胃腺癌组织中RhoC、CD105蛋白的表达变化及意义

肖兴国

(郑州大学附属郑州中心医院，郑州450007)

胃腺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展及确切分子病理机制尚未完全明确。Rho家族属于小分子G蛋白基因亚家族。文献表明，Rho家族与肿瘤的发生、发展关系密切。2000年6月～2013年6月，我们观察了胃腺癌组织中RhoC、CD105蛋白的表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院收治的胃腺癌患者108例，男 70例，女38例;年龄 25～78(57.0±11.7)岁。所有患者术前均未接受放化疗及免疫治疗。其中高、中分化腺癌40例，低分化腺癌68例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期42例，Ⅲ、Ⅳ期66例;有淋巴结转移者67例，无淋巴结转移者41例;肿瘤浸润黏膜及黏膜下层者19例，肌层者42例，浆膜及浆膜外者47例。手术留取胃腺癌组织108例份(胃癌组)、癌旁不典型增生组织40例份(癌旁组)、正常胃黏膜组织30例份(正常组)。

1.2 主要试剂 RhoC蛋白山羊抗多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，即用型SABC试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉博士德公司)，鼠抗人CD105单克隆抗体(北京中杉金桥公司)。

1.3 组织 RhoC、CD105蛋白检测 所有标本均经40 g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，常规脱蜡，高温高压热抗原修复，严格按照免疫组化SABC试剂盒操作步骤进行;DAB显色，苏木素复染。以已知RhoC、CD105蛋白阳性胃腺癌组织切片作阳性对照，PBS代替一抗设阴性对照。RhoC染色阳性信号定位于细胞质及细胞核，每例选择10个不同高倍视野，计算RhoC阳性细胞数占视野中肿瘤细胞总数的百分比，无阳性着色或阳性细胞数＜5%为阴性(－)，阳性细胞数在5% ～50%为阳性(+)，阳性细胞数＞50%为强阳性(++)，阳性与强阳性合计为阳性表达。CD105蛋白标记微血管，计数微血管密度(MVD)，凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇计为一个血管，但肌层较厚及管腔面积＞8个红细胞直径的血管不计数;先在10×10低倍镜下扫视整张切片，确定微血管最密集的5个视野，然后在高倍镜(10×40)视野范围内计数所有染色的微血管，取5个视野计数结果的均数为该切片的微血管数［1］。

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。计量资料以±s表示，多组间比较采用方差分析;计数资料比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组RhoC、CD105蛋白表达比较 胃癌组、癌旁组、正常组 RhoC蛋白阳性率分别为86.1%、60.0%、26.7%，胃癌组、癌旁组分别与正常组比较，P 均 ＜0.01;MVD 分别为 32.63 ±3.79、12.03 ±1.32、10.76 ±1.96，胃癌组与癌旁组、正常组比较，P 均 ＜0.01。

2.2 RhoC、CD105蛋白表达与胃腺癌临床病理参数的关系 结果见表1。由表1可知，RhoC蛋白表达与胃腺癌临床分期、浸润程度、淋巴结转移有关，CD105蛋白与胃腺癌细胞分化程度、临床分期、浸润程度、淋巴结转移有关(P均＜0.05)。

表1 RhoC、CD105蛋白表达与胃腺癌临床病理参数的关系

2.3 胃腺癌组织中RhoC蛋白与CD105蛋白表达的关系 胃腺癌组织中RhoC蛋白阳性表达组MVD高于 RhoC 蛋白阴性表达组(t=3.584，P ＜0.05)。

3 讨论

胃腺癌是临床上常见的恶性肿瘤，其具有高发病率、高病死率的特点，且肿瘤侵袭转移严重程度直接关系到胃腺癌患者预后质量。目前，临床上关于胃腺癌发生、发展及浸润转移的具体分子机制尚不明确。近年来，关于癌症组织中RhoC表达及RhoC表达在癌浸润、淋巴转移中的作用机制研究较多。何娟等［2］发现，喉癌组织中RhoC表达水平受肿瘤浸润程度、临床分期及淋巴结转移等影响，认为RhoC可能作为喉癌发展进程中的一项重要标志物，在喉癌浸润、淋巴结转移中起参与作用;其可能机制为RhoC属于转录调节因子的一种，主要通过对细胞周期依赖性激酶有效调控来改变细胞周期，进而达到调控细胞生长、增殖的目的［3，4］。相关研究［5］表明，RhoC蛋白在众多组织和细胞中表达。赵志华等［6］发现，食管癌细胞中 RhoC mRNA、蛋白表达高于正常食管黏膜及癌旁组织。本研究亦显示，胃腺癌组织RhoC阳性率高于癌旁及正常胃黏膜组织。

另外研究发现，RhoC与Rho在调控细胞分裂、生长、增殖等作用机制基本类似，且两者呈正相关性。为此可以通过Rho研究反映RhoC表达。Rho亚家族蛋白(RhoA、B、C、D、E)属于 Ras超家族 GTP蛋白酶，Rho蛋白通过其下游靶效应分子，调节细胞骨架的活动，参与调控细胞分裂和增殖。Rho在肿瘤侵袭转移中起促进作用，其可能机制主要包括:①对磷酸化(与细胞骨架蛋白密切相关)进行调节，以促进肌动蛋白丝、肌球蛋白相互作用，形成收缩性，进而让肿瘤细胞进一步转移活动;②该物质能对细胞极性产生破坏，减少细胞的黏附作用，提高细胞运动及重塑(细胞外基质)能力，以促进肿瘤细胞浸润;③增强癌细胞内血管生成因子水平，新生成肿瘤血管，为肿瘤细胞生长、参与血液循环提供重要途径，进而促进肿瘤侵袭转移［7，8］。赵增强等［9］通过对比分析正常胃黏膜组织与胃腺癌组织中RhoC表达，发现正常胃黏膜组织中低表达RhoC，而胃腺癌组织中RhoC阳性表达率高达62.5%，同时通过多因素回归分析发现RhoC表达与淋巴结转移、胃腺癌分期有关。这与何娟等［2］报道相似。本研究显示，RhoC阳性表达与胃腺癌临床分期、浸润程度、淋巴结转移有关。

转移和浸润是恶性肿瘤的重要生物学特征，而肿瘤组织中血管生成是肿瘤细胞转移浸润的基本前提。CD105作为一种细胞膜糖蛋白，是调节转化生长因子-β受体复合物的成分之一，其表达与新生血管的内皮细胞密切相关［10，11］。CD105能够体现内皮细胞的增殖状态，反映肿瘤新生血管的生长及分布，对于肿瘤的生长、浸润及转移有重要意义。文献［12～15］表明，作为血管标记物，MVD检测可以作为恶性肿瘤临床分期、浸润程度、疗效判断的客观指标。本文结果显示，MVD与胃腺癌细胞分化程度、临床分期、浸润程度、淋巴结转移有关。胃腺癌组织中联合检测RhoC、CD105蛋白可能有助于提高胃腺癌的阳性检出率。

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