胃黏膜组织中肿瘤坏死因子α及iNOS表达水平与胃炎发病的关系研究

张明文

（江西省峡江县中医院，江西 峡江 331400）

慢性胃炎多由幽门螺杆菌（Hp）感染引发，发达国家为30%～50%，发展中国家高达80%以上［1－2］。Hp为慢性胃炎的主要动因，同时细胞毒素、黏附分子、细胞因子／炎症递质均参与Hp感染的炎症反应，同时肿瘤坏死因子α（TNF－α）还被发现参与了慢性胃炎的病理过程，而诱导型一氧化氮合酶（iNOS）产生NO 同为病发的重要机制［3－4］。本次研究旨在研究TNF－α、iNOS水平与Hp胃炎相关性，旨在指导临床，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2011年2月～2014年1月114例慢性胃炎患者为研究对象，符合2012年中国慢性胃炎共识意见［2］中诊断标准，其中男70 例，女44例，年龄22～67岁，平均（41.32±7.45）岁，根据胃镜与组织学检查结果分为Hp阳性组（54例）与Hp阴性组（60例），两组年龄、性别等基线资料差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。患者对本次研究均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 TNF－α检测 放射免疫法测定，用0.9%氯化钠冲洗选取的胃黏膜样本至无血，用分析天平对湿质量进行称重并放入微型玻璃匀浆器中，将0.9%氯化钠注入，粉碎组织后放置离心机中，设置参数为3 000r／min，持续离心15 min后提取上清液，保存于－20 ℃冷柜中待检。组织含量根据每克湿质量算出。最后根据TNF－α试剂盒说明书严格操作，在BH6020全自动γ计数器中测出。

1.2.2 iNOS表达水平检测 以免疫组织化学法检测进行测定，先切片常规脱蜡至水，尿素消化30 min，10 ml／L过氧化氢封闭内源酶0.5h，正常羊血清在37 ℃下放置0.5h，后滴加一抗4 ℃放至隔天，将生物素羊抗兔IgG（1∶100）37 ℃40min，滴入ABC 复合物（1∶100）37℃40min，DAB显色后苏木精衬染，脱水透明封片，分为PBS置换一抗（阴性对照组）与明确5－HT 染色阳性小鼠小肠切片（阳性对照组）。光镜辅助下400视野观察每片中相对染色强、阳性细胞多的部位，得出阳性细胞所占比重，将400视野内阳性细胞占有面积比例进行综合［5－6］。最终免疫组化结果判定为染色阳性信号处于细胞值，且颜色为棕黄到黄色。

1.3 观察指标 ①对比Hp 阳性组与Hp 阴性组TNF－α、iNOS水平；②分析胃黏膜炎症程度，轻度：炎症细胞轻度浸润，占胃黏膜全层1／3；中度：炎症细胞浸润处于1／3～2／3之间；重度：炎症细胞浸润面积基本达全黏膜层，同时伴胃小凹、黏膜上皮坏死等。

1.4 统计学方法 采用统计学软件SPSS 19.0对研究数据进行分析和处理，计量资料采用（±s）表示，组间对比采用t检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TNF－α、iNOS 水平对比 Hp 阳 性 组TNF－α水平及iNOS表达均高于Hp阴性组，差异有统计学意义（P ＜0.001），提示胃炎的病发与TNFα、iNOS居较高水平相关，可作用临床诊断指标。见表1。

表1 两组TNF－α、iNOS水平对比 （±s）

表1 两组TNF－α、iNOS水平对比 （±s）

组别 n TNF－α（ng／mg）iNOS（%）Hp阳性组 54 1.41±0.33 69.34±6.10 Hp阴性组 60 0.64±0.22 21.94±3.87 t 14.790 50.043 P ＜0.001 ＜0.001

2.2 胃黏膜炎症程度在两组中分布对比 Hp 阳性组、Hp阴性组胃黏膜炎症严重程度的分布不同，差异有统计学意义（χ2＝57.014，P ＜0.001），Hp阳性组以重度分布较多，Hp阴性组以轻度分布较多。见表2。

表2 胃黏膜炎症程度在两组分布对比 （n，%）

3 讨论

Hp为革兰阴性细菌，对单核细胞有刺激作用，外膜成分中含有脂多糖，可使单核细胞、巨噬细胞分泌促进炎症递质分泌，同时鞭毛蛋白也发挥协同作用。另外Hp在为乳液与胃黏膜上皮的中性微氧环境中定植，可立即释放出VacA、CagA 等毒素，最终可加重炎症反应［6－7］。

TNF－α为单核细胞、巨噬细胞受到致炎因子影响后所释放的细胞因子，为促炎症蛋白，可使中性粒细胞出现移动，具体机制为调控内皮细胞上黏附分子和中性粒细胞表达，还可诱导中性粒细胞黏附、白细胞穿出血管壁，导致胃黏膜内细胞损伤，进而减少血流量［8－9］。胃黏膜血流是胃黏膜整体防御机制的重点，因此出血可直接导致胃黏膜损伤。同时TNF－α能够作用于靶细胞膜的磷脂代谢，进而导致氧自由基出现，引发溶酶体破裂，使组织出现损伤和死亡［10］。

NO 主要由一氧化氮合酶（NOS）催化形成，NOS活性变化可使NO 生成量与正常的生物效应受到影响。其具有广泛生物效应，具有正反两面性，一方面有生理功能，同时又是炎症递质。正常生理状态下，胃黏膜血管内皮细胞与神经元产生的NO 含量较低，主要作用为调节闭黏液与胃黏膜微循环与黏液的分泌，是胃黏膜的重要保护物质。但在炎症的病理状态下，NO过量产生会导致羟自由基和过氧硝基阴离子的毒性上升，或可引发正常基因突变。有研究显示Hp感染可提高NO 水平，而炎症细胞分泌以及大量细胞因子、白解毒等物质的释放可提高iNOS 表达。本次研究中Hp阳性患者iNOS 表达水平显著高于Hp 阴性，且Hp阳性组中、重度患者显著高于对照组，可见iNOS表达上升是慢性胃炎致病机制之一，

综上所述，TNF－α、iNOS 表达水平上升是胃炎发病的重要机制，应引起临床的关注。

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