荜澄茄不同极性提取物对豚鼠胆结石形成及其生化指标的影响

张小丽，张 涛，陈瑞明，张亚红，姜姗姗，李 芳，柴 焱，张 天（.陕西省中医药研究院中药研究所，西安7000；.清华德人西安幸福制药有限公司，西安 7004；.中国药科大学药学院，南京 98）

荜澄茄不同极性提取物对豚鼠胆结石形成及其生化指标的影响

张小丽1，张 涛2，陈瑞明1，张亚红1，姜姗姗1，李 芳1，柴 焱1，张 天3（1.陕西省中医药研究院中药研究所，西安710003；2.清华德人西安幸福制药有限公司，西安 710043；3.中国药科大学药学院，南京 211198）

目的 观察荜澄茄不同极性提取物对豚鼠胆石症的干预作用。方法 用致石饲料建立豚鼠胆结石模型，荜澄茄不同极性提取物灌胃给药，比较各组豚鼠的成石率，并检测血脂、胆汁成分等指标。结果 荜澄茄醚提物1.2g·kg－1、醇提物1.7g·kg－1、水提物2.8g·kg－1、混合物2.55g·kg－1具有抑制豚鼠胆结石形成作用，增加胆结石豚鼠胆囊中的胆汁量。醚提物1.2g·kg－1可降低胆汁中的总胆红素和胆固醇含量，可降低Ca2＋的浓度；水提物2.8g·kg－1和混合物2.55g·kg－1可降低胆汁中胆固醇含量；醇提物1.7g·kg－1可降低血液中胆固醇的含量；混合物2.55g·kg－1可提高血液高密度脂蛋白。其中醚提物作用最强，醇提物其次。结论 荜澄茄制剂可以作为胆囊炎、胆管炎和胆石症的治疗制剂。

荜澄茄提取物；胆石症；血脂；胆汁成分

荜澄茄（Litseae fructus）又名山鸡椒、山苍子，系樟科木姜子属植物山鸡椒Litseacubeba（Lour.）Pers.的成熟果实。以前的研究发现，荜澄茄有利胆、镇痛、抗炎、抗溃疡和抗腹泻作用，有资料显示有一定的溶石作用［1］，我们对荜澄茄不同极性提取物的抗炎、镇痛、溶石及利胆作用进行了系统研究。本文报道采用豚鼠胆结石模型研究荜澄茄不同极性提取物对胆结石形成及其生化指标的影响。

1 仪器与材料

1.1 仪器 TBA－40FR全自动生化分析仪，日本东芝公司产品。

1.2 试药 荜澄茄（西安市药材公司，产地四川省，由陕西省中医药研究院化学研究室李芳副研究员等鉴定并提取（1g醚提取物相当于原药材13.3g；1g醇提取物相当于原药材8.2g；1g醚提取物相当于原药材5.1g；混合物按提取比例混合）。熊去氧胆酸片（成都市湔江制药厂生产，规格：50mg，用法用量：每日8～10mg·kg－1，豚鼠用量56mg·kg－1.）；酪蛋白（郑州成果食品添加剂有限公司，2 000g／袋）；微晶纤维素（国药集团化学试剂有限公司，批号F20100126）；胆酸钠（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号20100528）；胆固醇（西安化学试剂厂，批号940107）；总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）试剂盒由北京九强生物技术有限公司生产；其他生化试剂均为宁波美康生物科技有限公司产品。

1.3 动物 豚鼠，体质量220～300g，雌雄各半，由西安交通大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（陕）2008－008。

2 方法

2.1 制备造模用致石性饲料 具体配方为（质量分数）：正常饲料90%，酪蛋白2%，蔗糖3%，猪油2%，微晶纤维素2%，胆酸钠0.04%，胆固醇0.12%。

2.2 造模［2－3］豚鼠70只，豚鼠体质量220～300g，雌雄各半，先以基础饲料喂养1周，取10只作为对照组继续给予基础饲料；其余豚鼠喂以致石饲料造模，共8周。造模后，按体质量、性别随机分成6组：模型组、荜澄茄水提物2.8g·kg－1、荜澄茄醇提物1.7g·kg－1、荜澄茄醚提物1.2g·kg－1、荜澄茄混合物2.55g·kg－1及阳性对照药熊去氧胆酸（56mg·kg－1），分别按剂量灌胃给药或水，每天1次，灌胃4周。

2.3 结石的观察及样品的采集 实验最后1d，动物禁食24h，用100g·L－1乌拉坦麻醉后迅速打开腹腔，颈总动脉插管取血，分离血清，分离胆囊，用注射器吸出全部胆汁，计量体积，避光待检。解剖胆囊，显微镜下观察结石是否形成，统计成石率。胆汁离心，用于生化测定。胆汁生化测定按试剂盒说明书提供的方法测定胆汁总胆红素、胆固醇、Ca2＋和胆汁酸，血清生化测定按试剂盒说明书提供的方法测血清、胆固醇、三酰甘油及高密度脂蛋白的含量。

3 结果

3.1 荜澄茄提取物对豚鼠胆汁量及结石率的影响

在微镜下可观察到有黑绿色的胆结石形成，计量胆汁体积和胆结石成石率。见表1。

表1 荜澄茄对豚鼠胆汁量及结石率的影响Tab.1 Effect of Litseae fructus on biliary amount and stone formation rate （±s，n＝7）

表1 荜澄茄对豚鼠胆汁量及结石率的影响Tab.1 Effect of Litseae fructus on biliary amount and stone formation rate （±s，n＝7）

注：与水对照组比较：＃P＜0.05；与模型组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。

组别 剂量／g·kg－1 胆汁量／mL 结石率／%水对照 0.70±0.27＃0模型组 0.33±0.13＃ 83.3醚提物 1.2 0.69±0.09＊＊＊ 42.9醇提物 1.7 0.90±0.21＊＊＊ 42.9水提物 2.8 0.64±0.16＊＊ 66.7混合物 2.55 1.07±0.39＊＊ 57.0熊去氧胆酸 0.056 0.83±0.14＊＊28.6

结果表明，模型组胆汁量与水对照组相比有显著性差异（P＜0.05），造模成功；荜澄茄醚提组和醇提组与模型组相比有显著性差异（P＜0.001）；而荜澄茄水提组与混合组和模型组比较也有显著性差异（P＜0.01）。荜澄茄各种极性的提取物均能明显增加豚鼠的胆汁量，并降低结石率。

3.2 荜澄茄提取物对豚鼠胆汁生化指标的影响 结果表明，与模型组比较：荜澄茄醚提组、醇提组及熊去氧胆酸组胆汁中总胆红素显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；荜澄茄各组提取物及熊去氧胆酸组胆汁中胆固醇显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；荜澄茄醚提组的Ca2＋显著降低（P＜0.05）。胆汁酸虽然没有统计学的显著性，但可以看出有一定的升高趋势。比较而言，醚提物的作用最强。这些作用均有利于溶解胆结石。见表2。

表2 荜澄茄不同极性提取物对豚鼠胆汁生化指标的影响Tab.2 Effects of different Litseae fructus extracts on bili－biochemical index in guinea pigs±s，n＝7）

表2 荜澄茄不同极性提取物对豚鼠胆汁生化指标的影响Tab.2 Effects of different Litseae fructus extracts on bili－biochemical index in guinea pigs±s，n＝7）

注：与模型组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。

组别 剂量／g·kg－1 总胆红素／μmol·L－1 胆汁酸／μmol·L－1 胆固醇／mmol·L－1 Ca2＋／mg·L－1水对照 29.50±7.37 24 124.3±2 963.4 0.05±0.08 0.89±0.13模型组 35.58±3.63 25 003.3±3 645.3 0.13±0.07 0.98±0.14醚提组 1.2 26.97±0.72＊＊ 26 054.0±4 333.5 0.01±0.01＊＊ 0.80±0.13＊醇提组 1.7 28.67±6.79＊ 26 930.0±1 870.4 0.03±0.05＊ 0.82±0.15水提组 2.8 32.73±3.65 25 158.6±9 962.2 0.02±0.01＊＊ 0.90±0.36混合组 2.55 34.67±12.55 26 491.4±4 635.9 0.04±0.02＊＊ 0.95±0.13熊去氧胆酸 0.056 24.63±4.99＊＊ 23 407.9±5 310.4 0.05±0.02＊0.85±0.16

3.3 荜澄茄提取物对豚鼠血脂的影响 见表3。结果表明：模型组与水对照组相比，胆固醇显著升高（P＜0.01）；醚提物、醇提物、混合组和熊去氧胆酸组与模型组相比，胆固醇含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；水提物和混合组与模型组相比，高密度脂蛋白含量有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01）。

表3 荜澄茄不同极性提取物对豚鼠血脂的影响Tab.3 Effects of different Litseae fructus extracts on lipid in guinea pigs ±s，n＝7）

表3 荜澄茄不同极性提取物对豚鼠血脂的影响Tab.3 Effects of different Litseae fructus extracts on lipid in guinea pigs ±s，n＝7）

注：与水对照组比较＃＃P＜0.01；与模型组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001。

组别 剂量／g·kg－1胆固醇／mmol·L－1三酰甘油／mmol·L－1高密度脂蛋白／mmol·L－1水对照1.14±0.22 0.54±0.08 0.25±0.05模型组 2.80±0.84＃＃0.53±0.12 0.24±0.05醚提组 1.2 1.43±0.18＊＊0.57±0.13 0.26±0.03醇提组 1.7 1.83±0.58＊0.61±0.05 0.32±0.10水提组 2.8 2.03±0.71 0.57±0.07 0.35±0.11＊混合组 2.55 1.06±0.16＊＊0.54±0.18 0.49±0.20＊＊熊去氧胆酸 0.056 1.01±0.23＊＊＊0.60±0.17 0.21±0.32

4 讨论

随着人们生活水平的提高，肝胆疾病发病率不断上升。现代医学在治疗胆囊炎、胆结石、消化不良等方面均需要利胆、抗炎、镇痛和溶石作用，主要用去氧胆酸、消炎利胆片、熊去氧胆酸、环丙沙星［6］等，但用药时间长，大量使用有可能损害肝脏，停药后结石有可能复发。中医将此类疾病归于肝郁气滞、湿热证，多采用清热利湿的药物治疗，应用较多的如茵陈、大黄、金钱草、栀子及威灵仙等，中药复方有茵陈蒿汤、清开灵、舒肝利胆排石口服液。但该类疾病也涉及有些病人是因虚寒而致病，临床上忽视了这方面的对证治疗。荜澄茄是一味温里药，对于它的研究，对因虚寒而致病的患者有积极的临床意义。豚鼠胆结石形成模型实验发现，荜澄茄不同极性提取物都有抑制豚鼠胆结石形成作用。不同极性提取物都能够增加胆结石豚鼠胆囊中的胆汁量，降低胆汁中的总胆红素和胆固醇含量。不同极性提取物均具有溶石、利胆、抗炎及镇痛作用，相比较：醚提物的作用最强，醇提物次之。患胆囊炎、胆管炎和胆石症的患者有望采用荜澄茄制剂进行治疗，而我们所做镇痛抗炎及其抗菌作用的研究将有助于消除胆道炎症，改善其症状。

［1］杨华，易红.中药胆结石直接溶解剂的实验与临床研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2006，13（5）：90－91，105.

［2］李健，杨卓欣，张永斌，等.针药预防胆固醇性胆囊结石的实验研究［J］.中国中医药信息杂志，2006，13（12）：35－36.

［3］姜志坑，瞿琼，周文豪，等.金钱对座合剂治疗胆石症的实验研究［J］.中国中医药科技，2007，14（5）：339－340.

［4］周文江，杨幼明，方玉梅，等.豚鼠胆囊胆固醇结石模型的建立［J］.中国实验动物学杂志，1999，9（4）：1999－2001.

［5］张静喆，章学林，梁晓强，等.不同中药对豚鼠胆色素结石模型的生化学影响［J］.中西医结合学报，2008，6（8）：856－859.

［6］李震，常保生，蒋德安.环丙沙星治疗胆道疾病临床观察［J］.西北药学杂志，2000，15（4）：212.

Effect of various Litseae fructus extracts on experimental gallstone and biochemical index in guinea pigs

ZHANG Xiaoli1，ZHANG Tao2，CHEN Ruiming1，ZHANG Yahong1，JIANG Shanshan1，LI Fang1，CHAI Yan1，ZHAGN Tian3
（1.Institute of Medicine，Shaanxi Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Xi’an 710003，China；2.Qinghuaderen Xi’an Pharmaceutical Limited Company，Xi’an 710043，China；3.School of Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China）

Objective To investigate the effects of various Litseae fructus extracts on experimental gallstone in guinea pigs.Method Gallstone guinea pigs model was established and different extracts were administered by ig..The rate of gallstone formation and the indexes including plasma lipids and biliary component were measured and compared.Results The Litseae fructus extracts with different polarity，such as ether extract 1.2g·kg－1，alcoholic extract 1.7g·kg－1，water extract 2.8g·kg－1，and mixture2.55g·kg－1，can inhibit the formation of gallstone in guinea pigs，increase the amount of bile in the gallbladder.Ether extract 1.2g·kg－1decreased the contents of T－Bil and TC in bile，and the concentration of Ca2＋.Water extract 2.8g·kg－1and mixture 2.55g·kg－1decreased the contents of TC in bile.Alcoholic extract 1.7g·kg－1decreased the contents of TC in blood.Mixture 2.55g·kg－1increased the high density protein in blood.The effect of ether extract was the strongest and the next was the alcohol extract.Conclusion The Litseae fructus extracts，especially ether extracts，could be used as therapeutic agents for cholecystitis，cholangitis and cholelithiasis.

Litseae fructus extracts；cholelithiasis；plasma lipid；biliary component.

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.016

R965

A

1004－2407（2015）04－0376－03

2014－12－18）

陕西省中医药管理局科研项目（编号：2007－63）