取得进展，研究表明藏药抗菌成分很复杂，主要包括生物碱、皂苷类、有机酸、萜类、黄酮类、挥发油、醌类等。

例如张琪等［24］发现盘花垂头菊倍半萜类化合物1β，8-二乙酰氧基-2β，10 -二乙酰基-3β-羟基-4α-氯-11 甲氧基-没药-7(14)-烯对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有抑菌作用。刘洁丽等［25］比较了青藏大戟石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及其5 种化合物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和地衣芽孢杆菌的体外抑菌作用，发现双黄酮类化合物7-甲氧基新狼毒素A 和异新狼毒素A 抑菌作用最强。王焕弟等［26］研究了湿生扁蕾中6 种化合物对植物源性细菌和真菌的抑制作用。发现1，7 -二羟基-3，8 -二甲氧基口山酮对供试菌抑菌效果明显。杨云裳等［27］发现裸茎金腰中分离的两种黄酮醇类化合物5，4＇-dihydroxy -3，6，3＇-trimethoxyflavone-7 -O-β-D-glucoside 和Veronicafolin 对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌抑菌作用明显，但对铜绿假单胞菌无抑制作用。张应鹏等［28］用GC-MS 从川西獐牙菜分离出88 种挥发性成分，并证实其挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌有抑菌活性。马兴铭等［29］用纸片扩散法证实砂生槐种子总生物碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑菌作用。宋玉英等［30］从湿生扁蕾分离得到了1，7 -二羟基-3，8 一二甲氧基咕吨酮、1，7，8 一三羟基-3 -甲氧基咕吨酮和1 -羟基-3，7，8-三甲氧基咕吨酮，三种化合物对结核杆菌的MIC 均为128mg/L，MBC 大于128mg/L;由红景天中分离得到的没食子酸对结核杆菌的MIC 为64mg/L，MBC 为128 mg/L。Zhang 等［31］研究了黄冠菊提取物中六种乙炔噻吩与两种呋喃倍半萜对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用，结果提示化合物2 具有广泛的抗菌作用。周乐等［32］从瑞香狼毒分离出狼毒色原酮和新狼毒素B 两种成分，二者对苹果干腐菌、小麦赤霉菌、番茄旱疫菌、南瓜枯萎菌、玉米大斑菌、辣椒疫霉病原菌的菌丝生长有显著抑制作用。

3 小 结

近年来藏药抑菌实验研究已经取得了长足的进步，研究表明藏药抑菌作用值得肯定，并且对部分临床耐药菌株有一定抑菌活性，为藏药临床抗感染应用预示了广阔前景。但是从整体而言，藏药科研开发水平偏低，离现代临床抗感染治疗的要求还有一定差距。目前国内大多数研究局限于体外抑菌实验，而且以清热解毒类藏药研究为主，体内抑菌实验数据以及抑菌机制研究相对较少。藏药化学成分复杂多样，有时体外实验结果、体内实验结果和临床疗效并非完全一致。应该明确藏药抑菌有效部位和成分，研究不同组分的药效和机制，因此在研究广度和深度上仍有待进一步提高。

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