高效液相色谱法同时测定洁阴灵洗剂中苦参碱和蛇床子素的含量

肖卫红，杨全伟，徐宏峰，胡松，张耕

(武汉市第一医院药学部，武汉 430022)

高效液相色谱法同时测定洁阴灵洗剂中苦参碱和蛇床子素的含量

肖卫红，杨全伟，徐宏峰，胡松，张耕

(武汉市第一医院药学部，武汉 430022)

目的建立洁阴灵洗剂中苦参碱和蛇床子素的含量测定方法，更全面控制其质量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定洁阴灵洗剂中苦参碱和蛇床子素的含量。色谱柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.2%磷酸(11：89)，检测波长206 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃。结果苦参碱和蛇床子素线性范围分别为24.35～243.52 μg·mL-1(r=0.999 8)、37.10～242.24 μg·mL-1(r=0.999 9)；苦参碱平均回收率为97.10%(RSD=2.09%，n=9)，蛇床子素平均回收率为96.77%(RSD=2.32%，n=9)。结论该方法可同时测定洁阴灵洗剂中苦参碱和蛇床子素的含量，操作简单，结果可靠，重复性好，可用于洁阴灵洗剂的质量控制。

洁阴灵洗剂；苦参碱；蛇床子素；含量测定；色谱法，高效液相

洁阴灵洗剂处方收载于国家药品标准中药标准(外科妇科分册)WS-11007(ZD-1007)-2002，由苦参、蛇床子、黄柏、土茯苓等药材提取制成，具有清热解毒、杀虫止痒的功效，用于妇女湿毒下注引起的阴痒、外阴红肿、灼痛等症，以及真菌性、滴虫性、细菌性阴道病见以上症状者。其中苦参具有抗菌消炎及免疫抑制的作用[1]，蛇床子具有抗菌杀虫、抗炎镇痛的作用[2]，主要成分分别是苦参碱和蛇床子素。原标准中是测定黄柏中盐酸小檗碱的含量。笔者采用高效液相色谱法同时测定苦参碱和蛇床子素的含量，为更加有效全面地控制该制剂的质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪Agilent 1100(美国)；电子天平Sartorius ME215S，感量：0.01 mg(德国)。

1.2 试药 苦参碱(中国食品药品检定研究院，批号：110805-200906)；蛇床子素(中国食品药品检定研究院，批号：110822-201005)；洁阴灵洗剂(贵州金桥药业有限公司，批准文号：国药准字Z20043618，批号：201111004，201204002，201206001)；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸(11：89)；流速1.0 mL·min-1；检测波长206 nm；柱温30 ℃；进样量：20 μL。理论板数按苦参碱峰计算应不低于2 000，蛇床子素不低于3 000，分离度>1.5。

2.2 对照品溶液的制备 分别精密称定苦参碱、蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含苦参碱60 μg、蛇床子素90 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品10 mL，置分液漏斗中，加入浓氨试液1 mL，摇匀，用三氯甲烷萃取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至50 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 专属性实验 取处方比例制备不含苦参和蛇床子的阴性对照样品，依据“2.3”项下制备方法制得阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，在拟定的色谱条件下进行测定，结果显示供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致，阴性对照溶液在相应的保留时间处没有色谱峰出现，样品中其他组分对两种成分的含量测定无干扰。见图1。

2.5 线性关系考察 分别取苦参碱和蛇床子素对照品15.22和15.14 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品储备液。精密吸取该储备液1，2，3，4，5，10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制备成1～6号不同浓度对照品溶液，分别吸取20 μL注入液相色谱仪，以对照品浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，得回归方程。苦参碱回归方程：Y=72 346+13 471X(r=0.999 8)，苦参碱在24.35～243.52 μg·mL-1范围内，与峰面积呈良好线性关系。蛇床子素回归方程：Y=97 264-2 234X(r=0.999 9)，蛇床子素在37.10～242.24 μg·mL-1范围内，与峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度实验 精密吸取浓度为6号对照品溶液20 μL，在拟定的色谱条件下重复进样6次，以苦参碱和蛇床子素峰面积计算RSD(n=6)，分别为0.79%，1.14%，结果表明精密度符合要求。

2.7 稳定性实验 取洁阴灵洗剂样品(批号：20131104)制备得供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h内取样20 μL注入液相色谱仪，记录苦参碱和蛇床子素峰面积，计算RSD结果分别为1.38%，1.76%。结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.8 重复性实验 分别取同一批号样品(批号：20131104)10 mL，精密量取，共6份，照“2.3”项下供试品溶液制备方法，在拟定色谱条件下进行含量测定，结果苦参碱含量为0.13 mg·mL-1，RSD=1.45%；蛇床子素含量为0.17 mg·mL-1，RSD=1.13%。表明该方法法重复性良好。

2.9 加样回收率实验 精密吸取已知成分含量的样品9份(批号：20131104，含苦参碱0.13 mg·mL-1；蛇床子素0.17 mg·mL-1)，每份5 mL，各组分别加入苦参碱和蛇床子素对照品储备液适量，按“2.3”项下相同方法制备供试溶液，测定其中指标成分含量，进而计算加样回收率，结果苦参碱、蛇床子素平均回收率分别为97.10%，96.77%，RSD为2.09%，2.32%。见表1。

2.10 样品含量测定 取供试品3批，按“2.3”项下供试品溶液制备方法处理，并按拟定的色谱条件测定并计算含量，结果见表2。

1.苦参碱；2.蛇床子素

表1 苦参碱和蛇床子素加样回收实验结果

3 讨论

实验曾采用甲醇、酸性甲醇和三氯甲烷作为溶剂，结果使用甲醇峰形较好，三氯甲烷毒性偏大，综合考虑选用甲醇作为溶剂[3]。

比较甲醇-乙腈-pH7.6磷酸盐-三乙胺(15：25：65：0.1)[3]、甲醇-水-三乙胺(65：35：0.2)[4]、乙腈-0.2%磷酸(11：89)[5]，结果乙腈-磷酸系统洗脱能力

表2 3批样品含量测定结果

较好，且黏度小，柱压较低，分离效果较好，保留时间适中，综合各因素考虑未采用其他成分较多的流动相体系。

对苦参碱和蛇床子素对照品在190～500 nm进行波长扫描，最大吸收波长分别在210和203 nm，由于蛇床子素与苦参碱的色谱峰面积相比较小，选择206 nm后两个主峰面积适中，其他杂质对检测无干扰。

[1] 苗抗立，张建中，董颖，等.苦参的化学成分及药理研究进展[J].天然产物研究与开发，2001，13(2)：167-170.

[2] 陈艳，张国刚，余仲平.蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展[J].沈阳药科大学学报，2006，23(4)：133-135.

[3] 徐玲笑，周静安.高效液相色谱法同时测定苦参碱和蛇床子素的含量[J].中国医院药学杂志，2005，25(11)：1097-1098.

[4] 熊英，邬晓鸥.RP-HPLC测定凤洁身纯中苦参碱和蛇床子素的含量[J].华西药学杂志，2001，16(3)：213-214.

[5] 杨娟，黄敬群.除湿止汗散的制备及质量控制[J].中国医院药学杂志，2011，31(2)：154-156.

《医药导报》论文摘要的写作要求

《医药导报》的论文除“药学进展”“新药介绍”“药事管理”等栏目的综述与述评类文章，采用指示性摘要(是对文章内容进行概括总结，提出主要观点)外，其他原创性、第一手资料的研究性论文均采用报道性摘要 。报道性摘要包括四要素为：目的 (Objective)简要介绍研究的目的，说明提出问题的缘由，研究的范围及重要性。应与正文前言相一致，与结论相呼应。方法 (Method) 简要说明课题的基本设计、材料与方法或给药方法，如何分组，研究范围及精确程度，如何取得数据。结果 (Result) 简要列出与研究结论相关的主要结果、数据及统计学显著性检验值。数据应与正文内结果核实无误。结论 (Conclusion) 简要说明经验证、论证取得的正确观点、理论价值或应用价值。应与研究目的相呼应。四要素要求言简意赅，用第三人称书写，一般300～500字，英文摘要应与中文相呼应。

2014-05-23

2014-08-19

肖卫红(1978-)，男，湖北监利人，主管中药师，学士，从事医院制剂工作。电话：027-85332523，E-mail：xiaoweihong2005@sina.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)12-1654-03

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.027