夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织损伤影响的初步研究

刘艳丽 张钦迟 王延平 王璐 崔利 王剑锋

夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织损伤影响的初步研究

刘艳丽 张钦迟 王延平 王璐 崔利 王剑锋

目的初步研究夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织的损伤影响。方法45只健康雄性小鼠作为研究对象, 随机分成正常组﹑对照组﹑研究A组﹑研究B组﹑研究C组五组, 每组9只。分别予以不同处理, 比较各组脑梗死面积百分比, 并进行免疫印迹分析。结果研究A﹑B﹑C组的脑梗死面积百分比分别为14.01%﹑19.79%﹑10.18%, 对照组的脑梗死面积百分比为19.80%, 与对照组的脑梗死面积百分比比较, 研究A﹑C组的脑梗死面积百分比下降显著, 差异有统计学意义(P＜0.05)；免疫印迹分析中正常组小鼠大脑中动脉栓塞后, 于0.5﹑1.5 h时, gp91phox, p67phox, p47phox蛋白表达上调﹑4 h时蛋白表达下调。经夹竹桃麻素预处理后, 仅研究C组的p67phox蛋白表达显著下调。结论夹竹桃麻素主要是通过抗氧化应激以抑制缺血区及再灌注区氧化自由基释放, 并稳定血脑屏障, 从而缩小脑梗死面积, 延缓脑梗死损伤发展。

急性脑梗死；夹竹桃麻素；NADPH氧化酶；自由基损伤

急性脑梗死的脑组织损伤包括缺血所造成的神经损伤和损伤后氧化应激产生过多自由基对脑组织的二次损伤［1］。本文为了初步研究夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织损伤影响, 对本院2010年2月～2015年2月实验动物研究中心饲养的45只健康雄性小鼠进行研究, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院实验动物研究中心2010年2月～2015年2月饲养的45只健康雄性小鼠作为研究对象, 随机分成正常组﹑对照组﹑研究A组﹑研究B组﹑研究C组五组,每组9只。

1.2 方法 予以45只健康的雄性小鼠线栓法诱导大脑中动脉栓塞, 24 h后建立大脑中动脉栓塞模型［2］, 将造模成功的小鼠断头留取脑组织标本, 做冠状位2 mm的切片, 采用2%三苯基四氮唑对标本进行染色, 并用10%福尔马林定型。照相后用Adobe Photoshop软件进行扫描, 计算脑梗死面积百分比。

五组小鼠分别于造模后0.5﹑1.5﹑4 h等各时间点留取脑组织标本, 正常组﹑研究A﹑B﹑C组每3只小鼠为一小组,分别进行p47phox, p67phox和gp91phox的免疫印迹分析；对照组予以盐水处理；研究A﹑B﹑C组分别予以10﹑20﹑50 mg/kg的夹竹桃麻素处理, 比较各组的蛋白表达变化。

1.3 观察指标 计算小鼠的脑梗死面积百分比, 观察各组进行免疫分析后的蛋白表达变化。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 脑梗死面积百分比比较 研究A﹑B﹑C组的脑梗死面积百分比分别为14.01%﹑19.79%﹑10.18%, 对照组的脑梗死面积百分比为19.80%, 与对照组的脑梗死面积百分比相比,研究A﹑C组的脑梗死面积百分比下降显著, 差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 免疫印迹分析比较 正常组小鼠大脑中动脉栓塞后,于0.5﹑1.5 h时, gp91phox, p67phox, p47phox蛋白表达上调﹑4 h时蛋白表达下调。经夹竹桃麻素预处理后, 仅研究C组的p67phox蛋白表达显著下调。

3 讨论

急性脑梗死的脑组织损伤中二次脑组织损伤是由氧化应激引起的, 而氧化应激主要是通过还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶发挥作用。NOX是维持NADPH氧化酶活性和促进氧自由基产生的酶复合体。相关资料显示［3］, NOX活性被激活后,产生大量的活性氧, 并造成脑缺血后的神经元死亡, 并在缺血性脑卒中后的严重阻碍脑功能恢复。而氧化应激和自由基则可在脑卒中后破坏神经元功能。

夹竹桃麻素作为非选择性自由基清除剂可减轻脑梗死神经功能损伤［4］, 虽然其临床应用安全性还有待研究, 但指明了未来药物选择的方向。研究A﹑B﹑C组分别予以10﹑20﹑50 mg/kg夹竹桃麻素预处理后, 研究A组和C组的脑梗死面积百分比与对照组的脑梗死面积百分比相比显著降低。说明予以50 mg/kg的夹竹桃麻素抑制脑梗死面积的作用最强。

夹竹桃麻素能够抗氧化自由基, 其药物动力学具有起效快﹑代谢快的优势, 有利于夹竹桃麻素的药物加工和制剂［5］。夹竹桃麻素可以显著减小脑梗死病灶面积, 并通过抗氧化自由基来减少脑细胞损伤。此外, 夹竹桃麻素还可阻止膜结合的亚基NOX2与胞浆亚基p47phox之间发生易位, 从而阻碍亚基NOX2组装及NADPH氧化酶的活化。

综上所述, 夹竹桃麻素主要是通过抗氧化应激以抑制缺血区及再灌注区氧化自由基释放, 并稳定血脑屏障, 从而缩小脑梗死面积, 延缓脑梗死损伤发展。

［1］张钦迟.夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织损伤影响的初步研究. 大连医科大学, 2014.

［2］张德贤,任凯,官媛, 等.夹竹桃麻素对兔心房电重构的影响.中华老年心脑血管病杂志, 2011, 13(3):208-210.

［3］田苗,刘屏,王字玲, 等.夹竹桃麻素对兔原代左心房肌细胞氧化应激损伤的保护作用.军医进修学院学报, 2011, 32(6): 632-634.

［4］刘岩,李泱,林琨, 等.夹竹桃麻素对过氧化氢所致兔心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流异常的保护作用.中国心脏起搏与心电生理杂志, 2012, 26(5):422-426.

［5］张德贤,任凯,官媛, 等.夹竹桃麻素对兔心房电重构时氧化应激损伤保护作用的研究.中华老年心脑血管病杂志, 2011, 13(10):919-921.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.23.221

2015-08-17］

116033 辽宁省大连市中心医院神经内二科(刘艳丽王延平 王璐 崔利)；吉林省通化市人民医院内分泌科(张钦迟)；大连市中心医院(王剑锋)

王剑锋