应用CLSI M43-A折点值判读解脲脲原体的药物敏感性

郑业焕，陈 玕，王则宇，马 冰，席 宇，朱大恒

(1.郑州大学生命科学学院，河南郑州450001;2.河南省疾病预防控制中心，河南郑州450016;3.河南省人民医院检验科，河南郑州450003)

解脲脲原体是寄生于泌尿生殖道的病原体，常引起非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、睾丸炎和附睾炎等疾病，并可引起男女不育不孕(西方国家已作为不明原因不育不孕症的必查项目)[1]。由于抗菌药物的滥用，国内外出现了多重耐药的解脲脲原体，给临床治疗带来了极大的困难。2011年，美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institude，CLSI)推出了关于人支原体体外药物敏感性试验，即CLSI M43-A标准指南[2]，该指南为临床支原体体外药物敏感性试验的标准化和规范化提供了依据。本研究依据该指南就临床收集的219株解脲脲原体进行体外药物敏感性试验，并结合指南中的折点值对其敏感性结果进行判读，以考察该指南在临床试验中的情况，为解脲脲原体的临床治疗提供参考价值，指导临床合理用药。

材料和方法

一、解脲脲原体来源

筛选河南省人民医院2012年9月至2013年11月疑似支原体感染患者，从女性宫颈分泌物和男性尿道分泌物、尿液、精液等临床样本中分离的219株解脲脲原体(排除同一感染株)，经分离鉴定后置于支原体肉汤培养基中-80℃备用，解脲脲原体(ATCC 33175)质控株由郑州安图生物工程股份有限公司提供。

二、试剂

采用Oxoid公司支原体肉汤CM0403(批号1242053)及SR0059C添加剂(批号1028599)，按照说明书要求配置相应支原体肉汤培养基，并补加酚红指示剂。所用抗菌药物均为标准品，其中左氧氟沙星、莫西沙星、四环素、红霉素均购于中国药品生物制品检定所，泰利霉素购于J＆K公司。

三、体外药物敏感性试验

体外药物敏感性试验操作和结果判读参照CLSI M43-A 指南[2]及《支原体与支原体病》[3]。采用微量肉汤稀释法，在96孔酶标板每一排的2～12孔各加100μL肉汤培养基;加100μL含128 μg/mL抗菌药物的肉汤培养基至每一排的第1和第2孔;从每一排的第2孔至12孔作对倍稀释;加100μL含有104～105CCU解脲脲原体新鲜肉汤培养基至每一孔;设立阴性对照、抗菌药物对照、阳性对照;密封酶标板，35～37℃环境下孵育48 h，阳性对照孔肉汤培养基颜色由黄色变为粉红色，记录最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)值。

四、统计学方法

采用SPSS 14.0统计软件进行 χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、质控结果

阴性对照、抗菌药物对照和阳性对照结果均无异常，用CLSI M43-A指南规定的解脲脲原体(ATCC 33175)进行质控，测定的结果及标准要求见表1。

二、微量肉汤稀释法测定219株解脲脲原体的MIC值

219株解脲脲原体的MIC值见表2。

表1 解脲脲原体(ATCC 33175)质控结果及要求 (μg/mL)

表2 219株解脲脲原体的MIC值

三、解脲脲原体药物敏感性试验结果

标国按照CLSI M43-A指南判读标准:左氧氟沙星MIC≤2μg/mL为敏感，MIC≥4 μg/mL为耐药;莫西沙星MIC≤2 μg/mL 为敏感，MIC≥4 μg/mL 为耐药;四环素 MIC≤1 μg/mL 为敏感，MIC≥2 μg/mL为耐药;红霉素 MIC≤8 μg/mL为敏感，MIC≥16μg/mL为耐药;泰利霉素 MIC≤4 μg/mL为敏感。把本次219例解脲脲原体的敏感性进行判读分析，结果见表3。

表3 219株解脲脲原体的体外药物敏感性试验结果 [株(%)]

讨 论

支原体体外药物敏感性试验于20世纪60年代首次开展，随后国内外发表的有关支原体体外药物敏感性试验方法和结果的文献报道各不相同，但缺少普遍可接受或标准化的方法。M43-A文件经历10余年，由CLSI小组组织了一系列的支原体体外药物敏感性试验研究，经美国、加拿大、法国的10个实验室依据研究成果达成的共识撰写而成[4]。M43-A是第1个公布的、提供了标准化的琼脂法和肉汤稀释法进行支原体药物敏感性试验的规范性文件，并用质控菌株给出了可参考的抑菌浓度范围。本研究参照该指南对质控株进行药物敏感性试验，结果符合指南要求，说明了试验的有效性。

参照CLSI M43-A指南，219株临床解脲脲原体对5种抗菌药物的敏感性结果分别为左氧氟沙星70.78%、莫西沙星 90.87%、四环素 87.21%、红霉素84.93%和泰利霉素98.17%。同为喹诺酮类的左氧氟沙星和莫西沙星的敏感性经统计学分析，差异有统计学意义，莫西沙星作为最新的第4代喹诺酮类抗菌药物，药动学性质更趋良好[5]，这可能与这2种抗菌药物上市的时间及临床使用情况有关。在本研究中泰利霉素表现出了极高的临床敏感性，该种抗菌药物在SFDA数据库暂未查到授权上市，极高的敏感性可能与该种抗菌药物未在国内临床使用有关。

之前，法国生物梅里埃公司的商品化Mycoplasma IST2产品被认可并广泛使用，根据IST2的判断标准，红霉素的敏感性多在70%以下，四环素的敏感性多在90%以上[6-10]。进一步研究时发现，IST2针对红霉素的折点值设定为1和4 μg/mL，要低于CLSI M43-A指南中的折点值，四环素的折点值设定为4和8 μg/mL，要稍高于CLSI指南中的折点值。如果按照生物梅里埃公司的IST2折点判读本次研究的数据，红霉素的敏感性由84.93%下降为60.73%，四环素的敏感性由87.21%上升为95.43%。由此可见折点值的差异对结果的判读影响重大。此外，这种差异也可能因指南中所要求的培养液pH值和成分与商品化产品中的培养液pH值和成分有差异所致。

体外药物敏感性试验是临床医师选择抗菌药物的重要参考依据，正确的药物敏感性试验判断标准非常重要。随着CLSI M43-A的推出，使支原体体外药物敏感性试验将更加标准化和规范化，支原体体外药物敏感性试验结果将更加准确可靠，将为临床支原体预防及治疗提供重要参考依据。但该指南是否适合中国的国情，是否会存在地域、人种或人群的差异，值得进一步思考和研究。

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