Th17细胞相关因子在蕈样肉芽肿患者外周血中的表达和意义

罗丽敏 李军 刘菡 刘劲松

1.湖北医药学院附属东风总医院皮肤科，湖北十堰442000；

2.湖北医药学院附属太和医院心内科，湖北十堰442000

Th17细胞相关因子在蕈样肉芽肿患者外周血中的表达和意义

罗丽敏1李军2刘菡1刘劲松1

1.湖北医药学院附属东风总医院皮肤科，湖北十堰442000；

2.湖北医药学院附属太和医院心内科，湖北十堰442000

目的探讨辅助性T细胞17（Th17）细胞相关因子在蕈样肉芽肿患者外周血中的表达及意义。方法以湖北医药学院附属东风总医院（以下简称“我院”）2010年1月～2014年10月确诊为蕈样肉芽肿的24例患者作为治疗组，以我院同期健康人群24例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测两组患者外周血中白介素17（IL-17）、白介素23（IL-23）和白介素16（IL-16）的表达水平，比较两组之间的差异。结果治疗组患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的表达水平分别为（210.14±33.47）、（244.11±39.88）、（24.54±7.66）ng/L，均高于对照组[（162.34±35.11）、（111.26±36.35）、（10.90±6.81）ng/L]，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论Th17细胞相关因子在蕈样肉芽肿患者外周血中的过表达，提示其可能与蕈样肉芽肿发病有关。

蕈样肉芽肿；辅助性T细胞17；白介素17；白介素23；白介素6

蕈样肉芽肿又名蕈样霉菌病（mycosis fungoides），是起源于记忆性辅助性T细胞的低度恶性的皮肤T细胞淋巴瘤，约占所有皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）的50%[1]，多累及老年人，病程呈慢性渐进性，目前具体病因及发病机制尚不明确，研究提示遗传因素、环境因素及免疫因素参与了蕈样肉芽肿的发生，而其中免疫机制的探讨是目前蕈样肉芽肿研究的热点及难点[2-6]。辅助性T细胞17（Thelper 17 cell，Th17）是不同于Th1和Th2细胞亚群的一种新的CD4+T细胞亚群，因分泌白介素（IL）-17而得名，IL-23能诱导幼稚CD4+T细胞分化成熟成Th17细胞，并分泌IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及CXCL1、CXCL8等趋化因子，在自身免疫反应及炎性反应中发挥重要作用[7-8]。然而目前对于蕈样肉芽肿与Th17细胞相关因子是否相关以及Th17细胞相关因子是否参与蕈样肉芽肿的致病过程，国内尚未见报道（检索范围：蕈样肉芽肿并Th17细胞相关因子），因此，本研究以酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测蕈样肉芽肿患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的表达水平，以探讨Th17细胞相关因子在蕈样肉芽肿发病机制中的可能作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以湖北医药学院附属东风总医院（以下简称“我院”）2010年1月～2014年10月皮肤科门诊、住院及会诊的24例蕈样肉芽肿患者作为治疗组，其中男13例，女11例；年龄28～75岁，平均（49.4±1.9）岁；病程8个月～30年，平均（8.6±0.2）年。所有纳入研究的患者均行常规组织病理及免疫病理检查，并符合《中国临床皮肤病学》[1]蕈样肉芽肿诊断标准，并且近半年均未接受系统药物治疗，无合并其他皮肤病或系统性疾病。对照组24名来自我院体检中心的健康人群，均为随机抽查，男女各12名，年龄25～64岁，平均（43.2±2.1）岁。所有入组人员均行血常规、肝肾功能、尿常规、心电图等检查。两组患者年龄、常规检查比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要仪器和试剂

人IL-17、IL-23和IL-6 ELISA试剂盒购于美国eBioscience公司；酶标仪为美国产Eh800型BioTek酶标仪，离心机Eppendorf5810由德国Eppendorf公司生产；超低温（-80℃）冰箱由日本Sanyo公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 实验标本的收集及储存清晨空腹状态下，取治疗组和对照组患者肘静脉血5 mL，置于含有酶抑制剂的抗凝管中，以3000 r/min低温离心15 min，分离血浆保存于-80℃冰箱中。

1.3.2 采用ELISA法检测血清标本中人IL-17、IL-23和IL-6的含量试剂配制和操作步骤严格按说明书进行，分别设置空白孔、标准品孔和待测样品孔，显色后用酶标仪在450 nm处检测A值，建立标准曲线，计算出样本含量。所有检测指标均同次复验。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血液项目检测结果比较

治疗组和对照组患者的血常规、血生化等血液检测结果比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组血液项目检测结果比较

表1 两组血液项目检测结果比较

注：WBC：白细胞；Cr：肌酐；ALT：谷丙转氨酶

对照组治疗组24 24 7.05±0.72 7.54±0.58 99.87±4.17 104.21±2.41 32.24±2.53 30.55±3.27

2.2 两组血清中IL-17、IL-23和IL-6的表达情况比较

治疗组患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的含量水平均显著高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

表2 两组血清中IL-17、IL-23和IL-6的表达情况比较（ng/L，x±s）

3 讨论

蕈样肉芽肿首先由1806年法国的Alibert医生报道，是皮肤T细胞淋巴瘤的最常见类型，男女比例为1.6～2.0∶1，病程呈慢性渐进性[9]。临床上根据皮损改变分为红斑期、斑块期及肿瘤期三期。蕈样肉芽肿的预后与临床分期、皮损的严重程度及是否系统受累密切相关，因此，明确蕈样肉芽肿的发病机制，早期诊断、早期治疗对改善病情预后尤其重要。

传统的CD4+T细胞分为Th1和Th2细胞亚群，Th17细胞是一种新的CD4+T细胞亚群，具有独特的发育分化调节机制，在IL-23的刺激诱导下可促进CD4+T细胞分化为Th17细胞，使其分泌IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-6、TNF-α及CXCL1、CXCL8等趋化因子[2,9-11]。Chong等[12]应用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）技术对正常健康人群、银屑病患者、早期及晚期蕈样肉芽肿患者外周血Th1、Th2及Th17细胞亚群细胞因子做比较，结果提示早期及晚期蕈样肉芽肿表达高水平IL-17，Krejsgaard等[13]研究认为，与正常人比较，IL-17受体在皮肤T细胞淋巴瘤的表达增加，而IL-17F与皮肤T细胞淋巴瘤的皮损严重程度及疾病进程相关，这与Ciree等[4]的研究结果相符，Doherty[15]的研究提示IL-23在蕈样肉芽肿患者表皮角质形成细胞及真皮淋巴细胞过表达，以上结果提示IL-17细胞因子参与蕈样肉芽肿的发病过程。

本研究结果表明，与正常健康人群相比，细胞因子IL-17、IL-23和IL-6在蕈样肉芽肿患者外周血中呈表达增加，差异均有统计学意义，因此，笔者推测IL-23可能刺激诱导CD4+T细胞分化为细胞，进而使其分泌IL-17、IL-6等细胞因子，参与蕈样肉芽肿的发病，从而加重皮损的严重程度，促进病情进程。所以，加大样本量，深入探讨Th17细胞相关因子在蕈样肉芽肿中的可能作用机制，有利于为临床治疗蕈样肉芽肿提供新的思路和线索。

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Expression and significance of Th17 related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides

LUO Limin1LI Jun2LIU Han1LIU Jinsong1
1.Department of Dermatology,Dongfeng General Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Hubei Province, Shiyan 442000,China;2.Department of Cardiology,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China

ObjectiveTo explore the expression and significance of T helper 17 cell(Th17)related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides.Methods24 patients diagnosed as mycosis fungoides in Dongfeng General Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine(“our hospital”for short)from January 2010 to October 2014 were taken as treatment group,24 healthy persons at the same time in our hospital were taken as control group. Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was used to analyze the expression of interleukin 17(IL-17),interleukin 23(IL-23)and interleukin 6(IL-6)in peripheral blood of the two groups,and the differences between the two groups were compared.ResultsThe levels of IL-17,IL-23 and IL-6 in peripheral blood of treatment group[(210.14±33.47), (244.11±39.88),(24.54±7.66)ng/L]were significantly higher than those of control group[(162.34±35.11),(111.26± 36.35),(10.90±6.81)ng/L],the differences were all statistically significant(allP＜0.05).ConclusionThe over-expression of Th17 related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides indicates that it may be related to the genesis of mycosis fungoides.

Mycosis fungoides;Th17 cell;IL-17;IL-23;IL-6

R758.63 [

]A [

]1673-7210（2015）08（b）-0101-03

2015-01-26本文编辑：张瑜杰）

湖北省自然科学基金计划项目（2011CDC049）；湖北省十堰市科学技术研究与开发项目计划（2010st39）。

罗丽敏（1980-），女，硕士；研究方向：免疫性皮肤病的发病机制。

刘菡（1966-），女，主任医师；研究方向：真菌性皮肤病。