血尿康胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 含量测定

2015-01-19李冬云李霞莉

中国药业 2015年12期

李冬云，李霞莉

(1. 陕西省西安市雁塔区中医医院，陕西西安 710061; 2. 清华德人西安幸福制药有限公司，陕西西安 710043)

血尿康胶囊为医院制剂，由三七、地黄、发酵虫草菌粉(Cs-4)、墨旱莲、琥珀、白及等组方，主治慢性肾炎或其他各种肾病引起的以肾小球源性血尿为主的疾病，方中三七为主药，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1是三七的主要化学成分或特征成分。该药临床疗效显著，但原标准无定量检测方法。为提高该制剂的质量标准，本研究中应用高效液相色谱(HPLC)法对血尿康胶囊中上述3 种成分的含量进行了测定，现报道如下。

1 仪器与试药

日立L-2000 型液相色谱仪，D2000 型色谱工作站(日本日立公司);AG285 型电子天平(梅特勒公司);KQ-100DE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。人参皂苷Rg1对照品(批号为110703-200711)，人参皂苷Rb1对照品(批号为110704-200623)，三七皂苷R1对照品(批号为110745-200725)，均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用;血尿康胶囊(西安同济医院，批号分别为121003，121005，121008，121101，121102，121104);乙腈(TEDA 公司)为色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水溶液，梯度洗脱见表1;流速:1.0 mL /min;柱温:25 ℃;检测波长:203 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品适量，用甲醇溶解并制成每1 mL 分别含0.4 mg 人参皂苷Rb1、0.4 mg 人参皂苷Rg1和0.1 mg 三七皂苷R1的对照品溶液。取本品胶囊10 粒，倒出内容物，混匀，取2.25 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理(250 W，频率50 kHz)30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液[2]。按处方比例称取除三七外的原料，按成品工艺法制备缺三七的空白制剂，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:按拟订色谱条件，分别对供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液进行分析。结果，阴性对照品溶液在与对照品溶液相同位置上，无相应色谱峰出现(见图1)，表明阴性对照无干扰。

线性关系考察:精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品适量，用甲醇溶解并制成每1 mL 分别含0.450 2 mg人参皂苷Rg1、0.404 8 mg 人参皂苷Rb1和0.099 8 mg 三七皂苷R1的对照品溶液，分别精密吸取各对照品溶液2，4，8，12，16，20 μL，按拟订色谱条件进样测定峰面积，以进样量(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程，人参皂苷Rg1为Y=289.22 X+2.21，r=0.999 7(n=6)，进样量线性范围为0.900 4 ～9.004 μg;人参皂苷Rb1为 Y =215.4 X -3.21，r=0.999 7(n=6)，进样量线性范围为0.809 6 ～8.096 μg;三七皂苷R1为Y=270.04 X-7.1，r=0.999 9(n=6)，进样量线性范围为0.199 6 ～1.996 μg。

表1 流动相梯度洗脱表

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取同一供试品溶液，重复进样6 次。结果峰面积的RSD 人参皂苷Rg1为1.51%(n=6)，人参皂苷Rb1为1.43%(n=6)，三七皂苷R1为1.23%(n=6)，表明该方法精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为121003)6 份，每份1 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果三七总皂苷含量平均值为14.6 mg/g，RSD 为0.89%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，于室温下放置0，4，12，24，48 h后，分别进样10 μL，按拟订色谱条件进样测定。结果供试品溶液在48h 内峰面积积分值的变化是由测定误差引起，测定误差的RSD＜2%，符合定量分析要求，说明供试品溶液在48 h 内基本稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为121003，含三七皂苷R11.458 mg/g，人参皂苷Rg16.905 mg/g、人参皂苷Rb16.302 mg/g)0.6 g，共9 份，每3 份样品为1 组，共3 组，置具塞锥形瓶中，每组分别加入含三七皂苷R1(0.099 8 g/L)、人参皂苷Rg1(0.450 2 g/L)人参皂苷Rb1(0.404 8 g/L)对照品甲醇溶液8，10，12 mL，照2.2 项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表2。