细辛炮制前后的药效学及毒理学研究

王 雪 李连坤 张彦飞 贡济宇 蔡广知 赵跃刚

吉林省长春中医药大学，吉林长春 130117

细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. maudshuricum（Maxim.）Kitag.、汉城细辛A. sieboldii Miq. var. seouleuse Na-kai 或华细辛A.sieboldii Miq.的干燥根及根茎[1]。 细辛性温味辛，具有祛风止痛、解表散寒、通窍、温肺化饮的功效，主要用于治疗风寒感冒、头痛、风湿痹痛、痰饮喘咳[2]。现代药理学研究证明细辛具有抗炎镇痛作用[3]，临床上常用于治疗头痛、坐骨神经痛、牙痛和类风湿性关节炎等疾病[4]。 现代研究表明马兜铃科植物大多含有马兜铃酸[5]。 马兜铃酸对人体有肾毒作用，因此，降低细辛中马兜铃酸的含量并保证其药效已成为现代中药研究的重点内容，药材炮制对细辛的药效有无影响也是研究的重点内容。 本实验就以上问题进行相关研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物

ICR 小鼠，SP 级，雌雄各半，平均体重为（20±2）g，由吉林大学实验中心提供， 许可证号：SCXK11-00-0009。 动物均饲养于温度（22±1）℃，相对湿度（60±5）%的标准环境中，人工光照，12 h 明暗周期，给予标准小鼠鼠粮饲养。

1.2 试药与制备

选取吉林省的北细辛，经长春中医药大学药物分析实验室人员（蔡广知，中级）鉴定后，细辛品质优良，属马兜铃科植物北细辛。

药物制备：生品和炮制品（采用碳酸氢钠碱制后的炮制品）均以8 倍量水浸泡30 min，煎煮至沸腾后再持续加热30 min，将水煎液倒出，药渣继续以6 倍量水煎煮，方法同上[6]。合并2 次提取液后并浓缩至每毫升含生药21.3 g，得到两者的水煎液。

1.3 试剂

0.9%氯化钠注射液（生理盐水，浙江美森进出口有限公司，批号：639003），阿司匹林肠溶片（贵州同济堂制药有限公司，批号：080411），醋酸（北京化工厂，批号：20071015），二甲苯（北京化工厂，批号：20061209）。

1.4 仪器

YLS26 B 智能热板仪，YLS2 Q4 耳肿打孔器（山东省医学科学院设备站），AB135-S 电子天平（梅特勒-托利多公司）。

1.5 方法

1.5.1 醋酸扭体实验 取ICR 小鼠，按雌雄各半，将小鼠随机分为6 组，每组10 只。生理盐水组（20 mL/kg），阿司匹林组（0.02 g/kg），细辛生品和炮制品的水煎液高、低剂量组（生药量3.0、0.5 g/kg），预实验结果显示增加剂量并不能显著提高细辛抗炎镇痛作用，因此选择3.0 g/kg 为高剂量组。 实验前小鼠禁食12 h，各组小鼠采取灌胃给药，一次性给予生理盐水、阿司匹林、细辛生品水煎液、细辛炮制品水煎液[7-9]，给药2 h 后腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL。 记录小鼠初次出现醋酸样疼痛反应时间（疼痛潜伏期）以及10 min 内的扭体次数作为疼痛反应的指标。

1.5.2 热板实验 调节热板温度至55℃， 以小鼠舔后足、跳跃反应为观察指标，记录小鼠自放入热板仪到初次出现舔后足的时间，以此作为小鼠的痛阈值[6]。选择痛阈值在6～60 s 范围内的小鼠作为实验动物使用。 将小鼠按痛阈值分别分到上述各组，给药方案及给药剂量同“1.5.1”，各组于给药后1、2 h 记录小鼠的足肿胀度。

1.5.3 二甲苯致耳廓肿胀实验 选取实验用ICR 小鼠，雌雄各半，随机分组，每组10 只。分组情况、给药方法和给药剂量同“1.5.1”。 各组动物于给药40 min 后，在小鼠右耳廓内外各涂30 μL 二甲苯致炎， 于给药后15 min 处死小鼠并剪下双耳，用直径6 mm 的打孔器打下左右等大的耳片称重。 记录称重数据，左耳重量作自身对照， 以左右耳片重量之差作为炎症的肿胀度。耳廓肿胀度（mg）=右耳片质量-左耳片质量。炎症抑制率=（生理盐水组耳廓肿胀度-用药组耳廓肿胀度）/生理盐水组耳廓肿胀度×100%。

1.5.4 急性毒性实验 选取实验用小鼠，于实验前14 h禁食，不禁水，随机分为正常组和对照组，细辛生品水煎 液84.34、112.50、150.13、200.40、267.20 g/（kg·d）（分 别 相 当 于 临 床 日 用 剂 量 的9.38、12.40、16.80、22.20、29.80 倍）5 个不同剂量组和细辛炮制品水煎液474.70、632.83、843.76、1125.10、1500.30 g/（kg·d）（分别 相 当 于 临 床 日 用 剂 量 的52.74、70.50、93.60、125.10、166.60 倍）5 个不同剂量组[10]，雌雄各半，每组10 只。 分别于每天上、下午分次灌胃给药，间隔6 h，给药40 mL/（kg·次），连续给药7 d，观察给药后7 d内小鼠的状态、死亡情况以及死亡分布时间。 解剖死亡动物，观察内部脏器变化[11]。

1.6 统计学方法

采用SPSS 16.0 统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析或重复测量的方差分析，组间两两比较采用LSD-t 检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。 小鼠急性毒性LD50实验采用概率单位法计算。

2 结果

2.1 细辛炮制前后水煎液对药效学的影响

2.1.1 对小鼠醋酸扭体实验的影响 与生理盐水组比较，其他5 组小鼠疼痛潜伏期均延长，扭体次数均减少，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。细辛生品水煎液高剂量组扭体次数多于炮制品水煎液高剂量组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。 见表1。2.1.2 对小鼠热板实验的影响 与生理盐水组比较，其他5 组小鼠足肿胀度均降低，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。 细辛生品水煎液高剂量组给药后1、2 h 足肿胀度高于细辛炮制品水煎液高剂量组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。 见表2。

表1 细辛炮制前后水煎液对小鼠醋酸扭体实验的影响（±s，n = 10）

表1 细辛炮制前后水煎液对小鼠醋酸扭体实验的影响（±s，n = 10）

注：与生理盐水组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与细辛生品水煎液高剂量组比较，△P ＜0.05

组别 疼痛潜伏期（s） 扭体次数（次）生理盐水组阿司匹林组细辛生品水煎液低剂量组细辛生品水煎液高剂量组细辛炮制品水煎液低剂量组细辛炮制品水煎液高剂量组286.20±114.70 810.20±210.40**317.80±116.60*356.50±101.50*328.10±150.60*394.70±172.40*19.51±2.32 5.31±2.18**14.91±2.03*11.01±2.83*13.11±2.54*8.71±2.04**△

表2 细辛炮制前后水煎液对小鼠热板实验的影响（mg，±s，n = 10）

表2 细辛炮制前后水煎液对小鼠热板实验的影响（mg，±s，n = 10）

注：与生理盐水组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与细辛生品水煎液高剂量组比较，△P ＜0.05

组别 给药后1 h 足肿胀度 给药后2 h 足肿胀度生理盐水组阿司匹林组细辛生品水煎液低剂量组细辛生品水煎液高剂量组细辛炮制品水煎液低剂量组细辛炮制品水煎液高剂量组25.00±8.23 8.00±2.16**18.00±2.56*13.00±1.86**17.00±1.91*9.00±1.99**△28.00±5.86 9.00±1.77**19.00±1.80*14.00±2.30**18.00±1.79*10.00±2.30**△

2.1.3 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验的影响 与生理盐水组比较，其他5 组小鼠耳廓肿胀度均降低，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。 细辛生品水煎液低剂量组耳廓肿胀度高于细辛炮制品水煎液低剂量组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。 细辛生品水煎液低剂量组炎症抑制率低于细辛炮制品水煎液低剂量组（P＜0.05）。 见表3。

表3 细辛炮制前后水煎液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验的影响（n=10）

2.2 对毒理学的影响

细辛生品水煎液的LD50为145.45 g/kg，其95%置信区间为128.50～166.75 g/kg；细辛炮制品水煎液的LD50为846.16 g/kg，其95%置信区间为707.19～1012.39 g/kg，细辛生品水提物的毒性是炮制品的5.82 倍， 提示细辛生品炮制后毒性显著降低。给药后第4 天小鼠集中死亡。解剖后，可观察到小鼠的肾脏明显肿大，并伴有白色，其他器官无明显变化，肾毒性明显。

3 讨论

本文通过醋酸扭体实验、热板实验以及二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验研究细辛炮制前后的药效学，结果表明，炮制后的细辛可显著提高小鼠的痛阈值[12-14]，镇痛作用明显增强；炮制后的细辛水煎液低剂量组炎症抑制率为22.80%， 明显高于生品水煎液低剂量组17.30%，抗炎作用显著增强；细辛炮制前后的药效学研究证明，生品经碱制后，毒性明显降低，且药效增强。 这为临床上规范炮制目的提供了示范。

小鼠急性毒性实验研究结果表明，细辛生品的急性毒性显著高于炮制品[15-16]，因此经过碱制后的细辛毒性明显降低，细辛主要对肾脏有急性毒性，肾衰竭是引发小鼠死亡的主要原因。本实验为临床上细辛的安全用药提供了依据。

现代药理研究及临床实践均证明细辛有毒，随着煎煮时间的延长可使细辛中的挥发油挥发，细辛水煎液在临床应用中有安全性和有效性两种特性， 因此，在临床上应用细辛入药时， 应在正确辨证的情况下，选择合适的剂型，若服用的复方汤剂中含有大剂量细辛，应尽量延长煎煮时间达到减毒的目的，以确保用药安全。

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