甘草汁蒸制远志对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的影响

梁 晓， 张学兰， 李慧芬， 孟 艳

（山东中医药大学，山东济南250355）

甘草汁蒸制远志对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的影响

梁 晓， 张学兰*， 李慧芬， 孟 艳

（山东中医药大学，山东济南250355）

目的观察甘草汁蒸制远志过程中对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的动态变化。方法采用HPLC同时测定远志生品及甘草汁蒸制不同时间 （4、8、12、16、20、24 h）炮制品中远志皂苷B和细叶远志皂苷的量。色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；体积流量1.0mL/min；检测波长210 nm。结果随着蒸制时间的延长，细叶远志皂苷含有量逐渐升高，而远志皂苷B含有量变化不大。结论远志中远志皂苷B含有量较高，达到2.23%；甘草汁蒸制仅对远志中细叶远志皂苷含有量影响显著，但对远志皂苷B含有量无明显影响。

远志；甘草汁蒸制；远志皂苷B；细叶远志皂苷；HPLC

远志为临床常用的中药，具有安神益智、交通心肾等功效，但生远志有毒，能 “戟人咽喉”，故临床主用其炮制品入药。历代远志的炮制方法主要有去心、甘草汁煮、甘草汁蒸、酒蒸、蜜炙等，现代主要采用甘草汁制［1］。中医认为，甘草汁制远志可减缓其 “戟人咽喉”的燥性，协同其补脾益气、安神益智之功效［2］。

远志主要含有三萜皂苷类、糖酯类等成分。其中皂苷类成分主要有远志皂苷A、B、E、F、G、K、V等30余种；糖酯类成分主要有3，6＇-二芥子酰基蔗糖、tenuifoliside A～E、tenuifolise A～Q、西伯利亚远志糖A1～A6等［3］。药理研究表明，远志中皂苷类成分具有抗痴呆、脑保护、镇静和免疫佐剂等活性［4-7］。而远志皂苷碱水解物具有安神益智的药效，但毒性较原皂苷显著降低［8］。另有研究表明，生远志急性毒性较大，可显著抑制大鼠的胃肠运动和消化功能，而甘草制远志的抑制作用明显减弱［9-10］。远志经不同方法炮制后，远志酸、远志皂苷元含有量略有增加［11-12］，但迄今其炮制机理尚不明确，炮制对远志中其他皂苷类成分的影响少有报道。本实验采用HPLC同时测定远志生品及甘草汁蒸制不同时间炮制品中远志皂苷B与细叶远志皂苷，探讨远志甘草汁蒸制过程中远志皂苷B与细叶远志皂苷的变化规律，为揭示远志炮制机理及制定其不同饮片的质量标准提供科学依据。

1 仪器与试药

L-2000高效液相色谱仪 （日本日立公司）；FA1604N型电子天平 （上海精密科学仪器有限公司）；KQ-250E型医用超声波清洗器 （江苏昆山市超声仪器有限公司）；高效液相用乙腈 （色谱纯，德国默克公司）；娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯 （国药集团化学试剂有限公司）。

远志饮片购自山东百味堂中药饮片有限公司，经山东中医药大学中药鉴定教研室周凤琴教授鉴定为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd干燥根的去心段状饮片。制远志方法为取净远志共6份，各50 g，分别加甘草汁25 m L（甘草汁的制备：取净甘草片36 g，加相当于甘草片质量的10、8倍量水，煎煮2次，每次1 h，合并两次煎液，浓缩至300 mL），置不锈钢饭盒中，闷润1 h，分别蒸制4、8、12、16、20、24 h，取出，40℃烘干。

远志皂苷B对照品 （成都普瑞法科技有限公司，批号MUST-13100801，纯度≥98%）；细叶远志皂苷对照品 （成都曼思特生物科技有限公司，批号A0345，纯度≥98%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈 （A）-0.05%磷酸溶液 （B），梯度洗脱 （0～15 min，28%A；15～20 min，28%→40%A；20～30 min，40%A；检测波长210 nm，体积流量1.0 mL/min，进样量40μL。在上述色谱条件下，远志皂苷B、细叶远 志皂苷与其他组分分离度良好，色谱图见图1。

图1 混合对照品（A）、远志生品（B）和甘草汁蒸制24 h（C）HPLC图Fig.1 Chromatograms ofm ixed reference substances onjisaponin B and tenuifolin（A），raw herbal pieces（B）and licorice juice steam ing 24 h（C）

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取远志皂苷B 5.02 mg、细叶远志皂苷1.91 mg，分别置于5 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取远志皂苷B和细叶远志皂苷对照品溶液各0.5 mL，置同一2 m L量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，制成远志皂苷B质量浓度为0.251 mg/m L，细叶远皂苷质量浓度为0.095 5 mg/m L的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取远志生品及各炮制品粉末 （过40目筛）各约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声提取60 min，取出，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜 （0.45μm）滤过，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 精取 “2.2”项下混合对照品溶液3、8、10、20、40μL，注入液相色谱仪，按 “2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱峰峰面积，以进样量X（μg）为横坐标，以色谱峰面积 （Y）为纵坐标，绘制标准曲线，远志皂苷B线性回归方程为Y=286.54 X-24.030，r=0.999 8，其线性范围为0.750～10.0μg；细叶远志皂苷线性回归方程为Y=286.48X+36.024，r=0.999 9，其线性范围为0.285～3.80μg。

2.5 精密度试验 精取甘草汁蒸制20 h远志供试品溶液，按 “2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，测定细叶远志皂苷和远志皂苷B的峰面积，RSD分别为1.4%、1.1%。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取甘草汁蒸制20 h远志供试品溶液，在室温下自然放置，分别在0、2、4、8、 12、24 h按 “2.1”项下色谱条件测定，测定细叶远志皂苷和远志皂苷B的峰面积，RSD分别是1.7%，1.4%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取甘草汁蒸制20 h远志粉末（过40目筛），平行6份，各约0.25 g，按 “2.2”项下制备供试品溶液，按 “2.1”项下色谱条件依法测定，记录细叶远志皂苷、远志皂苷B的峰面积，计算其含有量，RSD分别为1.6%、1.8%。表明该方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验 取已测知含有量的甘草汁蒸制20 h远志粉末 （过40目筛），共6份，各约0.1 g，精密称定，分别精密加入细叶远志皂苷（0.330 mg/mL）、远志皂苷B（1.10 mg/mL）对照品溶液各1 mL，再以70%甲醇补足至25 mL，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，进样分析，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

2.9 样品含有量测定 精密吸取混合对照品溶液20μL和供试品溶液40μL，注入液相色谱仪分析测定，按干燥品计算样品中各指标成分含有量，结果见表2。

表2 远志皂苷B、细叶远志皂苷含有量测定结果 （n=2）Tab.2 Results of onjisaponin B and tenuifolin content determ ination（n=2）

3 小结与讨论

本研究采用HPLC梯度洗脱的方法同时测定远志生品及甘草汁蒸制远志炮制品中的远志皂苷B和细叶远志皂苷。结果表明，该方法灵敏可靠、重复性好，为完善远志饮片的质量标准提供了准确简便可行的测定方法。

本研究显示，远志生品中细叶远志皂苷含有量甚低，未能检出，而远志皂苷B含有量较高，达2.23%。随着蒸制时间的延长，细叶远志皂苷含有量逐渐增加，而远志皂苷B含有量无明显变化。远志皂苷是由齐墩果酸型五环三萜和苯丙素以及糖类形成的一类酯类化合物，且大多数皂苷分子中含有细叶远志皂苷母核。远志甘草蒸制后，细叶远志皂苷量增加，可能是由于在蒸制过程中，部分皂苷分子中的酯键水解，生成次级苷细叶远志皂苷，而远志皂苷B性质较稳定，在甘草汁蒸制过程中不易水解。远志用甘草汁炮制后缓和燥性，增强安神益智药效，可能与在蒸制过程中部分皂苷类成分水解密切相关，至于甘草汁在炮制中的作用有待深入研究。

《中国药典》2010年版规定，远志饮片中细叶远志皂苷的含量测定方法应用碱水解法［13］，这种方法测定的是远志皂苷经水解后产生的细叶远志皂苷量，不能确切反映炮制品中细叶远志皂苷的真实含有量。为了探讨远志炮制过程中远志皂苷B和细叶远志皂苷的变化规律，本实验采用超声提取后直接测定。

［1］毛福英，赵云生，王建寰.远志炮制历史沿革及研究进展［J］.亚太传统医药，2010，6（10）：148-150.

［2］单建学.远志的炮制及临床应用［J］.湖南中医药导报，2001，7（2）：89.

［3］刘大伟，康利平，马百平.远志化学及药理作用研究进展［J］.国际药学研究，2012，39（1）：32-36.

［4］赵大鹏，李晓峰，陈树沙，等.远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及海马nAChRα7亚基的影响［J］.中国神经免疫学和神经病学杂志，2012，19（5）：349.

［5］Li C J，Yang JZ，Yu SS，et al.Triterpenoid saponins with neuroprotective effects from the roots of Polygala tenuifolia［J］. Planta Med，2008，7（2）：133-141.

［6］Chung IW，Moore N A，Oh W K，et al.Behavioural pharmacology of polygala saponins indicates potential antipsychotic efficacy［J］.Pharmacol Biochem Behav，2002，71（12）：191-195.

［7］Takayuki N，Yujiro S，Hiroaki K，et al.Onjisaponins，from the root of Polygala tenuifolia W illdenow，as effective adjuvants for nasal influenza and diphtheria-pertussis-tetanus vaccines［J］.Vaccine，2001，19（32）：4824-4834.

［8］Xu S P，Yang Y Y，Xue D，et al.Cognitive enhancing effects of Polygalasaponin Hydrolysate inαβ25-35induced amnesic mice［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2011，2011：1-12.

［9］吴晖晖，王 建，刘贤武，等.远志及其不同蜜炙品的急性毒性及其对胃肠运动的影响［J］.四川中医，2006，24（11）：16-18.

［10］王 建，郭 娟，武 云.远志不同炮制品对胃肠运动及消化功能的影响［J］.中药药理与临床，2006，22（3）：120-124.

［11］房敏峰，付志玲，王相人，等.炮制对远志中皂苷元类成分的影响［J］.药物分析杂志，2009，29（3）：452-456.

［12］林敬开，闫小平，官仕杰，等.远志不同炮制品皂苷类成分含量的比较［J］.中药实验方剂学杂志，2011，17（11）：89-91.

［13］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：146.

Effect of Polygala tenuifolia steamed with licorice extract on content changes of onjisaponin B and tenuifolin

LIANG Xiao， ZHANG Xue-lan*， LIHui-fen， MENG Yan

（Shandong University of Tranditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

AIMTo explore the content changes of onjisapion B and tenuifolin in the process of Polygala tenuifolia steamed with licorice extract.M ETHODSThe contents of onjisapion B and tenuifolin in c rude and steamed products of Polygala tenuifolia were determ ined by HPLC at intervals of 4，8，12，16，20，and 24 h.The analyses of samples were performed on Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）with the mobile phase consisting ofwater containing acetonitrile and 0.05%phosphoric acid solution in a gradient program mode，flow rate was 1.0 mL/min.The detection wavelength was set at210 nm.RESULTSWith the extension of steaming time，tenuifolin content increased significantly，but onjisaponin B content had little change.CONCLUSIONOnjisaponin B content in Polygala tenuifolia possesses higher content，reaching 2.23%，steam ing with licorice extract plays a significant role in increasing tenuifolin content，buthas a little influence on onjisaponin B content.

Polygala tenuifolia；steamed with licorice extract；onjisaponin B；tenuifolin；HPLC

R283

A

1001-1528（2015）04-0824-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.029

2014-07-27

国家重大新药创制专项 （2011ZX09102-003-06）

梁 晓 （1989—），女，硕士生，从事中药新药研发与中药炮制原理研究。Tel：15965643940，E-mail：782404001@qq.com

*通信作者：张学兰 （1963—），女，教授，从事中药新药研发与中药炮制研究。Tel：（0531）89628081，E-mail：zhang8832440@sina.com