慢性乙型肝炎患者HBV DNA 载量与血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 水平的相关性研究

梁劲松，胡振斌，梁中夏，农朝赞，农茜茜

广西中医药大学第一附属医院1.检验科;2.肝病科，广西南宁510405;3.广西医科大学;4.广西壮族自治区民族医院;5.右江民族医学院

慢性乙型肝炎在机体内持续感染是由病毒和机体免疫功能决定，HBV DNA 载量是反映乙肝病毒复制可靠的实验指标，是临床诊断HBV 感染和判别病毒治疗疗效的重要参考指标［1-2］。白细胞介素是重要的细胞因子，它们在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等过程中均发挥重要作用。本文对60 例慢性乙型肝炎患者HBV DNA 载量、血清白介素(IL-2)、白介素(IL-6)、白介素(IL-8)、白介素(IL-13)水平进行检测，以期探索细胞因子在慢性乙型肝炎进展过程中的免疫作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选自2013 年6 月-2013 年9 月就诊的慢性乙型肝炎病毒感染患者60 例作为疾病组，男30 例，女30 例，年龄24 ～48 岁，平均年龄(35 ±10)岁，肝功能总胆红素(total bilirubin，TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin，DBIL)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)等酶学及血常规检测均无异常;并设20名健康体检者为对照组，男10 例，女10 例，年龄22 ～46 岁，平均年龄(35 ±8)岁。排除心、脑、肺、肾、肿瘤、糖尿病、造血系统疾病及其他炎症性疾病。

1.2 方法

1.2.1 血标本处理:清晨空腹肘静脉抽血，置专用EDTA 抗凝管，作HBV DNA 定量检测和血常规检测;另一管置无抗凝剂管，作HBV 标志物和IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 含量检测;2 h 后3 000 r/min，离心15 min，取血清和血浆分装随机编号，置-20 ℃保存待测。

1.2.2 检测方法:(1)检测血清HBV 标志物:严格按说明书进行操作，采用免疫发光法定量检测，试剂盒和仪器由安图生物技术有限公司提供;(2)血浆HBV DNA 定量检测:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法，使用ABI7300 型核酸扩增实时荧光定量PCR 检测仪检测，试剂盒由深圳达安生物技术有限公司提供，试剂灵敏度为HBV DNA ＜5.0 ×102copies/ml;(3)血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 检测:采用酶联免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测，使用DNM-9602 酶标分析仪以450 nm 比色，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。1.3 统计学处理 采用SPSS 11.5 统计软件完成，计量资料以x±s 表示，组间比较用t 检验;计数资料以百分率(%)表示，组间比较用χ2检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清HBV 标志物的定量检测 以检测值＞1 为升高的临界点，慢性乙型肝炎患者HBV DNA 含量＜5×102copies/ml 时，其血清HBV 标志物以HBsAg、抗-HBe、抗-HBc 3 项指标含量升高为主要表现，3 项指标同时升高检出率为95%;血浆HBV DNA ＞5. 0 ×102copies/ml 时，以HBsAg、HBeAg、抗-HBc 3 项指标升高为主要表现，其同时升高检出率为70%，抗-HBe升高率为30%，两组检出率相比，差异有统计学意义(P ＜0.05);但两组的血清HBsAg 含量均值比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。

表1 患者不同血浆HBV DNA 载量与血清HBV 标志物的关系(x±s)Tab 1 Relationship of different plasma HBV DNA load and serum markers of HBV (x±s)

2.2 血浆HBV DNA 载量与IL-2、IL-6、IL-8、IL-13水平的比较 慢性乙型肝炎患者血浆HBV DNA 载量无论是否≥5.0 ×102copies/ml，其血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 水平均显著高于健康对照组(P ＜0.05);但血浆HBV DNA 高载量组的4 项白细胞介素水平显著高于HBV DNA 低载量组，差异有统计学意义(P ＜0.05，见表2)。

表2 各组患者血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 水平的比较(x±s)Tab 2 Comparison of serum IL-2，IL-6，IL-8 and IL-13 levels among three groups (x±s)

3 讨论

白细胞介素是非常重要的细胞因子家族，它们在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用。

试验发现HBV DNA 含量＜5 ×102copies/ml 时，其血清HBV 标志物定量检测以HBsAg、抗-HBe、抗-HBc 3 项指标含量升高为主要表现，3 项指标同时升高检出率为95%;血清HBV DNA ＞5.0 ×102copies/ml 时，以HBsAg、HBeAg、抗-HBc 3 项指标升高为主要表现，其同时升高检出率为70%，抗-HBe 升高率为30%;但两组患者血清HBsAg 水平相比，差异无统计学意义。表明HBV DNA 载量水平可反映机体乙肝病毒复制的活跃程度及抗病毒疗效［3］。

本研究发现HBV 血清标志物HBsAg 指标含量升高时，无论HBV DNA 载量是否≥5 ×102copies/ml，其血浆IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 水平含量均显著高于健康对照组(P ＜0.05)，但高载量组的白细胞介素水平均显著高于低载量组(P ＜0.05)。相关文献报道，在慢性乙型肝炎中，随着病情加重，血浆IL-6 和sIL-2R 含量随之升高，特别是轻度组及中度组与重度组间比较，差异有统计学意义［4］。慢性乙型肝炎非活动组和活动组IL-2、IL-6、IL-8 水平高于对照组，但活动组IL-4、IL-8 和IFN-γ 水平低于非活动组(P ＜0.05)［5］;急慢性及重型肝炎患者血清IL-6、IL-8 等水平均显著高于对照组，升高程度与病情相关［6］，升高的顺序为慢性乙型肝炎重型＞慢性乙型肝炎中度＞慢性乙型肝炎轻度［7］。CHB、LC 及PHC 患者血清HBV DNA 阳性组和HBV DNA 阴性组的IL-6、IL-8 的含量均显著高于对照组(P ＜0.01)，而且HBV DNA 阳性组显著高于HBV DNA 阴性组(P ＜0. 01)［8］。有研究报道携带IL-6-572GG 基因型的乙型肝炎患者易发生慢性化，指出高水平的IL-13 是慢性乙型肝炎患者肝纤维化的促进因子［9-11］。另资料报道慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T 淋巴细胞百分率和CD4+/CD8+比值均显著低［12］。研究表明HBV 毒患者机体T 细胞亚群失衡而促炎细胞因子释放，IL-2、IL-6、IL-8、IL-13 既具有增强抗原递呈能力、杀菌力、控制炎症反应作用，而IL-6、IL-13 又引起细胞毒性和细胞损伤而产生肝纤维慢性化作用，揭示了HBV 患者机体存在免疫应答异常导致免疫损伤，细胞因子比例失调及其双向的作用，是导致乙型肝炎慢性纤维化的重要原因。

综上所述，HBV 感染者HBV DNA 载量与HBV 血清标志物的表达密切相关;机体主要正性致炎细胞因子IL-2、IL6、IL8、IL-13 介导于中性粒细胞浸润为主的各类炎症性疾病，在慢性炎症患者血清中显著升高，HBV 感染者其血清细胞因子水平与HBV DNA 载量呈正相关，表明在慢性HBV 持续感染的过程中，细胞因子既具有增强杀菌控制炎症反应作用，又具有促进肝纤维慢性化免疫损伤的作用。因此，HBV DNA 载量和细胞因子水平的变化可反应机体免疫活动状况，对观察临床疗效具有重要意义。

［1］ Kessler HH，Pierer K，Santner BI，et al. Quantitative detection of hepatitis B virus DNA with a new PCR assay ［J］. Clin Chem Lab Med，1998，36(8):601-604.

［2］ Neumaier M，Braun A，Wagener C. Fundamentals of quality assessment of molecular amplification methods in clinical diagnostics. International federation of clinical chemistry scientific division committee on molecular biology techniques［J］.Clin Chem，1998，44(1):11-26.

［3］ Yang XQ，Gao L，Zhang Y，et al. The relationship between the detection of HBV markers and HBV DNA［J］. Lab Med Clin，2009，16(6):1332-1335.杨秀清，高蕾，章颖，等. 乙型肝炎患者HBV DNA 定量与血清标志物的关系分析［J］. 检验医学与临床，2009，16 (6):1332-1335.

［4］ Zhu T，Tao ZH，Chen XD，et al. Changes of concentrations of soluble interleukin-2 receptor and interleukin-6 in sera of patients with hepatitis B virus infection and its significance［J］. Journal of Hepatopancreatobiliary Surgery，2006，18(4):228-229.朱涛，陶志华，陈晓东，等. 乙型肝炎患者外周血中IL-6 和sIL-2R含量变化及其意义［J］. 肝胆胰外科杂志，2006，18(4):228-229.

［5］ Luo GC，Yi TT，Yan HP，et al. The serum cytokine expression in patients with chronic HBV infection during different phases［J］. Immunological Journal，2012，28(12):1065-1068.罗光成，易婷婷，闫惠平，等.慢性乙型肝炎患者不同疾病阶段的血清细胞因子水平研究［J］. 免疫学杂志，2012，28 (12):1065-1068.

［6］ Wen XY，Xiang CY，Yuan Y R. Change of serum TNF-α，IL-6，IL-8，IL-12 and IL-18 in patients with hepatitis B［J］. Sichuan Medical Journal，2003，24(11):1111-1112.温先勇，向成玉，苑翼蓉.乙型肝炎患者血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-12、IL-18 变化的研究［J］.四川医学，2003，24(11):1111-1112.

［7］ Chen Q，Wang SC，Tang B，et al. The significance and changes of IL-6 and IL-8 in the serum of hepatitis B patients［J］. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine on Liver Diseases，1998，8(4):207-208.陈群，王胜春，汤斌，等.IL-6 和IL-8 在乙型肝炎患者血清中的变化及意义［J］.中西医结合肝病杂志，1998，8(4):207-208.

［8］ Tang XH，Lu DH. Significance of the serum HBV DNA and IL-6，IL-8 level in hepatitis B virus-related diseases［J］. J Gastroen Hepatol，2007，6:546-547.

［9］ Gao BX，Pu J，Zhang GS，et al. IL-6 genetic polymorphisms influenc the chronicity outcomes of HBV infection ［J］. Chinese Hepatology，2012，17(10):700-703.高宝霞，浦江，张国顺，等.IL-6 基因多态性与乙型肝炎慢性化的相关性［J］.肝脏，2012，17(10):700-703.

［10］ Li XS，Wu LR，Cui HS，et al. Serum levels of interleukin(IL-13)and prostaglandin(PGE1)and their clinical significance in patients with vital hepatitis B［J］. Chinese Journal of Immunology，2007，23(1):73-75.李香淑，吴龙仁，崔鹤松，等. 乙型肝炎患者血清IL-13 和PGE1 含量的检测及其意义［J］中国免疫学杂志，2007，23(1):73-75.

［11］ Chen J，Wang WH. Relationship of serum IL-13 in chronic hepatitis and liver fibrosis［J］. Chin Lab Diagn，2005，9(5):810-811.陈洁，王卫华.慢性乙型肝炎患者血清IL-13 与肝纤维化的关系［J］.中国实验诊断学，2005，9(5):810-811.

［12］ Zhang JC，Weng XD，Chen SY，et al. Hepatitis B patients with peripheral T lymphocyte subsets［J］. J Clin Hepatol，2013，19(4):356-357.张建春，翁锡定，陈孙云，等. 乙型肝炎患者外周血T 淋巴细胞亚群的变化［J］. 实用肝脏病杂志，2013，19(4):356-357.