复方柴胡袋泡茶的质量标准*

许本善，雷宁，陈靖婕，常子倩，马萍，童卫杭

(解放军第二炮兵总医院药学部，北京 100088)

复方柴胡袋泡茶的质量标准*

许本善，雷宁，陈靖婕，常子倩，马萍，童卫杭

(解放军第二炮兵总医院药学部，北京 100088)

目的完善复方柴胡袋泡茶的质量控制标准，保障制剂质量。方法采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的柴胡、葛根、连翘进行定性鉴别，用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中的葛根素进行含量测定。色谱条件：色谱柱为岛津VP-ODS-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(23：77)，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃，检测波长为250 nm。结果TLC斑点清晰，分离度良好，阴性对照无干扰；葛根素线性范围为1.340 8～56.632 8 μg·mL-1(r=0.999 9，n=6)，平均加样回收率102.98%，RSD为1.48%(n=6)。结论该方法简便易行，适用于复方柴胡袋泡茶的质量控制。

柴胡袋泡茶，复方；葛根素；色谱法，薄层；色谱法，高效液相；含量测定

复方柴胡袋泡茶系我院医院制剂，具有解肌发表，清热解毒，清利头目，发散风热，清理除烦之功效，适用于流感、普通感冒及肺炎、化脓性扁桃体炎等引起的发热。该制剂处方由柴胡、葛根、黄芩、青蒿、连翘、浙贝、生石膏等12味药材组成，来源于我院多年临床经验，疗效确切。该制剂原质量标准制定于上世纪90年代，未对其中主要药味及其活性成分进行定性、定量检测。为了更好地控制制剂质量，本研究增加了制剂中柴胡、葛根、连翘的薄层鉴别，同时建立高效液相色谱法对制剂中葛根素的含量进行测定。实验结果表明，所建方法操作简便、灵敏度好、重复性佳，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 超声波清洗器(KQ-500V型，昆山超声仪器有限公司)；高效液相色谱系统(日本岛津LC-20A，包括DGU-20A3型脱气机、LC-20AT型溶剂输送泵、SIL-20A型自动进样器、CTO-20A型柱温箱、SPD-20A型紫外-可见检测器，以及LC Solution色谱工作站)；电子天平(JM-B20002型，浙江省余姚市纪铭称重校验设备有限公司，感量：0.1 mg)；分析天平(Sartorius，CP225D型，感量：0.01 mg)；旋转蒸发器(RE-52AA型，上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 试药 硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；柴胡皂苷a对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110777-201108，含量：90.50%)、柴胡皂苷d对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110778-201208，含量：94.60%)、葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110752-201313，含量：95.50%)、连翘苷对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110821-201213，含量：95.30%)；复方柴胡袋泡茶[医院制剂，批准文号：总制字(2011)F07002，批号：20130417，20131216，20140418]；甲醇为色谱纯，水为灭菌注射用水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 柴胡 取制剂粉末(批号：20140418，过筛孔内径0.250 mm筛)6.5 g，置具塞锥形瓶中，加5%浓氨水试液的甲醇溶液100 mL，密塞，30 ℃水温超声处理30 min，滤过，用甲醇分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加20 mL水溶解，再用饱和正丁醇提取，反复提取3次，每次50 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，回收正丁醇至干，甲醇溶解，并定容至5 mL，摇匀，作为供试品溶液。另取北柴胡对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的对照品适量，分别加甲醇制成每毫升含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液[1]。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB]实验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水(8：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，于60 ℃下加热至斑点显色清晰，紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点，阴性样品无干扰(图1)。

1，2.样品；3.柴胡皂苷a；4.柴胡皂苷d；5.北柴胡对照药材；6，7.阴性样品

图1 柴胡的薄层色谱图(温度：4 ℃；相对湿度：50%)

1，2.sample；3.saikosaponin a；4.saikosaponin d；5.reference ofBupleurumchinenseDC.；6，7.negative sample

Fig.1 TLC chromatogram ofBupleurumchinenseDC. (temperature: 4 ℃; relative humidity: 50%)

2.1.2 葛根 取制剂粉末(批号：20140418， 过筛孔内径0.300 mm筛)10 g，加甲醇100 mL，放置2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取葛根对照药材0.8 g，同法制成对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液[2]。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB]实验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(图2)。

1，4.葛根对照药材；2，3.样品；5，6.阴性样品；7.葛根素对照品

图2 葛根的薄层色谱图(温度：4 ℃；相对湿度：50%)

1，4.RadixPuerariaeLobatae；2，3.sample；5，6.negative samples；7.puerarin reference

Fig.2 TLC chromatogram ofRadixPuerariaeLobatae(temperature: 4 ℃; relative humidity: 50%)

2.1.3 连翘 取制剂粉末(批号：20140418，过筛孔内径0.180 mm筛)15 g，加石油醚(30～60 ℃)50 mL，密塞，超声处理15 min，滤过，弃去石油醚液，残渣于通风橱中挥干石油醚，再加入甲醇50 mL，密塞，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液[2]。再取连翘苷对照品，加甲醇制成每毫升含0.25 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB]实验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5：3：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经阴性对照实验，结果阴性对照溶液无干扰(图3)。

1，4，7.连翘苷对照品；2，3.阴性样品；5，6.样品

图3 连翘的薄层色谱图(温度：4 ℃；相对湿度：50%)

1,4,7.Phillyrinreference; 2,3. negative sample; 5,6. sample

Fig.3 TLC chromatogram ofForsythiasuspensa(temperature: 4 ℃; relative humidity: 50%)

2.2 葛根素含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：岛津 VP-ODS-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(23：77)；检测波长：250 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论板数按葛根素峰计算应不低于4 500，分离度>1.5[3]。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，供试品与对照品在相同位置有吸收，阴性样品无干扰。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品6.25，12.50 mg分别置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀作为储备液；精密量取0.25 mg·mL-1储备液1 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，浓度为10 μg· mL-1。

2.2.3 供试品溶液的制备 取制剂(批号：20130417)10袋，混匀，过筛孔内径0.300 mm筛，称取筛下制剂粉末约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定质量，超声(500 W，40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.4 阴性样品溶液的制备 按处方量比例及制备工艺，取缺葛根的其他药材制备阴性样品。精密称取阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取葛根素对照品贮备液(0.25 mg· mL-1)0.5，1.0，2.0 mL至10 mL 量瓶中，用色谱纯甲醇定容，分别标记为4～6号。另分别取0.5 mL葛根素对照品贮备液(0.25 mg·mL-1)至100，50，25 mL量瓶中，甲醇定容，标记为1～3号。分别精密吸取上述溶液各10 μL，按“2.2.1”项下的色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)对葛根素进样浓度(X)进行线性回归，得到葛根素的回归方程为：Y=43 347X+7 444.3(r=0.999 9，n=6)。结果表明，葛根素在1.340 8～53.632 8 μg·mL-1的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度实验 取对照品溶液，重复进样6次，进样量10 μL，在上述色谱条件下求得葛根素峰面积的RSD为0.38%(n=6)。

2.2.7 重复性实验 取供试品(批号：20130417)共6份，分别按“2.2.3”方法制备供试品溶液，进行测定，求得葛根素含量的RSD为1.10%(n=6)，表明重复性较好。

A.阴性对照溶液；B.对照品溶液；C.样品溶液；1.葛根素

2.2.8 稳定性实验 取同一供试品溶液，在0，1，2，3，5，10 h分别进行测定。结果表明样品溶液在10 h内基本稳定，葛根素峰面积的RSD为0.16%(n=6)。

2.2.9 加样回收率实验 精密称取已知含量(批号：20130417)的样品约0.12 g，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入葛根素对照品贮备液(0.50 mg·mL-1)1 mL，按“2.2.3”项下方法制备即得。精密吸取上述供试液10 μL注入色谱仪，测定含量，结果平均回收率102.98%(RSD=1.48%，n=6)。见表1。

表1 葛根素加样回收率实验结果

Tab.1 Results of recovery test of puerarin

取样量/g原有量加入量测得量mg回收率/%0．12120．41450．48710．9140102．550．12140．41520．48710．9072101．010．12140．41520．48710．9243104．520．12140．41520．48710．9270105．070．12170．41620．48710．9141102．220．12130．41480．48710．9141102．50

2.2.10 样品含量测定 取3批(批号：20130417，20131216，20140418)复方柴胡袋泡茶制剂，按“2.2.2”及“2.2.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进行测定并计算含量。结果葛根素含量依次为3.42，3.28，3.35 mgg-1，RSD分别为2.43%，2.69%，1.10%。

3 讨论

3.1 薄层鉴别药材的选择 在薄层鉴别过程中还对处方中除了柴胡、葛根、连翘以外的其他9味药材进行了考察，均无法排除阴性样品的干扰，故未纳入质量标准。

3.2 含量测定指标性成分的选择 本研究最初选用黄芩苷作为制剂含量测定的指标性成分，先后选用“加

热回流”[2]、“超声提取”[4]、“AB-8大孔树脂分离”[5]等前处理方法摸索供试品的制备，同时优化色谱条件，但发现其阴性样品中始终存在不同程度的干扰，故重新选取葛根素为含量测定的指标性成分。

3.3 流动相的选择 实验中曾考察了以甲醇-水(25：75)为流动相，但葛根素分离度和峰形均不佳[2]；而以甲醇-0.2%磷酸溶液(23：77)为流动相时，葛根素峰形对称，分离度良好[6]。

3.4 含量测定中供试品制备条件的选择 首先考察了回流、超声两种提取方法，结果显示超声提取的效果较好且操作简便；其次，对提取溶剂(30%甲醇、30%乙醇)进行了考察，结果显示，30%乙醇提取效果稍优于30%甲醇，兼顾环保无毒，选择30%乙醇作为提取溶剂；第三，考察了超声提取时间，结果表明30 min以后样品中葛根素的含量不再增加。因此，最终确定供试品处理方法为30%乙醇超声处理30 min。

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[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：312-313，159-160，282-283.

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《临床外科杂志》征订启事

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Quality Standard for Compound Chaihu Tea

XU Benshan, LEI Ning, CHEN Jingjie, CHANG Ziqian, MA Ping, TONG Weihang

(DepartmentofPharmacy,theSecondArtilleryGeneralHospitalofChinesePeople'sLiberationArmy,Beijing100088,China)

Objective To improve the quality standard of compoundChaihutea. MethodsPupleuriRadix,PuerariaeLobataeRadixandForsythiaeFructuswere identified by thin layer chromatography (TLC).HPLC method was used to determine the content of puerarin.The determination was performed on aShimadzuVP-ODS-C18column (250 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol-0.2% H3PO4(23：77).The flow rate was 1.0 mL·min-1, the column temperature was set at 30 ℃ and the detection wavelength was 250 nm. Results The TLC spots were clear and well-separated without negative interference.The good linear correlation existed within the range of 1.340 8-56.632 8 μg· mL-1for puerarin (r=0.999 9,n=6) and the average recovery was 102.98% with RSD being 1.48% (n=6). Conclusion The method is simple and accurate.It can be used for quality control of compoundChaihutea.

Chaihutea, compound； Puerarin； Chromatography, thin layer； Chromatography, high performance liquid； Content determination

2015-01-20

2015-03-04

*全军医疗机构制剂标准提高科研专项课题面上项目(13ZJZ19-2)

许本善(1987-)，男，山东德州人，药师，学士，研究方向：中药质量控制。电话：(0)18911632870， E-mail：benshan.xu@163.com。

雷宁(1978-)，女，陕西咸阳人，主管药师，博士，研究方向：天然药物药效物质基础及质量控制。电话：010-66343245(转8002)，E-mail：lilyzebra@163.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)12-1640-04

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.023