饲料中硒的测定国标方法改进

2015-01-22袁燕平姚亚军倪自利

饲料工业 2015年23期

■袁燕平姚亚军倪自利黎勇

(长沙兴嘉生物工程股份有限公司技术中心)

硒是饲料里必需添加的一种重要微量元素，参与动物体内蛋白质、氨基酸、核酸、脂肪、碳水化合物和维生素以及微量元素等营养物质的代谢，在提高动物免疫力、生产性能及改善肉品质方面也有重要的作用。目前饲料中硒的检测基本依照国标方法GB/T13883-2008中的氢化物原子荧光光谱法（仲裁法）进行，兴嘉生物技术中心经过多年的实践经验却发现，此方法中的处理方式主要针对配合饲料样品，而针对于复合多矿的检测，还需在此基础上做出诸多改进，才能使操作方便，结果准确。

本文旨在将本实验室所总结出来的改进经验分享给同行，希望对大家有帮助。

1 实验方案

1.1 材料与仪器

硒原始标准溶液（1 000 μg/ml，有国家证书），硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），氢氧化钠（优级纯），铁氰化钾等（优级纯），氩气（99.9%）。

硒标准储备液：准确移取1 ml硒原始标准溶液于100 ml，用水稀释至刻度，此标准储备液浓度为10 μg/ml。

硒标准工作液：准确移取5 ml硒标准储备液于50 ml，用水稀释至刻度，此标准储备液浓度为1 μg/ml，现用现配。

混合酸溶液：硝酸+高氯酸=4+1。

5%盐酸溶液：盐酸+水=5+95。

200 g/l铁氰化钾：称取20.0 g铁氰化钾，溶于100 ml水中，摇匀。

20 g/l硼氢化钠溶液：称取20.0 g硼氢化钠，溶于氢氧化钠中（5 g/l）中，定容至1 L。

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AR2140电子分析天平（感量为0.000 1 g），原子荧光分光光度计（北京吉天，AFS-8230），DL-1电炉。

1.2 实验方法

1.2.1 样品处理

称取试样0.25 g，准确到0.000 2 g，置于100 ml高型烧杯中，加8 ml混合酸，盖上表面皿于电炉上加热，当溶液高氯酸冒烟时，再继续加热至溶液不再产生棕色气体。冷却，再加2.5 ml盐酸，用水吹洗表面皿和杯壁，继续加热微沸约5 min即可，冷却，移入50 ml容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，作为试样消化液。根据实际情况将此试样消化液稀释至含硒0.02～0.05 μg/ml，并且需加入5%盐酸（体积比）和4%（体积比）200 g/l铁氰化钾溶液。

1.2.2 仪器参考条件

光电倍增管负高压：260 V，硒空心阴极灯电流：60 mA，原子化温度：800℃，炉高：8 mm，载气流速：300 ml/min，屏蔽气流速：800 ml/min；载液：5%盐酸溶液；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间：1 s；读数时间：15 s；加液时间：8 s；进样体积：2 ml。

1.2.3 标准曲线

分别准确移取0.0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 ml标准储备液2于50 ml容量瓶中，加入10 ml水，加入2.5 ml盐酸，加2 ml铁氰化钾溶液，用水稀释至刻度，摇匀。

1.2.4 改进方法与国标法对比（见表1）

表1 改进方法与国标法对比

1.3 实验结果与讨论

1.3.1 标准曲线

在硒标准溶液浓度与荧光值之间绘制标准工作曲线，结果显示，在硒浓度为0～0.060 μg/ml范围内，硒的标准溶液浓度与其荧光值之间存在良好的线性关系，所得结果见表2。

表2 标准曲线的线性关系

1.3.2 精密度

按照1.2节中所述方法对3个不同多矿样品分别进行3次平行检测，实验结果列于表3。结果表明该方法能将多矿中硒检测出来，且平行样极差相对值和变异系数均在5%以下，说明用此方法检测多矿样品中的硒，平行性和精密度较好。

表3 精密度实验

1.3.3 重复性

按照1.2中所述方法，两个月内不同时间对这3个多矿分别进行3次检测，结果列于表4。两个月内测得结果的极差相对值最高只有4.98%，变异系数在3%以下，说明用此方法检测多矿样品中的硒，稳定性良好。

表4 重复性实验

1.3.4 回收率

在多矿样品中加入硒标液，按照1.2节中所述方法，进行回收率实验，所得结果列于表5。由表5可看出，最小回收率为95.11%，最大回收率为104.40%，说明该方法可靠，准确性高，可以满足检测要求。

表5 回收率实验

1.3.5 与2，3-二氨基奈荧光法对比

实验小组亦将本实验中的3个样送到某外检机构，其采用2，3-二氨基奈荧光法进行了检测，所得结果列于表6。由数据可知，2，3-二氨基奈荧光法所得结果重复性相当差，方法不稳定，所得结果不可靠。基于此种情况，建议采用氢化物原子荧光光谱法检测饲料中的硒（即国标中的仲裁法），如果针对符合多矿，则可以采用本文中的条件进行检测。