曙红和TMB显现血潜手印方法的比较研究

2015-01-14时光

湖北警官学院学报 2015年7期

时光

（吉林警察学院，吉林长春130117）

在命案现场上，常留下作案人的血手印。目前，国内外对血潜手印显现方法，在客体适用范围、灵敏度及操作工艺等方面还存在一定不足，即对渗透性客体上的血手印具有较好显现效果，而对非渗透性客体上的血手印，由于试剂极易扩散，显现效果不好。针对这个问题，将曙红和TMB两种显现试剂显现血潜手印的方法，从不同浓度和PH值对显现效果的影响，以及两种显现方法的时效等方面在不同客体上做大量显现实验，然后进行比较研究，遴选出两种最佳显现方法工艺。

一、理论基础

（一）血液成分分析

人体的血液由40%～ 45%的血细胞和55%～60%的血浆组成。血细胞由红细胞、白细胞和血小板组成。血浆是由8%～9%的固体成分和91%～92%的水分所组成。蛋白质占血浆中固体成分的6.5%～8.5%。蛋白质主要有血细胞中的血红蛋白和血浆中的白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等。蛋白质最主要的化学性质就是具有酸碱两性，而影响蛋白质究竟呈现酸性还是碱性的关键因素就是：蛋白质的等电点（PI）和溶液环境PH值的关系。在等电点时，蛋白质的溶解度最小，最容易凝聚而沉淀，这就是用四甲基联苯胺显现时用乙醇来固定血痕的原理。

（二）曙红显现血手印基本原理

曙红，分子式C6H8Ba14O5，分子量647.9，有蓝色光泽，结晶为棕红色粉末，易溶于水，稍溶于醇，不溶于醚。浓的水溶液为深棕红色，淡的溶液（l∶500）为黄红色，有绿色荧光。当溶液的PH值小于蛋白质的等电点，蛋白质质子化而带正电。蛋白显色法的显现原理，是血液中的蛋白质在酸性染色液中呈带正电的阳离子，能与酸性染色溶液中的负离子化合成盐将蛋白染上颜色，从而将血手印染色。

（三）TMB试剂显现血手印基本原理

四甲基联苯胺（英文缩写 TMB），分子式C16H20N2，是一种脂溶性较强的基因，反应产物为深蓝色。当四甲基联苯胺显现液与血手印接触时，新鲜血痕中的过氧化氢酶能使过氧化氢（H2O2）放出初生态的氧（O）；陈旧血痕中（血酶已失去活性）血液卟啉环上的铁离子能起触媒作用，使过氧化氢放出初生态氧（O）；而初生态氧则能氧化四甲基联苯胺，使之成为四甲基联苯胺蓝，从而使血手印呈蓝绿色显出。

二、实验材料及方法

（一）实验器材和试剂

1．实验器材

烧杯，量筒，玻璃棒，试剂瓶，滴管，托盘天平，表面皿，镊子，吹风机，数码照相机，三角架，橡胶手套，医用口罩。

2．化学药品

曙红，无水乙醇，乙酸，丙酮，蒸馏水，甲醛，巴比妥，巴比妥钠，四甲基联苯胺，过氧化氢。

3．试剂配方

（1）曙红试剂配方

曙红 0.2g，乙醇 100ml，乙酸 10ml，甲醛 5ml，巴比妥缓冲液9ml。

（2）曙红试剂洗涤液配方

乙醇 70ml，丙酮 20ml，蒸馏水 15ml，乙酸 5ml。

（3）TMB试剂配方

甲液：TMB(四甲基联苯胺)1g，无水乙醇100ml。

乙液：3%过氧化氢100ml。

（二）制作实验样本

1.收集客体

结合实际和实验允许条件，收集10种客体：

（1）5种渗透性客体：报纸，白纸，本色木，纺织物，硬纸壳。

（2）5种非渗透性客体：玻璃，瓷砖，硬塑料片，人造革，铝合金。

2.准备实验样本

为了保证实验的客观性，捺印人在相同条件下进行捺印，即捺印时的沾血量，捺印至显现的时间间隔，以及血手印的保存条件等必须尽量一致。由于需要比较研究两种显现方法的时效，从实验开始之前，每天捺印一部分血手印作为实验样本。

3.操作工艺

通过查阅曙红和TMB显现法的操作过程，加上多次实验的经验教训，遴选出以下显现操作工艺，从而提高了显现效果。

（1）曙红试剂显现血潜手印的操作工艺

对渗透性客体上的血潜手印显现工艺：

①用无水乙醇反复滴在血手印上进行固定（全挥发后再滴）；

②用滴管将少量曙红试剂滴在血手印上；

③用玻璃棒或用滴管的圆柱面轻轻在客体上滚压使试剂分布均匀；

④将客体晾干；

⑤如果乳突纹线和客体反差不大，则用洗涤液清洗客体，可增大反差。

对非渗透性客体上的血潜手印显现工艺：

①用无水乙醇反复滴在血手印上进行固定（全挥发后再滴）；

②用滴管将少量曙红试剂滴在血手印上；

③用流水对客体表面进行冲洗；

④用吹风机将剩余液体吹干；

⑤如果乳突纹线和客体反差不大，则用洗涤液清洗客体，可增大反差。

（2）TMB试剂显现血潜手印的操作工艺

对渗透性客体上的血潜手印显现工艺：

①用无水乙醇反复滴在血手印上进行固定（全挥发后再滴）；

②将TMB试剂用滴管均匀地滴在被显现的客体上；

③将过氧化氢溶液用滴管滴在被显现的客体上；

④使两种试剂充分混合并均匀盖在血手印上；

⑤反应进行一段时间后倒掉多余试剂晾干。

对非渗透性客体上的血潜手印显现工艺：

①用无水乙醇反复滴在血手印上进行固定（全挥发后再滴）；

②用滴管将少量TMB试剂滴在血手印上；

③用玻璃棒或用滴管的圆柱面，轻轻在客体上滚压使试剂分布均匀；

④用滴管将过氧化氢溶液滴在被显现的客体上；

⑤用玻璃棒或用滴管的圆柱面轻轻在客体上滚压，使两种试剂充分混和均匀盖在血手印上；

⑥反应进行一段时间后倒掉多余试剂晾干。

三、实验结果及讨论

（一）在渗透性客体上作两种显现方法比较

在5种渗透性客体上，用两种显现方法进行多次显现实验。实验结果统计见表1。

表1 两种显现方法在渗透性客体上显现血潜手印效果比较表

对报纸、白纸和硬纸壳上的血潜手印,用TMB试剂的显现效果好于曙红试剂的显现效果。用 TMB方法显现虽然对血痕的固定不理想，但对白纸和硬纸壳上的血手印显现尽管出现血痕扩散现象，而显出的血潜手印乳突纹线依然清晰连贯（图1-2、1-4、1-10），且与客体反差较大，利于拍照固定。用曙红方法虽然能有效地固定血手印，显出乳突纹线的效果较好（图1-1、1-3、1-9），可是试剂极易将客体的本底一起染色，反差不大，不利于拍照固定。

对纺织物和本色木上的血潜手印，用曙红试剂的显现效果好于TMB试剂显现效果。因曙红试剂对血液的灵敏度较高，对血痕固定效果较好，显出的乳突纹线清晰连贯，反差大，利于拍照固定（图1-5、1-7）。而用TMB试剂虽然对血痕固定效果不理想，出现扩散现象，对显现效果有一定影响，但显出的乳突纹线仍然具有良好鉴定价值（图1-6、1-8）。

图1-1白纸上曙红显现效果

图1-3报纸上曙红显现效果

图1-5纺织物上曙红显现效果

图1-7本色木上曙红显现效果

图1-2白纸上TMB显现效果

图1-4报纸上TMB显现效果

图1-6纺织物上TMB显现效果

图1-8本色木上TMB显现效果

图1-9硬纸壳上曙红显现效果

图1-10硬纸壳上TMB显现效果

（二）在非渗透性客体上作两种显现方法比较

在5种非渗透性客体上，用两种显现方法进行多次实验。实验结果统计见表2。

表2 两种显现方法在非渗透性客体上显现血潜手印效果比较表

对瓷砖、人造革和玻璃上的血潜手印，用曙红试剂的显现效果好于 TMB试剂的显现效果。曙红试剂对血液的灵敏度很高，染色效果明显好，和本底的反差很大，显出的乳突纹线清晰连贯，具有很高的鉴定价值（图2-1、2-3、2-7）。TMB试剂显现血手印效果则非常不理想，试剂对血的灵敏度很低，几乎不发生反应。另外，血痕极易产生扩散，显出的乳突纹线不连贯，即使显现之前非常明显的血手印依旧无法显出，没有鉴定价值（图 2-2、2-4、2-8）。

对硬塑料上的血潜手印，用曙红试剂的显现效果较好，但要稍差于在其他几种客体上的显现效果。试剂的灵敏度不高，显出的乳突纹线较淡，不过依然具有鉴定条件（图2-5）。用TMB试剂的显现效果很差，不具有鉴定条件（图2-6）。

对铝合金上的血潜手印，用曙红试剂的显现效果依然很好，纹线清晰连贯，反差大，具有很高的鉴定价值（图2-9）。TMB试剂的显现效果一般，虽然有乳突纹线显出，但反差小，对血液的固定效果不理想，扩散现象严重(图2-10)。