HIV、HBV共感染患者病毒载量和外周T淋巴细胞亚群的相关性研究

郑立娜 金明珠

浙江省乐清市血站，浙江乐清 325600

流行病学调查显示，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV） 感染引起的肝炎是肝硬化和原发性肝癌发生的主要原因之一[1-2]。 HBV 和人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）存在相同的感染途径，如毒品途径传播、性途径传播和母婴途径传播等，且HIV 感染患者的免疫能力较健康人群更为低下，因此在HIV 感染者中HBV 感染率也居高不下[3]。 有研究报道，约50%的HIV 感染者血清中存在HBV 的病毒标志物[4]。 在HIV 感染患者中，乙型肝炎的感染率高达4%～10%[4-5]。 机体对HBV 的清除需要通过特异性淋巴细胞介导的体液免疫途径进行，然而在HIV 和HBV 共感染的患者中，HIV 破坏了患者体内CD4+T 淋巴细胞的正常生理功能，导致HIV 患者对HBV 的清除能力降低，临床症状也更为严重[6]。 随着鸡尾酒疗法的普及，HIV 感染患者的生活质量和生存期已显著升高[7]。 有关HIV、HBV 共感染患者的治疗情况，尤其是感染发生后病毒载量和免疫学关系的研究较为少见，因此对其展开研究具有重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011 年1 月～2014 年1 月就诊于乐清市血站门诊和住院部未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染患者（单纯感染组，1230 例）和HIV、HBV 共感染患者（共感染组，148 例）作为研究对象，共计1378 例，其中男1031 例，女347 例，年龄16～72 岁，平均（54.3±12.6）岁。 单纯感染组中男932 例，女298 例，平均年龄为（54.4±11.8）岁；共感染组中男99 例，女49 例，平均年龄为（54.3±13.1）岁。 HIV 感染依据《全国艾滋病检测技术规范（2009 年版）》确诊，首先对患者血液进行HIV 抗体初查确认，对阳性患者抽取血样后送往乐清市CDC 经蛋白印迹法确诊；HBV 感染依据《慢性乙型肝炎防治指南（2010 年版）》确诊，采用酶联免疫吸附法检测患者血清中的HBsAg，两次重复阳性结果判为HBV 感染阳性。 本研究经乐清市血站伦理学会批准，所有患者或其家属均被告知且签署了知情同意书。 两组患者性别、年龄等比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 检测内容

1.2.1 HIV-1 抗体检测 采用上海生工生物公司提供的酶联免疫试剂盒对HIV-1 抗体进行检测，阳性者抽取血样后送往乐清市CDC 经蛋白印迹法确诊，检验步骤严格依据试剂盒说明书进行。

1.2.2 HBsAg 检测 采用酶联免疫吸附试剂盒检测血清中的HBsAg，两次重复阳性结果判为HBV 感染阳性，操作过程依据说明书进行。

1.2.3 T 淋巴细胞亚群计数 使用FACS Calibur 流式细胞仪对研究对象外周静脉血中的T 淋巴细胞亚群进行计数，记录CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴细胞数量和CD4+/CD8+的比值。 使用试剂和流程均依照FACS Calibur 流式细胞仪使用说明书进行。

1.2.4 病毒载量测定 血清HIV RNA 病毒载量采用RT-PCR 方法测定，使用罗氏公司的全自动核酸分离纯化系统及核酸提取试剂盒进行，提取病毒总RNA并测定病毒载量，操作严格依据说明书进行。 血清HBV DNA 病毒载量采用荧光定量PCR 监测系统（FQD-33B 型）进行，操作严格依据说明书进行。

1.2.5 生化指标检测 采用全自动生化分析仪分析患者的天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总蛋白（TP）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（ALB）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，非正态分布数据采用对数转换后符合正态分布，组间比较采用独立样本t 检验，计数资料采用χ2检验，相关性采用Pearson 相关分析，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者生化指标和病毒学指标比较

两组患者ALT、AST、TP、ALB、TBIL 水平和HIV RNA 载量比较，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。见表1。

表1 两组患者生化指标和病毒学指标比较（±s）

表1 两组患者生化指标和病毒学指标比较（±s）

注：ALT：丙氨酸氨基转移酶；AST：天冬氨酸氨基转移酶；TP：总蛋白；ALB：白蛋白；TBIL：总胆红素；HIV：人类免疫缺陷病毒；HBV：乙型肝炎病毒；“-”：无数据

组别 生化指标ALT（U/L） AST（U/L） TP（g/L） ALB（g/L） TBIL（μmol/L）病毒学指标（log10 cps/mL）HIV RNA HBV DNA单纯感染组（n = 1230）共感染组（n = 148）t 值P 值42.6±64.4 78.3±63.2 6.479＜0.01 40.1±32.5 88.3±82.6 7.034＜0.01 72.3±6.3 71.1±5.4 2.506＜0.01 41.3±5.7 37.1±4.1 10.156＜0.01 13.5±13.4 17.2±18.3 2.384＜0.01 4.8±1.2 6.4±1.1 16.55＜0.01-6.1±1.3

2.2 两组患者外周T 淋巴细胞亚群比较

两组患者CD4+、CD8+、CD3+T 淋巴细胞亚群计数和CD4+/CD8+比较，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。见表2。

2.3 HIV、HBV 病毒载量与外周T 淋巴细胞亚群的相关性

HIV RNA 载量与HBV DNA 载量呈正相关（r =0.471）；CD4+/CD8+与HBV DNA 载量呈负相关（r =-0.412）；CD4+、CD4+/CD8+与HIV RNA 载量呈负相关（r=-0.841、-0.583）。 见表3。

3 讨论

HIV 和HBV 具有相似的传播途径（主要是性传播、静脉吸毒传播）和易感人群，因此HIV 和HBV 共感染现象在我国和全世界范围内都十分普遍，虽然HBV 属于DNA 病毒而HIV 属于RNA 逆转录病毒，但HBV 与HIV 在复制能力和基因结构上均有相似之处，且HBV 同样具有感染T 淋巴细胞的能力[8]。 目前，我国缺乏有关HIV、HBV 共感染的大规模调查，卫大英等[9]调查显示，HIV、HBV 共感染的主要原因是静脉注射毒品，约93.6%的静脉吸毒HIV 患者共感染HBV。有报道指出，HIV、HBV 共感染加速了艾滋病的病情发展，增加了治疗的肝毒性，并降低了患者生存率[10-11]，因此，艾滋病和HIV 感染患者中，共感染其他病毒尤其是HBV 感染情况的调查对于提高艾滋病和HIV 感染的治疗效果具有重要意义。 HIV 的病毒载量对HIV 感染患者的生存率具有显著影响，然而对HIV、HBV 共感染患者中病毒载量和外周T 淋巴细胞亚群的相关性研究较少。 在HIV、HBV 共感染患者体内，HIV 与HBV 的存在是呈竞争性相互抑制关系，还是存在一定程度的促进作用仍未有统一定论，且共感染患者中病毒载量与患者病情尤其是对肝脏和免疫系统的影响是否与单纯HIV 感染患者的情况相同尚需要大量的研究进行证实。 王海斌[12]调查了HIV、HBV、丙型肝炎病毒三重病毒共感染患者中病毒载量与T 淋巴细胞亚群的关系发现，HBV 和丙型肝炎病毒的病毒载量与HIV 病毒载量具有相关性，且HBV 的病毒载量与T 淋巴细胞亚群呈负相关，但HIV 和丙型肝炎病毒的病毒载量与T 淋巴细胞亚群无相关性，提示三重感染患者对免疫系统的破坏以HBV 对患者的影响为主，而与HIV 的关系较小，提示HBV 虽然促进HIV 的复制，但是会抑制其对机体免疫功能的破坏。 黄海军等[13]研究肝炎患者（B 型和C 型）病毒载量与T 淋巴细胞亚群相关性发现，慢性乙型肝炎患者基因型与病毒载量和集体细胞免疫存在一定相关性，提示HBV 对于患者的免疫系统具有一定的破坏作用[14-15]。

表2 两组患者外周T 淋巴细胞亚群比较（±s）

表2 两组患者外周T 淋巴细胞亚群比较（±s）

组别 CD4+（个/μL）CD8+（个/μL）CD3+（个/μL）CD4+/CD8+单纯感染组（n=1230）共感染组（n=148）t 值P 值230.5±186.3 130.1±116.3 9.180＜0.01 881.2±665.8 654.2±401.2 5.965＜0.01 1332.5±902.6 1110.5±503.8 4.553＜0.01 0.34±0.26 0.21±0.18 7.856＜0.01

表3 HIV、HBV 病毒载量与外周T 淋巴细胞亚群的相关性

本研究结果显示，1378 例HIV 患者中，HIV、HBV共感染患者148 例，感染率超过10%，单纯HIV 感染和共感染患者的年龄和性别分布差异无统计学意义；HBV、HIV 共感染患者的肝损伤程度显著高于单纯HIV 感染患者，提示不同年龄和性别的患者共同感染HIV 和HBV 的概率相近，但HBV、HIV 共感染患者的肝损伤程度相较于单纯HIV 感染患者更为严重。 其原因一方面是由于HBV 对肝细胞产生了直接的破坏作用，另一方面是HBV 导致抗病毒治疗对肝细胞的损伤增加，因此在HIV 感染患者中应进行HBV 感染的筛查以确认患者是否共感染HBV，对共感染HBV 的患者应及时进行保肝治疗，降低病毒对肝脏的损伤。本研究还显示，HBV、HIV 共感染患者的HIV 病毒载量显著高于单纯HIV 病毒感染患者，且HIV RNA 载量与HBV DNA 载量呈正相关（r = 0.471），与王海斌[12]的研究结果相近，提示HBV 共感染会促进HIV 感染的病程，原因可能是HBV 感染对患者的免疫功能造成较大的影响，降低了患者免疫系统对HIV 病毒的抑制作用，且HBx 蛋白的发现也支持了这一结论[16]。进一步分析共感染患者中HIV、HBV 病毒载量与T淋巴细胞亚群的相关性发现，在共感染患者中单纯感染组与共感染组的HIV RNA 载量和外周T 淋巴细胞计数比较，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）；CD4+/CD8+与HBV DNA 载量呈负相关（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+与HIV RNA 载量呈负相关（r = -0.841、-0.583）。 本研究结果提示HIV、HBV 共感染会增加HIV 感染患者的免疫损伤， 且免疫损伤程度不仅与HBV 的感染程度（即病毒载量）相关，而且与HIV 的感染程度也有一定的相关性。 HIV 病毒载量与CD4+、CD4+/CD8+的相关性较HBV 更为密切，因此笔者推测共感染患者中免疫损伤主要由HIV 引起；HBV 会增加HIV 的病毒载量， 因此其与患者的免疫损伤指标有一定的相关性

综上所述，HBV 可能存在促进HIV 复制的功能，因此患者的肝损伤和免疫损伤较单纯HIV 感染更为严重，在临床上应引起重视。

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