C-erbB-2和Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达及意义

郭玲，李维英，刘海燕

潍坊市妇幼保健院妇产科，山东潍坊 261011

C-erbB-2和Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达及意义

郭玲，李维英，刘海燕

潍坊市妇幼保健院妇产科，山东潍坊 261011

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)组织中癌基因C-erbB-2、Ki-67的表达，探讨两者与临床病理特征之间的关系。方法用免疫组化法分别检测C-erbB-2、Ki-67在63例子宫内膜癌组织和20例子宫内膜不典型增生组中的表达。结果C-erbB-2、Ki-67在子宫内膜癌组织中的阳性率分别为82.5%、76.2%,明显高于子宫内膜不典型增生组的20.0%、15.0%（P<0.05）。 C-erbB-2、Ki-67的表达和手术病理分期、组织学分级及浸润肌层深度有关差异有统计学意义(P<0.05)。Ki-67的阳性表达与淋巴结转移有关差异有统计学意义(P<0.05)，C-erbB-2的阳性表达与淋巴结转移无关差异无统计学意义(P＞0.05)。结论在子宫内膜癌中C-erbB-2、Ki-67过度表达，与子宫内膜癌的侵袭性有关，可作为临床医师评估子宫内膜癌预后的重要指标。

子宫内膜癌；原癌基因C-erbB-2；细胞核增殖抗原Ki-67;免疫组化

子宫内膜癌在世界范围内的发病率仅次于宫颈癌。子宫内膜癌在美国新发妇科恶性肿瘤中约占50%，位居女性恶性肿瘤第四，并且近几年发病率越来越高，发病人群也越来越年轻[1]。子宫内膜癌的发生和人体内雌激素水平以及体内各种癌基因的表达异常密切相关。该研究收集潍坊市妇幼保健院、潍坊市人民医院2011年7月—2013年10月收入院的63例EC患者的石蜡标本对C-erbB-2、Ki-67在子宫内膜癌中的表达进行分析，研究两者引起子宫内膜癌发生的原理，为临床医师正确分期和制定治疗方案提供帮助。

1 资料与方法

1．1一般资料

收集潍坊市妇幼保健院、潍坊市人民医院2011年7月—2013年10月收入院的63例EC患者的石蜡标本，年龄43～68.5岁，平均(56.6±1.08)岁；术前均未行放、化疗以及激素治疗，所有诊断均经手术后病理组织学确定。参照国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)2009年手术病理分期标准，进行临床分期：0-I期25例，Ⅱ至Ⅳ期38例；其中高分化(G1)30例，中分化(G2)、低分化(G3)共33例。选取同期门诊行官腔镜检查，经病理检查为子宫内膜不典型增生的病例共20例作对照组，年龄为46～58岁，平均年龄(50.4±1.35)岁。比较所有患者的年龄差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法

取标本固定于10%福尔马林液溶液中，采用石蜡包裹，持续切片5μm，并通过免疫组化S-P法即链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接法,分别检测存在于子宫内膜癌组织及子宫内膜不典型增生组织中的C-erbB-2和Ki-67的表达。从上海博谷公司购进免疫组化试剂，操作时严格按照说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照。

免疫组化结果的观察及判断：应用显微镜观察全部染色切片，其中黄色或棕黄色染色提示阳性。Ki-67基因的蛋白产物位于细胞核，C-erbB-2基因的蛋白产物位于细胞膜及胞浆内。采用400倍显微镜观察切片，随机选取每张切片中的10个切片（一个视野计数细胞100个）进行观察，然后将阳性细胞的百分比(%)计算出来求平均值。依据染色范围分4级：其中阳性细胞低于10%为阴性(-)；阳性细胞数位于10%~49%之间为弱阳性(+)；阳性细胞数位于50%～89%之间为阳性(++)；阳性细胞数不低于90%为强阳性(+++)。结果：(+～+++)列为阳性表达，(-)表示无表达，列为阴性表达。

1．3 统计方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计数资料运用χ2检验及Fisher确切概率法，P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 C-erbB-2、Ki-67表达的免疫组化结果

C-erbB-2蛋白在细胞膜上表达。63例子宫内膜癌组织和20例子宫内膜不典型增生组织，C-erbB-2的阳性率和阴性率分别是82.5%和20.0%，因此C-erbB-2在子宫内膜癌组织中的表达阳性率显著比对照组高差异有统计学意义(P<0.05)。Ki-67蛋白表达于细胞核上。Ki-67的阳性率、阴性率在63例子宫内膜癌组织及20例子宫内膜不典型增生组织中分别是76.2%、15.0%差异有统计学意义(P<0.05)，Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达阳性率显著高于对照组差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 1 Ki-67及C-erbB-2在子宫内膜癌和子宫内膜不典型增生组织中的表达[n(%)]

2．2 C-erbB-2、Ki-67的表达与子宫内膜癌临床病理因素相关性

EC手术病理分期与C-erbB-2的表达相关性显著差异有统计学意义（P<0.05），和肿瘤细胞组织学分级、浸润肌层深度关系密切差异有统计学意义(P<0.05)，C-erbB-2阳性表达率会根据细胞分化程度的降低、肌层浸润的加深，不断上升，和淋巴结转移是否发生无关差异无统计学意义(P>0.05)。Ki-67的表达与EC手术病理分期、肌层浸润程度、组织学病理分级和是否存在淋巴结转移相关差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

3 讨论

子宫内膜癌是常见的恶性肿瘤，且发病年龄也越来越低，对女性的健康产生严重的影响。当前研究显示，子宫内膜癌的发生与雌激素长期刺激并缺乏孕激素的拮抗有关，该研究探讨C-erbB-2、Ki-67在子宫内膜癌中的表达，探讨两者与子宫内膜癌发生的机制。

Ki-67又称细胞激活标记，是细胞增殖的标志物之一，定位于第10号染色体的长臂上。Ki-67是9768bp和8686多肽链连接组成的mRNA，是DNA结合蛋白的一种。Ki-67能够识别除G0和G1早期外,其他各期的核抗体。BRUNO[2]等发现,Ki-67蛋白的表达和细胞周期关系密切，仅在G1期的中后期，S、G2、M期表达。Ki-67在肠道黏膜的上皮细胞等增殖活性高的细胞中表达上调，而在非增生性组织中几乎不表达，是公认的的核增殖标志物中的一种，用于评价肿瘤生物学行为[3]。Ki-67在乳腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤中的表达较强烈，说明肿瘤细胞的增生活性严重影响着恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后[4]。Ki-67经过自我调控，可降低自身转录，实现调控蛋白表达要求。再利用自身磷酸化引发核仁的崩解、形成，最终对细胞周期调控产生影响。该研究结果表明，Ki-67蛋白在细胞核上表达。在63例子宫内膜癌组织及20例子宫内膜不典型增生组织中，Ki-67的阳性率、阴性率表达分别是76.2%、15.0%，差异有统计学意义(P<0.05)，Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达阳性率显著高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，与子宫内膜癌手术病理分期、肌层组织浸润、组织学分级、淋巴结是否转移相关，经统计学处理差异有统计学意义(P＜0.05),符合文献报道[5]。

表2 C-erbB-2、Ki-67表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系[n（%）]

原癌基因C-erbB-2是表皮生长因子受体(epithelialgrowth factor receptor,EGFR)家族中的一员，能够激活酪氨酸转氨酶，并经过激活信使系统推动细胞外部信号传递到细胞内，对各种基因的转录C－erbB－2在机体细胞的增殖、生长、分化及凋亡过程产生十分重要的影响[5]。一般情况下C－erbB－2均为非激活状态，在正常子宫内膜表现低表达或不表达。若致癌因素作用，C－erbB－2呈现扩增或过度表达则使正常细胞的恶性转化，最终引起肿瘤的发生[6]。C-erbB-2蛋白在正常的子宫内膜组织中无表达或者低表达，在子宫内膜的不典型增生到子宫内膜癌的表达，呈逐渐增强。Xie[7]等的研究表明，在C-erbB-2癌基因转染的NIH／3T3细胞核内，酪氨酸磷酸化的作用较核外明显增强，并且直接参与基因调控，使细胞出现过度增殖和恶性化。该文显示，在63例子宫内膜癌组织和20例子宫内膜不典型增生组织，C-erbB-2的阳性率、阴性率分别为82.5%、20.0%，C-erbB-2在子宫内膜癌组织中的表达阳性率显著高于对照组，经统计学处理差异有统计学意义(P<0.05)，C-erbB-2的表达率与子宫内膜癌的手术病理分期密切相关，Ⅱ-Ⅳ期表达明显高于0-I期，经统计学处理差异有统计学意义(P＜0.05)，与肿瘤细胞分化程度有关系，肿瘤细胞分化越差，C-erbB-2阳性表达率越高，经统计学处理差异有统计学意义(P＜0.05)，随着C-erbB-2基因表达增高，子宫内膜癌的侵袭性增强，提示患者预后越差，符合文献报道[8]对治疗的抵抗性越强。

C-erbB-2和Ki-67的异常表达参与了子宫内膜癌的发生、发展过程，联合检测两者的表达，不仅有助于鉴别子宫内膜良、恶性病变，也为指导子宫内膜癌的临床治疗，预后判断提供帮助，为子宫内膜癌防治探索新思路。

[1]DOwdy SC，Borah BJ，Bakkum-Gamez JN，et a1.Factors predictive of postoperativemorbidity and cost in patientswith endometrial cancer[J]. ObstetGynecol，2012,120(6）:1419-1427.

[2]BRUNO S,DARZYNKIEWICI Z.cell cycle dependent expression and stahility of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60 cell[J].Cell prolif,1992,25(1):31-40.

[3]文惠方，蒋春梅，张尚弟，等.宫腔脱落细胞中P53 Ki-67、bcl-2、bax基因的表达及意义[J].中国妇产科临床杂志，2013（5）：406-409.

[4]赵桂凤，张艳红.PTEN和C－erbB－2蛋白在子宫内膜癌的表达及临床意义[J].中国优生与遗传杂志，2013（6）：39-40，62.

[5]庞志澜，马丽辉，孔卫平，等.子宫内膜癌中E2F－1、Survivin和ki－67的表达及相关性[J].现代肿瘤医学，2013（7）：1581-1585.

[6]柳素云，陈元芳，黎清，等.子宫内膜癌组织中Ki-67和C-erbB-2的表达及意义[J].广东医学，2013，34（13）：2079-2081.

[7]Xie Y,Hung MC.Nuclear localization of p185neu tyrosine kinase and its association with transcriptional transactivation[J].BiocheMBiophys Res Commun,2011,203(3):1589-1598.

[8]姚安梅，袁渊，杨雪梅，等.ERPR C－erbB－2在子宫内膜癌中的表达及临床意义[J].陕西医学杂志，2013（3）：309-311.

Expression and Clinical Significance of C-erbB-2 and Ki-67 in Endometrial Carcinoma

GUO Ling,LIWei-ying,LIU Hai-yan
Department of Gynaecology and Obstetrics,Maternal and Child Health Hospital ofWeifang,Weifang,Shandong Province,261000 China

ObjectiveTo investigate the expression of C-erbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinomAand discuss the relationship of C-erbB-2 and Ki-67 with the clinicopathological features of endometrial carcinoma.MethodsTo detect the expressions of C-erbB-2 and Ki-67 in 63 cases of endometrial carcinomAand 20 cases of endometrial atypical hyperaplasiAtissue by immunohistochemistry.Resu ltsThe positive expression rates of C-erbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinomAtissue were 82.5%,76.2% which were significantly higher than that in endometrial atypical hyperaplasiAtissue 20.0%，15.0% (P<0.05)．The expression of C-erbB-2 and Ki-67 were related with pathological staging,histological grade and myometrial invasion depth (P<0.05).The positive expression of Ki-67 was related with lymph nodemetastasis(P<0.05),while the positive expression of C-erbB-2 was irrelevant(P> 0.05).ConclusionThe over expression of C-erbB-2 and Ki-67 are associated with the tumor invasion，and may be an important prognostic factor of endometrial carcinoma.

Endometrial Carcinoma;Proto-oncogene C-erbB-2;Proliferating cell nuclear antigen Ki-67;Immunohistochemistry

R737.33

A

1674-0742（2015）06（b）－0009-02

2015-03-17）

郭玲（1966.1-），女，山东临朐人，本科，主管护师，研究方向：专妇科护理。