一种泛酸钙含量的检测方法*

赵 静，陈子龙

(陕西省渭南市食品药品检验所，陕西 渭南714000)

0 引 言

泛酸钙是B 族维生素的一种，是生物正常生长必需的营养物质之一，分混旋体(dl -型)、右旋体(d-型)、左旋体(l -型)3 种型式。其中以右旋体为主，又名本多生酸钙，d -泛酸钙属维生素类药物，是人体和动物体内辅酶A 的成分之一，存在于活细胞中，其主要作用是参与蛋白质、脂肪、糖在体内的新陈代谢，治疗维生素B 缺乏症、周围神经炎以及手术后的肠绞痛，与维生素C 合用可治疗播散性红斑狼疮。另外，d -泛酸钙还能与羟酸形成高能硫酯化合物，激活活性较弱的酸，参与血色素卟啉架的合成，对皮肤和粘膜功能的正常化、对毛发的着色和抗感染也是不可缺少的，在预防链霉素和卡那霉素副作用方面也有积极的作用［1-4］。

复合维生素B 片是一个复杂的多组分制剂，其组分包括烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6和泛酸钙，用于因缺乏维生素B 类所致的各种疾患的辅助治疗的营养补充制剂。也可预防和治疗B 族维生素缺乏所致的营养不良、厌食、脚气病、糙皮病等的维生素类非处方药，收载于部颁标准化学药品及制剂第一册，发现为了有效的控制其质量，人们做了大量的工作，对其所含有的部分成分测定进行了研究，如对复合维生素B 片中维生素B1，B2，B6和烟酰胺的含量进行了测定［5-7］，但是其中所含的泛酸钙，由于其含量低，且是以盐的形式存在于药品中，紫外吸收属末端吸收，所以未对泛酸钙含量测定进行研究。

目前，测定泛酸钙的分析方法有容量法、毛细管电泳法、脉冲伏安法和高效液相色谱法等。其中，采用EDTA 络合滴定测定钙的容量法为中国药典规定的标准方法，但其灵敏度低，对于含有多种水溶性、脂溶性维生素和矿物质的复合维生素片剂中泛酸钙的测定，干扰通常较大，已不能满足分析测定的要求。高效液相色谱法是分离测定复合维生素片剂中泛酸钙的有效方法。因此本研究参考部分文献方法［8-12］，采用HPLC-UV 法对复合维生素B 片中泛酸钙的含量进行测定，已更好的保证复合维生素B 片产品质量。

1 实验部分

1.1 仪器和试药

岛津高效液相色谱仪LC -30AD;岛津SPD -20A 检测器;SCQ-200 型超声波清洗器;赛多利斯BBS-224S 型电子分析天平;

泛酸钙对照品(中国药品生物制品检定所:100370 -200301);复合维生素B 片(A 公司，批号:130801;130802;130803);乙腈(美国Tedia 公司，色谱纯);磷酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯);高纯水。

1.2 方法

1.2.1 高效液相色谱条件

色谱柱:Kromasil C18(150 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水-磷酸(100∶900∶1);检测波长:210 nm;流速:1 mL·min-1，进样体积:20 μL;柱温:35 ℃.

1.2.2 溶液的制备

1)对照品储备液。将泛酸钙对照品置于120℃干燥3 h，精密称取泛酸钙对照品201.76 mg 于200 mL 量瓶中，加入适量流动相，超声溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为泛酸钙对照品储备液。

2)供试品溶液。取本品20 片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于泛酸钙5 mg)置10 mL 量瓶中，加入适量流动相，超声溶解后，用流动相稀释至刻度，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.3 方法学考察结果

1.3.1 线性关系考察

精密量取泛酸钙对照品储备液用流动相稀释成浓度为353.08;403.52;504.4;605.28;706.16 μg·mL-1，按“2.1”项下色谱条件测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，表明泛酸钙在353.08 ～706.16 μg·mL-1间，与相应色谱峰面积呈良好的线性关系，回归方程为:y =140 000x-15 435，r=0.999 4.泛酸钙色谱图见图1.

1.3.2 精密度试验

取线性试验项下浓度为0.504 4 mg·mL-1泛酸钙对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6 次，计算峰面积，其RSD=0.98%.

1.3.3 重复性试验

取同一批号供试品，按“2.2”项下供试品溶液制备方法处理6 份，按上述色谱条件测定含量，其含量平均值为97.53%，RSD=0.89%.

1.3.4 回收率试验

取同一批号供试品100 片，研细，精密称定(约相当于泛酸钙12.5 mg)6 份，置50 mL 量瓶中，分别加入浓度为0.504 4 mg·mL-1泛酸钙对照品溶液适量，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，泛酸钙的平均回收率为98.66%，RSD =0.73%.结果见表1.

1.3.5 稳定性试验

将新配置的供试品溶液，分别于0，1，4，8，10，12 h 在上述同一色谱条件下进样，测定含量，RSD=0.78%，表明该溶液在12 h 内稳定。

图1 空白样品Fig.1 HPLC chromatograms of negative sample

表1 加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery experiment

1.3.6 样品含量测定

取样品3 批，按供试品溶液制备方法处理样品，测定含量，结果见表2.

表2 样品含量测定结果Tab.2 Determination results of sample

2 讨 论

2.1 采用高效液相色谱法的检测

通过采用高效液相色谱法对复合维B 片中泛酸钙含量的检测，用对照品溶液在200 ～400 nm 波长范围内扫描，发现泛酸钙在200 ～210 nm 波长有较大吸收，考虑到这个范围是末端吸收，因此选用截止波长较低的乙腈作为有机相，并选定210 nm为检测波长。流动相中增大乙腈的比例，色谱出峰快，保留时间短，泛酸钙峰与其它组分峰不能分开;磷酸的加入量低，泛酸钙峰拖尾严重，过高腐蚀色谱柱，实验经优化得到流动相为V(水)∶V(乙腈)∶V(磷酸)=900∶100∶1.

2.2 几种其他传统分析法的比较

毛细管电泳法因其重现性差，分离能力较弱，对PH 值要求较高，不能满足泛酸钙含量方法学检测。容量 法其灵敏度低，对于含有多种水溶性、脂溶性维生素和矿物质的复合维生素片剂中泛酸钙的测定，干扰通常较大，已不能满足分析测定的要求。而脉冲伏安法因解析复杂体系的能力不足，分析时间较长，且需要对样品除氧，也不利于泛酸钙的检测。

3 结 论

与传统的泛酸钙的分析方法(容量法、毛细管电泳法、脉冲伏安法和高效液相色谱法等)相比。高效液相色谱法测定复合维生素B 片中泛酸钙的含量，该法灵敏度高、重复性好、在测定浓度范围内，峰面积与浓度之间呈良好的线性关系，回收率高，且处方中其他成分对泛酸钙含量测定无干扰，故本法可以作为复合维生素B 片中泛酸钙的含量测定方法。

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