4种糖浆剂微生物限度检查方法的建立*

2015-01-05檀巧婷严佳周欣宋洪涛

医药导报 2015年12期

关键词：限度糖浆菌液

檀巧婷，严佳，周欣，宋洪涛

(南京军区福州总医院药学科，福州 350025)

4种糖浆剂微生物限度检查方法的建立*

檀巧婷，严佳，周欣，宋洪涛

(南京军区福州总医院药学科，福州 350025)

目的建立氯化铵糖浆、硫酸亚铁糖浆、盐酸苯海拉明糖浆和马来酸氯苯那敏糖浆的微生物限度检查方法。方法采用2010年版《中华人民共和国药典》微生物限度检查的常规法、培养液稀释法对4种糖浆进行5种菌的微生物限度检查及方法学验证。进行试验的每种糖浆剂均分为试验组、菌液组、供试品对照组及稀释剂对照组。结果4种糖浆剂采用常规法时，氯化铵糖浆5种菌的回收率为72.0%～85.5%；硫酸亚铁糖浆77.3%～88.5%；盐酸苯海拉明糖浆78.2%～90.1%，仅有马来酸氯苯那敏糖浆对5种试验菌株的回收率为37.4%～52.7%，低于70%，证明其有抑菌作用，而采用培养液稀释法后，回收率为80.3%～92.7%，微生物限度检查结果符合要求。结论氯化铵糖浆、硫酸亚铁糖浆和盐酸苯海拉明糖浆微生物限度检查可采用常规法，而马来酸氯苯那敏糖浆采用培养液稀释法；控制菌检查均可按照常规法进行。

糖浆剂；微生物限度；稀释法，培养液

糖浆是指含药物的浓蔗糖溶液，含蔗糖量不低于45%(g·mL-1)[1]。糖浆含有高浓度的糖，多食伤脾，糖尿病患者也不宜服用，但由于其能掩盖某些药物的苦味、咸味及其他不适臭味，容易服用，临床疗效明显，尤其受儿童欢迎，因而受到广泛应用。根据《中华人民共和国药典》2010年版规定，糖浆剂需进行微生物限度检查。结合总后勤部卫生部开展的军队医疗制剂标准提高计划，笔者通过实验，确定了氯化铵糖浆、硫酸亚铁糖浆、盐酸苯海拉明糖浆和马来酸氯苯那敏糖浆的微生物限度检查方法，并结合其处方组成，探讨4种糖浆剂成分与微生物限度检查方法的相关性。

1 仪器与材料

1.1 仪器和设备 GHP-9160型隔水式电热恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)、DHG-9145A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一横科技有限公司)、SW-CJ-1B型净化工作台(苏州净化设备厂)、MJPS-150型真菌培养箱(上海精宏实验设备有限公司)、LDZX-40KBS型立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)。

1.2 试验菌种试验用菌分别是：白念珠菌 [CMCC(F)98001]、黑曲霉 [CMCC(F)98003]、金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]、大肠埃希菌 [CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501]、铜绿假单胞菌 [CMCC(F)10104]，均由福建省食品药品检验所提供。

1.3 培养液及稀释液本次试验所用到的改良马丁培养液(批号：1211282)、改良马丁琼脂培养液(批号： 130910)、胆盐乳糖培养液(批号：1204192)、甘露醇氯化钠琼脂培养液(批号：111201)、营养肉汤培养液(批号：120417)、营养琼脂培养液(批号：120601)、玫瑰红钠琼脂培养液(批号：130221)、溴化十六烷基三甲胺琼脂培养液(批号：131124)和pH值7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号：120329)均由北京三药科技开发公司提供。

1.4 样品氯化铵糖浆(规格：每瓶100 mL，批号：131203)，硫酸亚铁糖浆(规格：每瓶100 mL，批号：131203)，盐酸苯海拉明糖浆(规格：每瓶100 mL，批号：131216)，马来酸氯苯那敏糖浆(规格：每瓶100 mL，批号：131216)，均由南京军区福州总医院药学科制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 菌液制备、计数及菌液稀释度的确定

2.1.1 细菌菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至9 mL营养肉汤中，35 ℃培养24 h，制得菌悬液。取菌悬液1 mL用0.9%无菌氯化钠溶液依次10倍稀释至10-7，制成含菌数为50～100 cfu·mL-1的菌悬液[2-6]。

2.1.2 真菌菌液制备接种白念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养液中培养24 h，制得白念珠菌菌悬液，取菌悬液1 mL，加至0.9%无菌氯化钠溶液，依次作10倍稀释至10-7，制成含菌数为50～100 cfu·mL-1的菌悬液。取黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加入5 mL 0.9%无菌氯化钠溶液(含0.05%聚山梨酯80)，洗脱孢子，吸出孢子悬液至无菌试管，取菌悬液1 mL，加至9 mL 0.9%无菌氯化钠溶液(含0.05%聚山梨酯80)，依次稀释至10-7，制成含孢子数为50～100 cfu·mL-1的孢子悬液[2-6]。

2.2 供试液制备分别精密量取4种糖浆剂各10 mL，加pH值7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 mL，混匀，制成1：10的供试液备用[2-6]。

2.3 回收率测定

2.3.1 常规法测定试验组：分别取1：10的供试液1 mL和上述制备好的50～100 cfu·mL-1的试验菌液置无菌平皿中，加入营养琼脂培养液及玫瑰红钠琼脂培养液，混合均匀，放置凝固后倒置培养，每株试验菌分别制备2个平皿，按规定培养条件培养，逐日观察结果，记录菌落数。菌液组：取等体积的上述50～100 cfu·mL-1试验菌液，同试验组操作。供试品对照组：不加菌液，同试验组操作，测定供试品菌数。稀释剂对照组：取稀释液1 mL和50～100 cfu·mL-1的试验菌液，同试验组操作。回收率见表1。氯化铵糖浆、硫酸亚铁糖浆和盐酸苯海拉明糖浆回收率均>70%，可采用常规法，而马来酸氯苯那敏糖浆回收率小于70%，对5种菌株均有抑菌作用，应重新建立新的方法并验证。

表1 常规法验证试验回收率 %，n=3

样品大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白念珠菌黑曲霉氯化铵糖浆77．872．080．577．185．5硫酸亚铁糖浆81．277．386．488．582．1盐酸苯海拉明糖浆86．778．290．180．484．0马来酸氯苯那敏糖浆50．344．847．137．452．7

2.3.2 培养液稀释法试验组：取50～100 cfu·mL-1的试验菌液和“2.2”项下的马来酸氯苯那敏糖浆供试液0.2 mL，分别加入10个无菌平皿中，倾注营养琼脂培养液及玫瑰红钠琼脂培养液，混合均匀，放置凝固后倒置培养，每株试验菌分别制备10个平皿，培养，逐日观察结果，记录菌落数。菌液组、供试品对照组、稀释剂对照组同“2.3.1”操作。测定菌落数，计算回收率。结果大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌、黑曲霉回收率依次为80.3%，84.8%，90.1%，89.4%，92.7%(n=3)。故采用培养液稀释法后，马来酸氯苯那敏糖浆回收率>70%，符合要求。

2.4 控制菌检查方法的验证

2.4.1 大肠埃希菌方法验证试验组：取制备好的供试液10 mL及10～100 cfu·mL-1的大肠埃希菌菌液接种至100 mL胆盐乳糖培养液中培养24 h，取培养液0.2 mL，接种至4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养液5 mL管内培养，分别于5，24 h置366 nm紫外灯下，观察后，沿管壁加入靛基质试液数滴，观察有无玫瑰红色产生。供试品对照组：取同等体积供试液，同试验组操作。阳性对照组：按试验组的方法操作，不加供试液。阴性对照组：取稀释液10 mL按试验组方法操作，不加菌液。

2.4.2 验证试验结果试验组、阳性对照组检出大肠埃希菌，阴性对照组、供试品对照组未检出大肠埃希菌。4种供试品的控制菌检测方法可以按常规法检验。结果见表2。

表2 控制菌检查方法验证

+：检出细菌；-：未检出细菌

3 讨论

氯化铵糖浆、硫酸亚铁糖浆和盐酸苯海拉明糖浆蔗糖浓度分别为62.6%，82.5%，72.2%，3种糖浆虽含糖浓度不同，但菌落生长无明显差异，均采用常规法进行微生物限度检查。糖浆含量在62%～82%范围内微生物的生长与糖浆含量可能关系不大。也有文献报道糖浆剂蔗糖含量在60%以内，微生物的生长与糖浆剂蔗糖含量关系不大。糖浆的霉变、发酵与糖浆在生产过程中的卫生条件、防腐措施、成品消毒和储藏条件等因素有关[7]。

马来酸氯苯那敏糖浆蔗糖浓度为68.0%，采用培养液稀释法进行微生物限度检查，可能为处方中含有7%乙醇，增加其抑菌作用，采用常规法不能消除其抑菌性[8-13]。糖浆中的乙醇含量与微生物验证方法的关系，还有待进一步考察。

本实验通过对4种糖浆剂微生物限度检查方法的研究，可见糖浆的微生物限度检查方法与其处方组成有关。因此，微生物限度检查方法并不是单纯与药品剂型相关，当样品成分、制剂生产工艺等条件发生改变时检验方法都需要重新验证。

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