水牛精液品质的研究

赵家才，毛翔光，马燕茹，李 雯，王春兰，何永富

（云南省种畜繁育推广中心冻精站，云南 昆明小哨650212）

水牛是热带、亚热带地区特有的畜种，具有乳、肉、役多种用途，饲养方便，成本低。河流型水牛适应性好，生产性能优良，具有体型较大，生产性能优良，奶质好，抗病力强等特点。摩拉水牛成年体重：公牛平均969kg、母牛平均647kg；尼里水牛成年体重：公牛平均800.0kg、母牛平均600kg［1］；榔江水牛公牛36月龄体重709.5±34.65kg，12月龄平均体重达255±32.53kg。对河流型水牛精液质量研究，目的在于提高其冷冻精液质量，提高冷冻精液受胎率，充分发挥河流型水牛优良的遗传资源。

1 材料和方法

1.1 种公牛的来源

我站先后从广西水牛研究所引进摩拉水牛和尼里水牛；2008年5月从腾冲县引进两头槟榔江水牛，槟榔江水牛（Bos bubalus）是我国发现的唯一的河流型水牛（2n＝50），2008年已通过遗传资源审定，2009年入选国家奶水牛良种补贴项目提供冷冻精液。摩拉水牛，尼里水牛和槟榔江水牛在云南省种畜繁育推广中心冻精站饲养和生产冷冻精液。

1.2 种公牛的调教与日常管理

1.2.1 种公牛的饲养管理 水牛引进经隔离检疫后实行单圈饲养选派责任心强，经验丰富的饲养员管理。定时定量饲喂，不饲喂霉烂变质的饲草饲料，自由饮水，饮水保持清洁，运动场自由运动，日粮结构为：混合精料，成年公牛供给4～5kg，育成公牛供给3～4kg；粗饲料：常年饲喂羊草8～10kg；夏秋季饲喂羊草6～8kg，人工混播牧草30～50kg。保持牛体和圈舍清洁舒适，日常加强公牛肢蹄的护理和保健，定期免疫、驱虫和环境消毒。

1.2.2 公牛的调教与采精方法 水牛用假阴道法采精［2］待公牛性兴奋强烈，爬跨台畜，阴茎勃起充分时把阴茎导入假阴道公牛即可射精。假阴道采精时，假阴道内胎温度为40～42℃，假阴道压力和润滑度适当。采精时采精员要注意人畜安全、沉着冷静、胆大心细、操作熟练、自然，让公牛阴茎自主探寻插入假阴道，避免不良刺激造成公牛不快，防止形成恶癖，不利于正常采精，公牛射精后移开假阴道收集精液送入实验室处理。

1.3 水牛精液品质的检测方法和指标

水牛精液品质的检测按照牛冷冻精液标准（GB4143－2008）及生产技术规程进行检测，测定公牛的射精量、原精活力、原精精子密度、冷冻精液解冻活力和畸形率。

1.4 水牛冷冻精液的制作流程

采集的水牛精液，经质量检测后，凡原精活力65%以上、精子密度为6.0亿／mL以上其他指标无异常的精液，在等温条件下用冷冻稀释液稀释，稀释后的水牛精液用MRS－3型塑料细管分装喷字一体机进行分装、封口和喷字，分装后的细管精液温度降至室温时放入＋4℃的冰箱中持续降温平衡4h，平衡后的细管精液在低温操作柜中水平放于冷冻架上，然后用程控冷冻仪冷冻；最后把冷后的细管冷冻精液浸入液氮中，随机抽样解冻，解冻温度为40±2℃，检查解冻活力和畸形率，冷冻精液解冻活力35%以上，其他指标均合格者入库保存和使用。

1.5 数据来源和处理方法

数据来源于2008年至2013年的水牛采精记录，用生物统计法对数据进行统计分析［3］。2月初至5月初为春季，5月初至8月初为夏季，8月初至11月初为秋季，11初至2月初为冬季。

2 结果与分析

2.1 水牛原精液品质

摩拉水牛公牛的射精量为5.1±2.37mL（n＝2688）、精子密度为7.8±3.68亿／ml、原精活力57.4±16.42%；尼里水牛公牛的射精量为5.3±1.99mL（n＝1370）、精子密度为8.4±3.54亿／mL、原精活力62.7±12.51%；槟榔江水牛公牛的射精量为5.6±2.26mL（n＝271）、精子密度为8.6±5.13亿／mL、原精活力65.2±9.19%。

2.2 水牛冷冻精液品质

水牛精液经稀释、分装、平衡和冷冻解冻以后，解冻活力达到0.35以上，牛冷冻精液国家标准按（GB 4143—2008）要求的冷冻精液才能保存使用，摩拉牛精液报废率为37.20%，尼里水牛精液报废率为32.51%，槟榔江水牛精液报废率为12.92%。摩拉水牛冷冻精液解冻活力平均36.0±2.13%（n＝1680），畸形率为20.62±11.04%（n＝873）；尼里水牛冷冻精液解冻活力平均36.5±2.43%（n＝1102），畸形率为15.2±5.71%（n＝481）；槟榔江水牛冷冻精液解冻活力平均37.2±2.48%（n＝239），畸形率为19.6±6.08%（n＝110）。

2.3 不同品种水牛精液品质分析

水牛24～30月龄开始试采精，试采精初期（30月龄以前）每两周采精一次，30～36月龄后，每周采精两次。水牛精液品质和精子冷冻解冻活力及畸形率详见表1、表2、表3、表4、表5、表6和表7。

表1 不同品种水牛冻精畸形率比较表

表1的结果分析得出：春季尼里水牛冷冻精液解冻后畸形率极显著（P＜0.01）低于摩拉水牛和槟榔江水牛，摩拉水牛与槟榔江水牛间的差异不显著；夏季尼里水牛冷冻精液解冻后畸形率极显著（P＜0.01）低于摩拉水牛和槟榔江水牛，摩拉水牛与槟榔江水牛间的差异显著（P＜0.05）；秋季尼里水牛冷冻精液解冻后畸形率极显著（P＜0.01）低于摩拉水牛和槟榔江水牛，摩拉水牛与槟榔江水牛间的差异不显著；冬季尼里水牛冷冻精液解冻后畸形率极显著（P＜0.01）低于摩拉水牛和槟榔江水牛，摩拉水牛与槟榔江水牛间的差异不显著。

表2 不同品种水牛射精量比较表

表2的结果分析得出：春季摩拉水牛、槟榔江水牛和尼里水牛射精量差异均不显著（P＞0.05）；夏季摩拉水牛和尼里水牛射精量均极显著（P＜0.01）低于槟榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛差异不明显；秋季摩拉水牛射精量显著低于尼里水牛（P＜0.05），摩拉水牛和槟榔江水牛射精量的差异不明显，尼里水牛与槟榔江水牛射精量差异亦不明显（P＞0.05）；冬季摩拉水牛射精量显著低于尼里水牛（P＜0.05），摩拉水牛和槟榔江水牛射精量的差异不明显，尼里水牛与槟榔江水牛射精量差异亦不明显（P＞0.01）。

表3 不同品种水牛原精活力比较表

表3的结果得出：春季摩拉水牛原精活力极显著低于尼里水牛和槟榔江水牛（P＜0.01），尼里水牛和槟榔江水牛间差异不显著；夏季摩拉水牛原精活力极显著低于槟榔江水牛（P＜0.01），显著低于尼里水牛（P＜0.05），尼里水牛和槟榔江水牛间的差异不显著；秋季摩拉水牛、尼里水牛和槟榔江水牛间原精活力差异均不明显；冬季摩拉水牛原精活力极显著（P＜0.01）低于尼里水牛和槟榔江水牛，尼里水牛和槟榔江水牛间差异不显著。

表4 不同品种水牛精子密度比较表

表4的结果同理得出：春季摩拉水牛和尼里水牛精子密度极显著（P＜0.01）低于槟榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛间精子密度不显著（P＞0.05）；夏季尼里水牛精子密度极显著（P＜0.01）高于槟榔江水牛，显著（P＞0.05）高于摩拉水牛，摩拉水牛和槟榔江水牛间差异不明显（P＞0.05）；秋季摩拉水牛、尼里水牛和槟榔江间精子密度差异不明显（P＞0.05）；冬季尼里水牛和摩拉水牛精子密度极显著（P＜0.01）低于槟榔江水牛，摩拉水牛和尼里江水牛间差异不显著。

表5 不同品种水牛不同季节精子解冻活力比较表

表5的结果得出：春季摩拉水牛冷冻精液解冻活力极显著低于尼里水牛和槟榔江水牛，摩拉水牛冷冻精液解冻活力极显著低于尼里水牛（P＜0.01）；夏季摩拉水牛和尼里水牛冷冻精液解冻活力极显著（P＜0.01）低于槟榔江水牛，摩拉水牛和尼里水牛冷冻精液解冻活力不显著（P＞0.05）；秋季摩拉水牛和尼里水牛冷冻精液解冻活力极显著低于槟榔江水牛，摩拉水牛冷冻精液解冻活力极显著低于尼里水牛（P＜0.01）；冬季尼里水牛冷冻精液解冻活力显著高于摩拉水牛和槟榔江水牛（P＜0.05），摩拉水牛和槟榔江水牛间差异不显著（P＞0.05）。

表6 不同月龄水牛精液品质分析比较

表7 不同年度水牛精液品质分析比较表

3 讨论与小结

公牛不同个体间、不同品种间、不同季节、不同年龄原精活力、冻精解冻活力、采精量和精子密度存在差异，部分公牛精液品质低，个别公牛精子耐冻性差，这与王英群［4］报道相一致，水牛精子畸形率比较高，尼里水牛冷冻精液精子畸形率及显著低于摩拉水牛，采精量较低。种公牛精液品质的变化随不同的采精年度，饲养管理水平和种公牛月龄的变化而变化，种公牛个体间的差异极为明显，公牛射精量与精子密度呈负相关。

3.1 季节对水牛精液品质的影响

虽然水牛是常年多次发情的动，但它们的繁殖效率在一年当中的不同季节表现出很大的差异［5］。云南属亚热带和热带高原季风气候，以亚热带气候分布较广，纬度较低，海拔较高，年温差小，日温差大，干湿季分明，但日照时间的季节变化明显。水牛射精量、原精活力、精子密度、精子畸形率和冷冻精液解冻活力随季节的节律变化而发生一定的变化。摩拉水牛，泥里水牛和槟榔江水牛精子畸形率夏季和秋季低于冬季和春季；摩拉水牛和槟榔江水牛射精量夏季和秋季较高，均高于冬季和春季，尼里水牛射精量秋季和冬季较高；原精活力摩拉水牛夏季和秋季较高，尼里水牛春季和秋季较高，槟榔江水牛秋季和冬季较高；精子密度摩拉水牛和尼里水牛夏季和秋季较高，槟榔江水牛春季和冬季较高；冻精解冻活力摩拉水牛和尼里水牛秋季和冬季较高，槟榔江水牛夏秋季较高。

3.2 品种对精液品质的影响

尼里水牛冷冻精液解冻精子畸形率最低，摩拉水牛最高；槟榔江水牛原精活力、精子密度、冷冻精液解冻活力和射精量均高于摩拉水牛和尼里水牛，摩拉水牛最低，这与王英群［4］报道不一致。

3.3 种公牛月龄对精液品质的影响

处于不同月龄的种公牛其精液品质差异较大，采精量，原精活力和冷冻精液解冻活力随月龄的增加而有所增加，精子密度则呈下降趋势，61至84月龄射精量、原精活力和解冻活力较高，30至36月龄射精量最低，差异极显著；61至84月龄精子密度最低，30至36月龄精子密度最高，差异极显著，37至72月龄时比较稳定。

3.4 采精年度对种公牛精液品质的影响

不同的采精年度种公牛精液品质具有不同的差异，2011年度射精量最高，2008和2009年度最低，原精活力2012年度最高，2008年度最低，精子密度2010年度最高，2013年度最低，冷冻精液解冻活力2013和2012年度最高，2009年度最低.2013年原精活力较低，试采精青年公牛比例较高，部分青年公牛原精精子活力低，报废率高。2010年部分公牛每个采精日采精两次，第一次和第二次采精间隔时间30～40min，对精液品质无不良影响。

总之，河流型水牛精液品质较好，精子冷冻复苏率高，解冻活力好，冷冻效果稳定，种公牛可以常年连续采精。水牛品种、不同季节、个体和年度因素等对精液品质具有影响。不同品种水牛精液品质存在差异，槟榔江水牛精液品质优于尼里水牛和摩拉水牛。不同公牛个体间存在明显差异，个别公牛精子活力极低，精子畸形率较高，有的生精微弱，往往终生都难于改变，精液品质差的公牛应及时淘汰。，水牛精液品质随季节的变化而发生一定程度的改变，极端天气对公牛精液品质具有明显影响（在昆明的气候环境下），导致大部分公牛精液活力大幅下降。不同年度由于受饲料供给、饲养管理、饲养方式、种公牛年龄结构等因素的影响，精液品质发生变化。水牛性成熟较晚，但也可适当提早采精利用，摩拉水牛和尼里水牛一般30月龄可试采精，部分公牛在24月龄即能试采精，精液品质良好。槟榔江水牛为地方品种，适应性较强，耐粗饲，主要生活在海拔较低的低热河谷地带，但在海拔500～2000m的地区也能正常生长繁殖，性成熟较早，24月龄即能顺利采集到精液，可比摩拉水牛和尼里水牛提早6至12月龄采精。本研究未考虑疾病、应激、饲养管理、采精和精液处理等因素对公牛精液品质的影响，要进一步加强水牛冷冻精液技术和机理的研究特别是水牛精子畸形率偏高的机理是目前亟待解决的课题。

［1］ 王根林.养牛学［J］.北京：中国农业出版社，2000：9.

［2］ 赵家才.三种采精方法在种公牛上的应用效果分析 ［J］.黄牛杂志，2001，27（1）：48－50.

［3］ 明道绪.生物统计附试验设计［M］.北京：中国农业出版社，2004.

［4］ 王英群.河流型不同品系种公牛精液品质的差异分析［J］.中国畜牧兽医文摘，2012，28（11）.

［5］ Antonio Borghese著 .世界水牛生产与研究进展［M］.赵开典，毛翔光，雷衡等编译.昆明：云南出版集团公司云南科技出版社，2012.12