毛细管GC法测定还原型谷胱甘肽中有机溶剂的残留量

李 璐，李丹凤（.广西－东盟食品药品安全检验检测中心，南宁53000；.广西壮族自治区食品药品检验所，南宁 5300）

毛细管GC法测定还原型谷胱甘肽中有机溶剂的残留量

李 璐1，李丹凤2（1.广西－东盟食品药品安全检验检测中心，南宁530001；2.广西壮族自治区食品药品检验所，南宁 530021）

目的 建立毛细管气相色谱法测定还原型谷胱甘肽中4种有机溶剂的残留量。方法 采用气相色谱法，DB－624毛细管柱（60m×0.25mm×0.25μm），FID检测器，柱温为程序升温，以DMF－水（3∶7）为溶剂，测定了还原型谷胱甘肽原料药中甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃4种有机溶剂的残留量。结果 4种有机溶剂均能完全分离，在所考察的范围内线性关系良好，加样回收率均满意。结论 该方法灵敏、准确，适用于还原型谷胱甘肽原料中有机溶剂残留量的检测。

还原型谷胱甘肽；有机溶剂残留；毛细管气相色谱

还原型谷胱甘肽是一种普遍存在于细胞中的重要抗氧化剂，临床主要用于治疗肝脏疾病、肿瘤、氧中毒、衰老和内分泌疾病，并作为生物活性添加剂及抗氧化剂用于食品领域。目前，谷胱甘肽化学合成生产工艺使用到无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、四氢呋喃等有机溶剂［1］，分离提纯过程使用了乙醇作为提取溶媒［2］，但目前该产品的质量标准中尚没有检测方法对上述有机溶剂进行控制，为了控制该产品的质量，保证用药安全，笔者参照《中国药典》（2010年版）二部附录［3］和相关文献［4－8］，采用气相色谱法检测甲醇、乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯4种有机溶剂的残留量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 6890气相色谱仪，氢火焰离子检测器（FID）.

1.2 试药 还原型谷胱甘肽原料药（浙江海正药业股份有限公司，批号121101，121102，121103）。甲醇、乙醇和N，N－二甲基甲酰胺（DMF）均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：DB－624毛细管柱（60m× 0.25mm×0.25μm）；程序升温：以40℃保持10 min，以30℃·min－1的升温速率升至200℃，维持时间5min，进样口温度：200℃；检测器温度：220℃；检测器：FID；设置分流比10∶1；载气为氮气，载气流速：3mL·min－1；氢气流速40mL·min－1，空气流速400mL·min－1；进样量：1μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 对照品储备液：精密称取甲醇0.108 54g、乙醇0.100 21g、乙酸乙酯0.100 21g、四氢呋喃0.053 36g，分别置于100mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，得到4种对照品储备液。

混合对照品使用液：分别精密量取甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃4种对照品储备液15，25，25和10mL，置于同一100mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，作为混合对照品使用液。

混合对照品溶液：精密量取混合对照品储备液4mL，置于20mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取谷胱甘肽（批号121101）0.1g，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，过滤，取续滤液，即得。

2.3 专属性实验 分别取溶剂、混合对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，见图1，甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃的保留时间分别为5.69，6.93，11.74和12.27min，理论板数均大于5 000，分离度均大于1.5，专属性良好。

图1 气相色谱图A.空白溶剂；B.残留有机溶剂；1.甲醇；2.乙醇；3.乙酸乙酯；4.四氢呋喃Fig.1 GC chromatogramsA.blank solvent；B.residual organic solvents；1.menthanol；2.ethanol；3.dichlormethane；4.tetrahydrofuran

2.4 精密度实验 取混合对照品溶液1μL，重复6次注入气相色谱仪，记录色谱图，取其峰面积，以外标法计算测定结果，并计算相对标准偏差（RSD）。甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃的RSD分别为0.7%，0.1%，0.1%和0.4%，表明仪器精密度良好。

2.5 线性范围 分别精密移取混合对照品使用液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0和4.0mL，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液，共6份，分别精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积A对应质量浓度C（μg·mL－1）进行线性回归，结果见表1。

表1 各有机溶剂线性回归方程Tab.1 Linearity equations of the solvents （n＝6）

2.6 定量限与检测限 取混合对照品使用液1mL，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，摇匀，精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，结果甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃的信噪比（S／N）分别为64.7，56.0，89.0和26.2，由此计算检出限分别为0.754 2，1.340 8，0.842 78和0.610 4μg·mL－1，定量限分别为2.513 9，4.469 2，2.809 3和2.034 6 μg·mL－1。

2.7 加样回收实验 取谷胱甘肽（批号121101）0.1 g，分别置于10mL量瓶中，分别加入混合对照品使用液1.6，2.0和2.4mL，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，得低、中、高3个质量浓度的供试品溶液，进样1μL测定，按外标法计算回收率，结果见表2。

表2 谷胱甘肽中4种残留有机溶剂回收率Tab.2 Recovery rate of residual organic solvents in reduced glutathione

2.8 重复性实验 取6份供试品溶液和混合对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，取其峰面积，以外标法计算测定结果，其中甲醇RSD为1.5%，乙醇RSD为0.5%，表明该法重复性良好。

2.9 样品测定 精密量取混合对照品溶液1μL，重复进样6次。另取3批样品，批号分别为121101，121102，121103，精密称定0.1g，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀释至刻度，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，3批样品的实验结果见表3，均符合《中国药典》2010年版（二部）的要求。

表3 谷胱甘肽中有机溶剂的测定结果Tab.3 Results of determination of residual organic solvents in reduced glutathione

3 讨论

谷胱甘肽又名还原型谷胱甘肽，易溶于水、稀醇、液氨和N，N－二甲基甲酰胺（DMF），而微溶于或不溶于醇、醚和酮。考察谷胱甘肽在水、DMF－水（3∶7）、DMF－水（7∶3）和DMF中的溶解性，进行了比较，供试品称量约为0.1g，分别加上述溶剂10mL，结果在水、DMF－水（3∶7）中能完全溶解，在DMF－水（7∶3）溶液中超声处理5min溶解完全，在DMF中超声处理15min溶解完全。取上述4种溶剂进样分析，发现前2种溶剂峰较小，后2种溶剂峰很大。为了兼顾样品的溶解性、缓解进样针进样阻力及减小溶剂峰的影响，最终选择用DMF－水（3∶7）作为溶解供试品的溶剂。

在建立的有机溶剂残留量的GC检查方法过程中，曾尝试过HP－5、DB－624和HP－INNOWAX 3种不同极性的弹性石英毛细管柱进行分析实验，考察各目标物的分离度，结果用DB－624的分离度和拖尾因子均优于其他2种，故选其为分析用色谱柱进行后续实验。

药品中溶剂残留不仅有可能增加药品不良反应，而且影响药物的稳定性。被检测的4种溶剂中甲醇和四氢呋喃为二类溶剂，乙醇和乙酸乙酯为三类溶剂，在《中国药典》2010年版二部附录［3］中都有很严格的限量控制范围。在3批样品的检测结果中虽然均未检出四氢呋喃和乙酸乙酯，但为了确保样品质量，减少不良反应，建议检测谷胱甘肽中这4种残留溶剂。

实验表明该检验方法准确可靠，可用于谷胱甘肽中甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃残留量的检查。此法能满足药品分析的要求，可作为生产过程中的质量监控，也可用于上市产品的质量检测。

［1］徐秋霞.谷胱甘肽的化学合成研究［D］.上海：东华大学，2010：14－19.

［2］马建，朱义福，周新荣，等.有机溶剂沉淀法初步提纯谷胱甘肽抽提液的研究［J］.现代化工，2013，33（9）：53－55.

［3］国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录61－65.

［4］肖健.气相色谱法测定普瑞巴林原料药中有机溶剂残留量［J］.中国药业，2014，23（17）：44－45.

［5］焦豪妍，沈小钟，张现涛，等.氧化型谷胱甘肽中有机溶剂残留的毛细管GC测定［J］.今日药学，2011，21（6）：335－336.

［6］赖成敏，肖健，黄仁杰.气相色谱法测定伏立诺他原料药中的有机溶剂残留量［J］.西北药学杂志，2012，27（6）：536－538.

［7］张长军，刘军，沈庆钦，等.毛细管气相色谱法测定霉酚酸酯原料药中有机溶剂残留量［J］.化学分析计量，2014，23（4）：60－62.

［8］张秉华，马雯霞，王发.气相色谱法测定硝酸咪康唑原料的残留溶剂［J］.西北药学杂志，2014，29（4）：368－370.

Determination of residual organic solvents in reduced glutathione by capillary GC

LI Lu1，LI Danfeng2（1.Guangxi－ASEAN Test Center for Food and Drug Safety，Nanning 530001，China；2.Guangxi Institute for Food and Drug Control，Nanning 530021，China）

Objective To establish a gas chromatography（GC）method for the determination of residual organic solvents in reduced glutathione.Method Capillary gas chromatography（GC）was applied.The residues of menthanol，ethanol，dichlormethane and tetrahydrofuran were determined by GC with DB－624capillary column（60m×0.25mm×0.25μm），and hydrogen flame ionization detector（FID）.The column temperature was programmed.The solvent was DMF－water（3∶7）.Results The four solvents were separated completely and showed a linear relationship in the investigated range.Satisfactory recovery rate were obtained.Conclusion The established method is sensitive，accurate and suitable for the determination of residual organic solvents in reduced glutathione.

reduced glutathione；solvent residue；capillary GC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.013

R927.2

A

1004－2407（2015）04－0369－03

2014－12－17）