慢性乙型肝炎外周血中T 细胞亚群和NK 细胞的变化及临床意义

于晓辉，王兆林，李晓云，张 茜，杨晓萍，张方信，戴 飞

1.兰州军区兰州总医院消化科，甘肃 兰州730050;2.兰州大学第二临床医学院;兰州军区兰州总医院3.医务部;4.血液科;5.影像诊断科;6.统计室

我国是一个乙型肝炎大国，慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染者约9 300 万人，其中发展为慢性乙型肝炎的患者约2 000 万例［1］。国内外大量文献［2］表明，机体感染HBV 后引起肝细胞的损伤不是病毒的直接作用，而是由病毒感染肝细胞后，机体为清除HBV 启动非适应性和适应性免疫反应，执行非适应性免疫反应的主要细胞是自然杀伤细胞(natural killer cell，NK cell)，执行适应性免疫反应的主要细胞是T 淋巴细胞和B 淋巴细胞，尤其以杀伤性T 淋巴细胞为主，这些免疫细胞在清除HBV 的同时损伤了肝细胞。T 淋巴细胞是宿主抗病毒、抗肿瘤免疫反应中起主导作用的免疫活性细胞，参与机体特异性免疫反应，可以直接反映机体的细胞免疫状况，构成免疫系统的主要部分，T 淋巴细胞由不同的亚群组成，主要包括CD4+T 细胞、CD8+T 细胞，CD4+T 细胞主要为辅助性T 细胞(Th)，可以产生特异性抗体，而CD8+T 细胞主要为T 抑制(Ts)/T 细胞毒性细胞(CTL)，正常情况下，两者保持一定的比例，维持机体的细胞免疫功能［3-4］。CD3+T 细胞代表总T 淋巴细胞［5］，CD4+T 细胞是辅助T 细胞表面的一种标记，CD8+是抑制性T 细胞的一种标记［6］，NK 细胞是机体重要的执行非适应性免疫反应的免疫细胞，它介导天然免疫应答，不依赖抗体和补体，能直接杀伤靶细胞，如肿瘤细胞或受病毒感染的细胞等，同时也具有抗感染、免疫调节和免疫监视作用［7］。在HBV 感染性肝病患者中，由于肝功能受损、低蛋白血症、营养不良以及肝炎病毒的长期慢性感染，免疫细胞在此长期的免疫识别及清除中可以出现免疫功能异常，表现为T 淋巴细胞功能减弱。CD3+T细胞、CD4+T 细胞、CD8+T 细胞和NK 细胞是目前估测机体免疫状态、鉴定T 细胞亚群较为可靠的实验室指标。我们检测慢性乙型肝炎患者外周血中CD3+T细胞、CD4+T 细胞、CD8+T 细胞及NK 细胞的含量变化，进一步了解乙型肝炎患者的机体免疫功能状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部病例来源于2012 年1 月-2013年5 月兰州军区兰州总医院消化科住院患者及门诊体检人员，选择48 例慢性乙型肝炎患者作为实验组，HBeAg 阳性者20 例、阴性者28 例，男34 例，女14 例，年龄18 ～68 岁，平均年龄(37.28 ±4.56)岁。选择26名门诊健康体检人员作为正常对照组，男16 例，女10例，年龄22 ～51 岁，平均年龄(40.6 ±5.26)岁。所有患者均排除患有其他类型肝炎、糖尿病、肾病、硬皮病;健康志愿者系在消化科工作的医护人员志愿者，均无心、肝、肾等重要脏器疾病，无肝炎、血吸虫病史。

1.2 仪器 FACS Calibur 流式细胞仪为美国Becton-Kickin-son(BD)公司生产，激发波长188 nm。

1.3 试剂 鼠IgG1-FITC/IgG-PE(阴性对照)，CD4-FITC/CD8-PE，CD3-FLTC，pH 7.2 磷酸盐缓冲溶液(PBS)，均为北京中衫金桥公司产品。

1.4 方法 所有患者均在晨起空腹抽取静脉血5 ml，以EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)抗凝，以3 000 r/min 离心10 min，利用FACS Calibur 流式细胞仪及Cell Quest 软件(均由BD 公司提供)对血样进行测定和分析。

1.5 统计学处理 所有统计学分析均采用SPSS 17.0统计学软件完成。计量资料以x±s 表示，计量资料采用单因素方差分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

T 细胞亚群和NK 细胞检测结果经统计学分析发现，HBeAg 阳性和阴性的慢性乙型肝炎患者外周血中CD3+T 细胞、CD4+T 细胞和NK 细胞的含量均较正常对照组降低，CD8+T 细胞则升高，差异有统计学意义(P ＜0.05)，而T 细胞亚群和NK 细胞含量HBeAg阳性和阴性的慢性乙型肝炎患者比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。

表1 慢性乙型肝炎患者外周血T 淋巴细胞亚群和NK 细胞的检测结果(x±s)Tab 1 Results of serum T-lymphocyte subsets and NK cell in chronic hepatitis B (x±s)

3 讨论

人体的免疫细胞在机体的免疫监视、免疫识别和免疫清除中发挥重要作用，尤其在外来抗原感染机体后作用尤为突出。而HBV 感染机体发展成为慢性乙型肝炎是目前感染性疾病中非常重要的疾病之一。机体从感染HBV 到慢性乙型肝炎的形成中，免疫细胞对HBV 的免疫识别到免疫清除，对肝细胞造成一定的损伤，其免疫功能也有一定的变化。如果病毒复制引起免疫功能失调和肝细胞持续损伤，会造成肝细胞变性和坏死，导致肝纤维化、肝硬化，甚至肝细胞癌变，所以，检测慢性乙型肝炎患者的免疫功能对病情的分析、治疗及预后判断非常重要。

关于慢性乙型肝炎的发生与机体免疫状况关系的研究较多，目前业内学者普遍认为，HBV 感染机体后并不能直接损伤肝细胞，而是通过引起宿主自身的免疫反应间接导致肝细胞的损伤，其中细胞免疫反应是HBV 感染后引起肝细胞损伤的主要机制［8-9］。机体为清除外来病毒而激活体内的一系列免疫反应系统，尤其是细胞免疫反应，而T 细胞在此特异性免疫应答中起到关键作用［10］。Rehermann 等［11］研究认为慢性乙型肝炎患者由于存在不同程度的细胞免疫功能异常，随着病毒复制的增加，高载量的病毒会诱发机体免疫耐受，导致免疫应答低下，尤其是CD3+T 细胞、CD4+T 细胞、CD8+T 细胞和NK 细胞功能的降低。Tan等［12］研究认为慢性乙型肝炎患者存在一定程度的免疫功能异常，HBV 感染机体后，CD3+T 细胞、CD4+T细胞等一系列免疫细胞发生功能紊乱，导致免疫功能下降。同样，Li 等［13-14］研究一致认为，体内持续存在的HBV 造成CD4+T 细胞减少，CD8+T 细胞增加，而增加的CD8+T 细胞中Ts 细胞又抑制了CD4+T 细胞，继而引起CD4+T 细胞清除病毒能力下降，另一方面升高的CD8+T 细胞中的CTL 可造成肝细胞损伤。因此，慢性乙型肝炎患者主要表现为CD4+T 细胞减少，CD8+T 细胞增高，最终导致乙型肝炎病毒不能完全清除，肝细胞被损伤。

Maini 等［15］研究报道，NK 细胞是机体天然免疫的主要承担者，也是获得性细胞免疫的核心调节细胞，其可能通过CTL 途径直接杀伤病毒感染的靶细胞，也可能通过死亡受体系统诱导细胞凋亡，清除已经受病毒感染的细胞，另外，还可以分泌大量的免疫调节效应因子和炎症细胞因子发挥抗病毒的功能。Wu 等［16］研究认为，慢性乙型肝炎患者NK 细胞水平较低，主要是与肝细胞分泌某种因子使NK 细胞活性下降，在杀伤病毒过程中大量消耗NK 细胞等因素有关。

本研究结果表明慢性乙型肝炎患者外周血中CD3+T 细胞、CD4+T 细胞及NK 细胞百分比明显低于正常对照组，而实验组CD8+T 细胞则较正常对照组有所升高，这与国内外的许多报道是一致的［17-19］。结合国内外研究和本研究结果，我们认为慢性乙型肝炎免疫功能低下可能是由于机体感染HBV 后，参与其免疫过程的各种淋巴细胞亚群间的平衡被打破，表现为外周血淋巴细胞亚群的百分比例失调及免疫功能改变，即CD3+T 细胞、CD4+T 细胞及NK 细胞明显下降，CD8+T 细胞增加，而慢性乙型肝炎病毒感染机体时CD4+T 细胞缺乏，可以促进CD8+T 细胞的增殖，并增加其清除病毒的能力，同时CD8+T 细胞基因表达也可能发生了变化，这可能是CD8+T 细胞过度表达的原因之一［20］。因此，临床上进行外周血淋巴细胞免疫功能检测以评估患者的病情状况非常重要，尤其在抗病毒过程中给予一定的免疫调节剂，以纠正慢性乙型肝炎患者紊乱的免疫功能，减轻肝脏的免疫损伤，尽快恢复其肝脏和免疫功能更为重要。

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