安神胶囊的质量控制研究

刘轶华 ，穆晓燕(漯河医学高等专科学校第二附属医院药品科，河南 漯河 462300)

安神胶囊为《中华人民共和国药典》中收录的纯中药制剂，主要由酸枣仁(炒)、川芎、知母、麦冬、制何首乌、五味子、丹参、茯苓等组成［1］。本品原质量控制的标准主要针对五味子和川芎进行了薄层色谱(thin layer chromatography，TLC)定性鉴别，采用液相色谱法对安神胶囊中的五味子醇甲进行了定量［2］。为了提高安神胶囊的标准，本研究采用TLC 对麦冬、制何首乌、丹参、茯苓进行定性，采用高效液相色谱法对安神胶囊中丹参酮ⅡA进行定量。

1 仪器与试剂

Agileni 1100 高效液相色谱仪、紫外检测器(美国Agilen 公司);BS-124S 电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);MILLI-Q Academic 超纯水制备系统(美国密理博公司);RE-52AA旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);硅胶G(薄层层析用，青岛海洋化工厂)。麦冬、制何首乌、丹参、茯苓对照药材、大黄素、丹参酮Ⅱ对照品(批号:170098-200608、140034-20061211，中国药品生物制品检定所);安神胶囊(长春海外制药集团有限公司生产，国药准字Z20073024，批号:110316、110930、110926);水为超纯净水，乙腈和甲醇均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC 定性鉴别

(1)麦冬:取胶囊25 粒，称取内容物约5 g，加蒸馏水60 ml，水浴加热提取2 h，冷却，3 000 rpm 离心10 min，取上清液，加入盐酸3 ml，水浴加热1 h，冷却，加三氯甲烷25 ml，萃取3 次，合并萃取液，旋转蒸发仪浓缩至2 ml，既得供试品溶液。麦冬对照药材2 g，加蒸馏水45 ml，参照上述方法制得麦冬对照药材溶液。毛细吸管分别吸取上述溶液各2 μl，点于硅胶G薄层板上进行层析，甲醇-乙醚(V ∶V =3 ∶1)为展开剂进行展开，取出并晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰显色为止。结果显示，供试品溶液和麦冬对照药材溶液在硅胶G薄层板相应的位置显色。(2)制何首乌:取胶囊25 粒，取内容物约5 g，加甲醇80 ml，超声波辅助提取1 h，3 000 rpm 离心10 min，取上清液，水浴蒸干，加蒸馏水10 ml 超声辅助溶解，盐酸2 ml，水浴加热25 min，冷却，30 ml 乙醚进行萃取，萃取3 次，合并萃取液，水浴蒸干，加甲醇1 ml 溶解既得供试品溶液。取何首乌对照药材2 g，参照上述方法制得制何首乌对照药材溶液。再取大黄素对照品0.5 g，加甲醇10 ml，超声辅助溶解，水浴加热浓缩至1 ml，得对照品溶液。毛细吸管吸取上述溶液各2 μl，点于硅胶G 薄层板上进行层析，以甲醇-石油醚-甲酸(V∶V∶V =11∶5∶2)为展开剂进行展开，取出并晾干，365 nm 波长下进行紫外光灯检查。结果显示，供试品溶液和制何首乌对照药材溶液以及对照品溶液均在相同的位置显示橙色荧光斑点。(3)丹参:取胶囊25 粒，取内容物约5 g，石油醚30 ml，超声辅助提取30 min，水浴蒸干，甲醇1 ml 溶解既得供试品溶液。丹参对照药材1 g，参照上述方法制得制成对照药材溶液。丹参酮Ⅱ对照品0.5 g，加甲醇10 ml，超声辅助溶解，水浴加热浓缩至1 ml，得对照品溶液。毛细吸管吸取上述溶液各2 μl，点于硅胶G 薄层板上进行层析，以石油醚-乙酸乙酯(V∶V =8∶1)为展开剂进行展开，取出并晾干。结果显示，供试品溶液和丹参对照药材溶液以及对照品溶液均在相同的位置显示相同斑点。(4)茯苓:取胶囊25 粒，取内容物约5 g，加乙醚80 ml，饱和氯化钠溶液2 ml，超声辅助提取1 h，提取3 次，合并提取液，取乙醚层，挥干，残渣加正己烷1 ml 溶解既得供试品溶液。茯苓对照药材1 g，乙醚40 ml，超声辅助提取1 h，3 000 rpm 离心10 min，取上清液，水浴蒸干，残渣采用1 ml 正己烷溶解既得对照药材溶液。毛细吸管吸取上述溶液各2 μl，点于硅胶G 薄层板上进行层析，以石油醚-丙酮-乙酸乙酯(V∶V∶V =85∶15∶1)为展开剂进行展开，取出并晾干，365 nm波长下进行紫外光灯检查。结果显示，供试品溶液和茯苓对照药材溶液均在相同的位置显示相同的荧光斑点。

2.2 色谱条件

Agilent XDS C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈-水(V∶V =25∶50)，流速1.0 ml/min，进样量为10 μl，柱温为25 ℃。检测波长为286 nm，丹参酮ⅡA峰理论板数＞2 000。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液:丹参酮ⅡA 标准品精密称取5 mg，10 ml甲醇超声辅助溶解，转移至10 ml 容量瓶中，甲醇补充至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液:取胶囊100 粒，取内容物约10 g，石油醚30 ml，超声辅助提取30 min，水浴蒸干，甲醇1 ml溶解并转移至50 ml 容量瓶中，甲醇补充至对应的刻度，既得供试品溶液。2.2.3 阴性样品溶液:参照的安神胶囊制备工艺制备缺丹参样品。精密称取样品5 g，参照供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

2.4 干扰试验

准确吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μl，参照“2.2”项下色谱条件进行测定。结果显示，阴性溶液色谱中无对应的丹参酮ⅡA峰，见图1。

2.5 线性关系

准确吸取对照品溶液0.1、1、2、3、4、5 ml 置于10 ml 的容量瓶中，甲醇补充至相应的刻度，分别进样10 μl，参照“2.2”项下色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标(Y)，丹参酮ⅡA浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，结果表明，丹参酮ⅡA在0.005 ～0.25 mg/ml 范围线性关系良好，其回归方程为Y=6.99 ×105X+5.99 ×103，r=0.999 4。

2.6 精密度试验

准确吸取对照品溶液1 ml 于10 ml 容量瓶中，甲醇补充至相应刻度，准确吸取10 μl 进样，参照“2.2”项下色谱条件进行测定，连续检测5 次，记录峰面积。计算显示，峰面积的RSD为0.27%，提示仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取胶囊100 粒，精密称取内容物10 g，参照“2.3.2”项下制备供试品溶液，冰箱1 ℃保存，分别于0、2、8、10、15、20、24 h进行测定，记录峰面积。结果显示，峰面积的RSD为0.35%，供试品溶液24 h 稳定性良好。

2.8 重复性试验

精密称取同一批样品(批号110316)1 g，共5 份，参照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，准确吸取溶液10 μl 进样，参照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。结果表明，样品中丹参酮ⅡA峰面积的RSD 为1.27%。

2.9 加样回收率试验

精密称取同一批样品(批号110930)5 g，加入丹参酮ⅡA对照品溶液4.5 ml，平行3 份，参照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，测定，计算回收率。结果显示，丹参酮ⅡA平均回收率99.43%，表明此方法测定准确可靠，见表1。

图1 对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液色谱图Fig 1 HPLC chromatogram of control substance solution，test solution and negative sample solution

表1 丹参酮ⅡA加样回收率试验结果Tab 1 Standard recovery rate of tanshinone ⅡA

2.10 样品测定

精密称取同一批样品(批号110926)10 g，参照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，平行实验3 份，进样10 μl，测定，计算丹参酮ⅡA平均含量，结果显示，该药品的平均含量为0.586 9 mg/g，RSD为0.65%。

3 讨论

3.1 样品处理

本研究对安神胶囊的提取条件，考虑到丹参酮ⅡA极性较弱，选择石油醚进行提取，超声辅助提取30 min。

3.2 波长选择

本研究初实验对波长进行了比较，发现采用240 nm、260 nm、286 nm、295 nm 都可以准确检测，但286 nm、10 lun 时，峰的分离度明显，峰形比良好，故选择286 nm 作为检测波长。

3.3 流速选择

本研究分别对流速分别为0.5 ml/min、1.0 ml/min、

1.5 ml/min进行实验，结果表明，流速为1 ml/min时效果明显，流速过大彼此分离度减小，相反流速过小，实验时间过长。

3.4 流动相选择

本研究分别考察了乙腈-0.2%磷酸溶液(V∶V =10∶80)，乙腈-水(V∶V=25∶50)以及甲醇-乙腈-水(V∶V∶V=4∶20∶40)，结果显示，乙腈-水(V∶V=25∶50)分离效果明显。

［1］ 卢方浩，杜智敏，张波，等. 安神胶囊镇静催眠作用的研究［J］.哈尔滨医科大学学报，2003，37(2):125-127.

［2］ 石洲宝，蔺兴尧，陈长浩，等. 安神胶囊安全性及毒性研究［J］.世界最新医学信息文摘:连续型电子期刊，2014，14(28):257-258.

［3］ 付聪.安神胶囊主要药效学实验［J］.中国社区医师:医学专业，2011，13(32):8.

［4］ 张晓红，王月茹，谢伟. 安神胶囊的薄层色谱鉴别［J］. 陕西中医，2013，34(9):1231-1232.

［5］ 高菲，谭思思，姚琳，等.复方刺五加颗粒的质量控制［J］. 中国医院药学杂志，2012，32(15):1193-1196.

［6］ 管敏，王淼，达庆国. 参味合剂质量控制研究［J］. 安徽医药，2014，18(8):1440-1443.

［7］ 阎维维，张咏梅.通脉养心丸质量控制研究［J］. 中草药，2011，42(9):1751-1754.

［8］ 张燕，莫晓燕，曹阳，等.芪胶膏的薄层色谱鉴别［J］. 中国药业，2013，22(23):32-33.

［9］ 沈爱云.黄芪、丹参中多种有效成分的制备和质量控制［J］. 亚太传统医药，2013，9(12):67-68.

［10］ 蒋桂香，吕应年，范世锦，等. 浓缩丹参骨宝颗粒中水溶性有效成分的质量控制研究［J］.中国医药导报，2011，8(34):67-69.