不同产地赤雹根中总皂苷含量的比较分析*

刘春楠，洪文婷，祝晴晴，佟继铭，刘永平

（承德医学院中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000）

赤雹根是葫芦科赤雹属多年蔓生草本植物赤雹的干燥成熟块根，主要生长于华北、东北、内蒙等地区，性寒味苦，具有活血祛瘀、清热解毒、通乳等功效，为满族民间常用药，主要用于治疗风湿痹痛、腰腿痛、痛经以及软组织损伤等[1]。赤雹根主要有效部位之一为赤雹根总皂苷，本课题组前期研究发现，赤雹根总皂苷具有明显的抗炎镇痛作用[2-4]。本研究以齐墩果酸为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定不同产地赤雹根中总皂苷的含量，以期为选择赤雹根种植地域及其临床应用提供依据。

1 仪器与材料

旋转蒸发仪(EYELA，上海爱朗仪器有限公司）;紫外-可见分光光度计(HP-8453，惠普）;电热套(ZDHW-1000，北京中兴伟业仪器有限公司）;分析天平(梅特勒-托利多AG245）;电热恒温水浴锅(上海东星建材试验设备有限公司）;大孔吸附树脂柱(北京博美玻璃有限公司）。

赤雹根药材于2013年10月分别采集于东北吉林(栽培品）、河北承德(栽培品）、河北青龙(野生），经承德医学院中药研究所佟继铭教授鉴定为正品赤雹根。AB-8大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；齐墩果酸标准品(批号:110709-201206，中国药品生物制品检定所）。

2 方法与结果

2.1 赤雹根总皂苷的制备 分别取三个不同产地的赤雹根饮片各30g，置于500ml圆底烧瓶中加入240ml 70%乙醇浸泡过夜，80℃回流提取三次，每次1h。合并三次提取液、抽滤，将滤液置于1000ml圆底烧瓶中减压浓缩，将浓缩液于烘箱中80℃烘干。用30ml水将上述所得干膏溶解(生药浓度1g/ml)，过AB-8大孔吸附树脂柱，并依次用4倍量纯水、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩，将浓缩液于烘箱中80℃烘干，即得赤雹根总皂苷。

2.2 供试品溶液和标准曲线的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称定齐墩果酸标准品10mg，用甲醇溶解并定容至10ml，精密量取上述标准液1ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得浓度为0.1mg/ml的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取2.1制备的赤雹根(河北青龙）总皂苷10mg，精密称定，用甲醇超声溶解并定容至10ml，摇匀，即得。

2.2.3 测定方法:采用紫外可见光分光光度法检测赤雹根总皂苷的含量。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1ml于10ml具塞比色管中，80℃水浴挥干，分别加入0.2ml 5%香草醛-冰醋酸溶液，混匀，然后分别加入0.8ml高氯酸，混匀后60℃水浴30min，流水冷却5min，再分别加入5ml冰醋酸，摇匀，静置10min。于波长545nm处分别测定供试品溶液与对照品溶液的吸光度。

2.2.4 标准曲线的制备:精密吸取0.1mg/ml的对照品溶液300、450、600、750、900μl，置10ml具塞比色管中。按

2.2.3 的方法进行测定，以吸光度(A）值为纵坐标，齐墩果酸的浓度(μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程:A=0.0559C-0.0271，r=0.9997。表明赤雹根总皂苷在13.13-39.41μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验:精密吸取6份0.1mg/ml的对照品溶液各800μl，置10ml具塞EP管中。按2.2.3的方法测定吸光度。结果吸光度平均值为0.42347，RSD值为0.67%，表明仪器精密度良好。

2.3.2 稳定性试验:精密吸取供试品溶液1ml，置10ml具塞EP管中。按2.2.3的方法进行测定，每10min测定一次，连续测定10次。所测得吸光度的平均值为0.58472，RSD值为2.91%，表明供试品溶液在1.5h内稳定性良好。

2.3.3 重现性试验:精密吸取6份供试品溶液各1ml，置10ml具塞EP管中。按2.2.3的方法测定吸光度。所测得吸光度的平均值为0.63733，RSD值为2.78%，表明方法重现性良好。

2.3.4 加样回收率试验:精密吸取6份供试品溶液各1ml，置10ml具塞EP管中，依次加入200μl 0.1mg/ml的对照品溶液。按2.2.3的方法依次测定吸光度，并计算加样回收率，结果见表1。

2.4 含量测定 分别精密称定2.1中三个不同产地的赤雹根总皂苷各10mg，用甲醇超声溶解并定容至10ml，各精密吸取1ml于10ml具塞EP管中，按2.2.3的方法测定吸光度，并计算赤雹根总皂苷的含量，结果见表2。

表1 赤雹根总皂苷加样回收率测定结果

表2 三个不同产地赤雹根大孔树脂纯化后总皂苷和赤雹根药材中总皂苷的含量(%)

3 讨论

本研究采用紫外-可见分光光度法测定了赤雹根中三萜类总皂苷的含量，该方法操作简便，重复性良好，可用于赤雹根总皂苷的含量测定。在显色的过程中，分别考察了浓硫酸、1%对二氨基苯甲醛、5%香草醛-冰醋酸-高氯酸、2%香草醛-硫酸等显色剂进行显色，由于5%香草醛-冰醋酸-高氯酸显色效果较好，故以5%香草醛-冰醋酸-高氯酸作为总皂苷显色剂。同时，本研究对显色时间进行了考察，发现60℃水浴30min显色效果最佳，故显色时间定为30min。由于市面上无赤雹根皂苷类标准品，故本研究采用齐墩果酸为标准品测定赤雹根中总皂苷的含量，经过预实验确定检测波长定为545nm。

结果显示，本研究中人工栽培的赤雹根药材中赤雹根总皂苷的含量以河北承德为最高，含量为0.38%，远高于东北吉林栽培的赤雹根总皂苷的含量（0.12%），但明显低于河北青龙采收的野生赤雹根药材中的赤雹根总皂苷含量（0.59%）。赤雹根药材的人工栽培基地的选择以河北承德相对较好，种植模式和生长环境对赤雹根中总皂苷含量的影响有待进一步深入研究。

[1] 宋立人,红恂 ,丁绪亮 ,等 .现代中药大辞典 (上册 )[M].北京：人民卫生出版社,2001.1022.

[2] 张玉玲,赵波,陈建双,等.赤雹根镇痛作用及有效部位研究[J].时珍国医国药,2010,21(10):2483-2484.

[3] 陈建双，张玉玲，赵波，等.赤雹根总皂苷抗炎作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(8)：163-166.

[4] 刘永平，陈建双，赵波，等.赤雹根总皂苷对实验性佐剂型关节炎镇痛作用的研究[J].辽宁中医杂志，2011，38(8):1659-1661.