HMGB1和血管内皮生长因子在神经母细胞瘤组织中的作用

张国锋等

【摘要】 目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和血管内皮生长因子（VEGF）在小儿神经母细胞瘤组织中的表达及其在肿瘤淋巴结转移、血管浸润中的意义。方法 收集经病理证实为神经母细胞瘤的石蜡标本50例、同期相应瘤旁组织15例。应用免疫组织化学S-P染色辅以计算机图像分析系统分析结果的方法， 研究HMGB1、VEGF在各组标本中的表达及意义。结果 HMGB1在神经母细胞瘤组织中的表达（145.16±10.55）与其在瘤旁组织中表达（103.47±6.07）相比差异有统计学意义（P<0.05）。VEGF在神经母细胞瘤组织中的表达（148.57±9.77）与其在瘤旁组织中的表达（105.28±1.62）相比差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析显示神经母细胞瘤组织中HMGB1与VEGF的表达成正相关（r=0.422， P=0.001）。结论 HMGB1和VEGF的高表达与神经母细胞瘤的浸润转移有关， 参与了肿瘤血管浸润及淋巴结转移，给临床靶向治疗神经母细胞瘤提供了新的思路。

【关键词】 儿童；神经母细胞瘤；高迁移率族蛋白B1；血管内皮生长因子；免疫组织化学

【Abstract】 Objective To explore the expressions of high mobility group box protein 1 （HMGB1） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in pediatric neuroblastoma tissue and their significance in tumor node metastasis and blood vessel invasion. Methods A total of 50 paraffin samples of diagnosed neuroblastoma and 15 adjacent tissues in the same period were selected. The expressions and significance of HMGB1 and VEGF in the groups were analyzed by immunohistochemical S-P dyeing method and computer image analysis system. Results The expression of HMGB1 in the neuroblastoma tissue was （145.16±10.55）， and that in adjacent tissue was （103.47±6.07）. The difference had statistical significance （P<0.05）. There were statistically significant difference of expressions of VEGF in neuroblastoma tumor tissue （148.57±9.77） and in adjacent tissue （105.28±1.62） （P<0.05）. The related analysis showed that there was positive correlation between the expressions of HMGB1 with VEGF in neuroblastoma tissue （r=0.422， P=0.001）. Conclusion The high level expressions of HMGB1 and VEGF are correlated with infiltration and metastasis of neuroblastoma， tumor node metastasis and blood vessel invasion. They can provide new idea in the targeted therapy of neuroblastoma.

【Key words】 Children； Neuroblastoma； High mobility group box protein 1； Vascular endothelial growth factor； Immunohistochemistry

神经母细胞瘤（neuroblastoma， NB）是儿童最常见的恶性实体肿瘤， 该肿瘤发病部位隐匿， 恶性程度高， 早期诊断困难， 易发生早期转移。临床中许多神经母细胞瘤发现时已经合并远处转移， HMGB1（high mobility group box protein 1）是近年来发现在肿瘤浸润转移中起着主要作用的炎症介质， 有文献报道HMGB1与乳腺癌、胃癌等多种肿瘤的浸润、生长、转移密切相关[1]。作者研究了50例神经母细胞瘤组织、15例瘤旁组织中的HMGB1和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ， VEGF）的表达情况， 评价HMGB1、VEGF在神经母细胞瘤血管浸润转移中的作用及意义。报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 取郑州市儿童医院2005年1月～2012年1月小儿外科手术存档神经母细胞瘤标本蜡块50例， 男30例， 女20例， 平均年龄3.0岁， 所有患儿均经病理证实；同期患儿15例相应瘤旁组织。

1. 2 试剂 免疫组化试剂：抗HMGB1为兔抗人多克隆抗体浓缩型（北京博奥森生物技术公司）， VEGF抗体为兔抗人多克隆抗体即用型（购自北京中杉金桥生物技术公司）。

1. 3 免疫组织化学染色 采用S-P染色法， 二抗采用通用型PV-9000。石蜡切片厚约4 μm， 操作步骤严格按照说明书进行， HMGB1抗体的稀释浓度1∶200， VEGF抗体稀释浓度为1∶100。endprint

1. 4 结果判断并计算机辅助图像分析 选用OlympusBh2研究显微镜， 在镜下观察HMGB1和VEGF的表达， 指标如下：阳性区域累积光密度值（IOD）， 阳性区域面积（area）， 阳性区域平均积分光密度值（AIOD）， 公式为：AIOD=IOD/area， AIOD代表目的蛋白表达水平。

3 讨论

肿瘤的浸润、转移、生长是一个复杂过程， 也是肿瘤复发的一个重要因素。肿瘤能否在转移部位生存， 以及肿瘤细胞向远处播散， 这个过程中肿瘤内血管生成是必备条件之一， 更是肿瘤复发的重要前提。目前许多肿瘤专家提出抑制肿瘤内部血管生成可以阻断肿瘤的生长、侵袭， 进而可以抑制肿瘤的转移， 减少肿瘤复发， 这一点已经得到大家公认。许多研究表明肿瘤血管生成受到来自肿瘤细胞自身及其宿主细胞分泌的血管生成抑制因子和刺激因子的调节。VEGF是目前被认为是肿瘤组织中促血管生成的最主要的血管生长因子[2] ， VEGF在血管形成和浸润过程中起重要的调控作用。文献报道VEGF 在许多肿瘤中高表达， 肿瘤组织中高表达的VEGF与肿瘤的转移及复发密切相关， 其在肿瘤组织中诱导内皮细胞成熟， 这些成熟活化的内皮细胞可以形成新的血管， 为肿瘤组织输送营养物质[3]。本组试验资料结果显示， 血管内皮生长因子在神经母细胞瘤组织和瘤旁组织中的表达差异有统计学意义（P<0.05）， 表明了VEGF在神经母细胞瘤的血管形成及发展中起到了重要的作用。

HMGB1 是一种核内蛋白， 其参与细胞核内多种生物学功能， 不但在DNA复制、转录、重组和修复过程中起着重要的作用， 同时HMGB1又作为一种重要的结构蛋白， 在协助基因转录、稳定细胞核、调节甾体受体活性方面起着决定性作用。细胞主要通过两种不同的途径释放HMGB1：一是HMGB1由活化的免疫细胞主动分泌到细胞外[4]；另一条途径是HMGB1由坏死的细胞被动释放到细胞外[5]。目前的研究表明分泌到细胞外的HMGB1，可能与肿瘤的发生、细胞增生分化、神经轴突生长密切相关[6]。本组资料神经母细胞瘤组织中HMGB1蛋白的表达明显高于瘤旁组织， 差异有统计学意义（P<0.05）， 与其在多种肿瘤， 如胃癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等具有高表达结果一致[7]。说明HMGB1在神经母细胞瘤的发生、细胞增生分化过程中同样有着重要的意义。在本组试验中在神经母细胞瘤组织中HMGB1和VEGF的表达呈正相关（r=0.422， P=0.001）， 提示可能在神经母细胞瘤的转移过程中， HMGB1起到了促进转移的作用。表明HMGB1、VEGF在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中可能起着重要的作用。

通过本实验研究， 作者认为在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中HMGB1和VEGF起着重要的作用， 为临床下一步基因治疗提供了新的思路和方向。

参考文献

[1] 黄俊辉， 李洋， 刘亮，等. VEGF-C介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成及定位. 中南大学学报：医学版， 2006，31（1）：36-39，51.

[2] Qing Y， Shuo W， Zhi HW， et al. The in vitro antitumor effect and in vivo tumor-specificity distribution of human mouse chimeric antibody against transferrin receptor. Cancer Immunol Immunother， 2006， 55（9）：1111-1121.

[3] Chen A， Cuevas I， Kenny PA， et al. Endothelial cell migration and vascular endothelial growth factor expression are the result of loss of breast tissue polarity. Cancer Res， 2009， 69（16）：6721-6729.

[4] Wang H， Bloom O， Zhang M， et al. HMGB1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science， 1999， 285（5425）：248-251.

[5] Scaffidi P， Misteli T， Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation. Nature， 2002， 418 （6894）：191-195.

[6] Thorburn J， Frankel AE， ThorburnA. Regulation of HMGB1 release by autophagy. Autophagy， 2009， 5（2）：247-249.

[7] Chung HW， Lee SG， Kim H ， et al. Serum high mobility group box-1 （HMGB1） is closely associated with the clinical and pathologic features of gastric cancer. J Transl Med， 2009（7）：38.

[收稿日期：2014-08-22]endprint

1. 4 结果判断并计算机辅助图像分析 选用OlympusBh2研究显微镜， 在镜下观察HMGB1和VEGF的表达， 指标如下：阳性区域累积光密度值（IOD）， 阳性区域面积（area）， 阳性区域平均积分光密度值（AIOD）， 公式为：AIOD=IOD/area， AIOD代表目的蛋白表达水平。

3 讨论

肿瘤的浸润、转移、生长是一个复杂过程， 也是肿瘤复发的一个重要因素。肿瘤能否在转移部位生存， 以及肿瘤细胞向远处播散， 这个过程中肿瘤内血管生成是必备条件之一， 更是肿瘤复发的重要前提。目前许多肿瘤专家提出抑制肿瘤内部血管生成可以阻断肿瘤的生长、侵袭， 进而可以抑制肿瘤的转移， 减少肿瘤复发， 这一点已经得到大家公认。许多研究表明肿瘤血管生成受到来自肿瘤细胞自身及其宿主细胞分泌的血管生成抑制因子和刺激因子的调节。VEGF是目前被认为是肿瘤组织中促血管生成的最主要的血管生长因子[2] ， VEGF在血管形成和浸润过程中起重要的调控作用。文献报道VEGF 在许多肿瘤中高表达， 肿瘤组织中高表达的VEGF与肿瘤的转移及复发密切相关， 其在肿瘤组织中诱导内皮细胞成熟， 这些成熟活化的内皮细胞可以形成新的血管， 为肿瘤组织输送营养物质[3]。本组试验资料结果显示， 血管内皮生长因子在神经母细胞瘤组织和瘤旁组织中的表达差异有统计学意义（P<0.05）， 表明了VEGF在神经母细胞瘤的血管形成及发展中起到了重要的作用。

HMGB1 是一种核内蛋白， 其参与细胞核内多种生物学功能， 不但在DNA复制、转录、重组和修复过程中起着重要的作用， 同时HMGB1又作为一种重要的结构蛋白， 在协助基因转录、稳定细胞核、调节甾体受体活性方面起着决定性作用。细胞主要通过两种不同的途径释放HMGB1：一是HMGB1由活化的免疫细胞主动分泌到细胞外[4]；另一条途径是HMGB1由坏死的细胞被动释放到细胞外[5]。目前的研究表明分泌到细胞外的HMGB1，可能与肿瘤的发生、细胞增生分化、神经轴突生长密切相关[6]。本组资料神经母细胞瘤组织中HMGB1蛋白的表达明显高于瘤旁组织， 差异有统计学意义（P<0.05）， 与其在多种肿瘤， 如胃癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等具有高表达结果一致[7]。说明HMGB1在神经母细胞瘤的发生、细胞增生分化过程中同样有着重要的意义。在本组试验中在神经母细胞瘤组织中HMGB1和VEGF的表达呈正相关（r=0.422， P=0.001）， 提示可能在神经母细胞瘤的转移过程中， HMGB1起到了促进转移的作用。表明HMGB1、VEGF在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中可能起着重要的作用。

通过本实验研究， 作者认为在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中HMGB1和VEGF起着重要的作用， 为临床下一步基因治疗提供了新的思路和方向。

参考文献

[1] 黄俊辉， 李洋， 刘亮，等. VEGF-C介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成及定位. 中南大学学报：医学版， 2006，31（1）：36-39，51.

[2] Qing Y， Shuo W， Zhi HW， et al. The in vitro antitumor effect and in vivo tumor-specificity distribution of human mouse chimeric antibody against transferrin receptor. Cancer Immunol Immunother， 2006， 55（9）：1111-1121.

[3] Chen A， Cuevas I， Kenny PA， et al. Endothelial cell migration and vascular endothelial growth factor expression are the result of loss of breast tissue polarity. Cancer Res， 2009， 69（16）：6721-6729.

[4] Wang H， Bloom O， Zhang M， et al. HMGB1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science， 1999， 285（5425）：248-251.

[5] Scaffidi P， Misteli T， Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation. Nature， 2002， 418 （6894）：191-195.

[6] Thorburn J， Frankel AE， ThorburnA. Regulation of HMGB1 release by autophagy. Autophagy， 2009， 5（2）：247-249.

[7] Chung HW， Lee SG， Kim H ， et al. Serum high mobility group box-1 （HMGB1） is closely associated with the clinical and pathologic features of gastric cancer. J Transl Med， 2009（7）：38.

[收稿日期：2014-08-22]endprint

1. 4 结果判断并计算机辅助图像分析 选用OlympusBh2研究显微镜， 在镜下观察HMGB1和VEGF的表达， 指标如下：阳性区域累积光密度值（IOD）， 阳性区域面积（area）， 阳性区域平均积分光密度值（AIOD）， 公式为：AIOD=IOD/area， AIOD代表目的蛋白表达水平。

3 讨论

肿瘤的浸润、转移、生长是一个复杂过程， 也是肿瘤复发的一个重要因素。肿瘤能否在转移部位生存， 以及肿瘤细胞向远处播散， 这个过程中肿瘤内血管生成是必备条件之一， 更是肿瘤复发的重要前提。目前许多肿瘤专家提出抑制肿瘤内部血管生成可以阻断肿瘤的生长、侵袭， 进而可以抑制肿瘤的转移， 减少肿瘤复发， 这一点已经得到大家公认。许多研究表明肿瘤血管生成受到来自肿瘤细胞自身及其宿主细胞分泌的血管生成抑制因子和刺激因子的调节。VEGF是目前被认为是肿瘤组织中促血管生成的最主要的血管生长因子[2] ， VEGF在血管形成和浸润过程中起重要的调控作用。文献报道VEGF 在许多肿瘤中高表达， 肿瘤组织中高表达的VEGF与肿瘤的转移及复发密切相关， 其在肿瘤组织中诱导内皮细胞成熟， 这些成熟活化的内皮细胞可以形成新的血管， 为肿瘤组织输送营养物质[3]。本组试验资料结果显示， 血管内皮生长因子在神经母细胞瘤组织和瘤旁组织中的表达差异有统计学意义（P<0.05）， 表明了VEGF在神经母细胞瘤的血管形成及发展中起到了重要的作用。

HMGB1 是一种核内蛋白， 其参与细胞核内多种生物学功能， 不但在DNA复制、转录、重组和修复过程中起着重要的作用， 同时HMGB1又作为一种重要的结构蛋白， 在协助基因转录、稳定细胞核、调节甾体受体活性方面起着决定性作用。细胞主要通过两种不同的途径释放HMGB1：一是HMGB1由活化的免疫细胞主动分泌到细胞外[4]；另一条途径是HMGB1由坏死的细胞被动释放到细胞外[5]。目前的研究表明分泌到细胞外的HMGB1，可能与肿瘤的发生、细胞增生分化、神经轴突生长密切相关[6]。本组资料神经母细胞瘤组织中HMGB1蛋白的表达明显高于瘤旁组织， 差异有统计学意义（P<0.05）， 与其在多种肿瘤， 如胃癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等具有高表达结果一致[7]。说明HMGB1在神经母细胞瘤的发生、细胞增生分化过程中同样有着重要的意义。在本组试验中在神经母细胞瘤组织中HMGB1和VEGF的表达呈正相关（r=0.422， P=0.001）， 提示可能在神经母细胞瘤的转移过程中， HMGB1起到了促进转移的作用。表明HMGB1、VEGF在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中可能起着重要的作用。

通过本实验研究， 作者认为在神经母细胞瘤的血管浸润、淋巴结转移中HMGB1和VEGF起着重要的作用， 为临床下一步基因治疗提供了新的思路和方向。

参考文献

[1] 黄俊辉， 李洋， 刘亮，等. VEGF-C介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成及定位. 中南大学学报：医学版， 2006，31（1）：36-39，51.

[2] Qing Y， Shuo W， Zhi HW， et al. The in vitro antitumor effect and in vivo tumor-specificity distribution of human mouse chimeric antibody against transferrin receptor. Cancer Immunol Immunother， 2006， 55（9）：1111-1121.

[3] Chen A， Cuevas I， Kenny PA， et al. Endothelial cell migration and vascular endothelial growth factor expression are the result of loss of breast tissue polarity. Cancer Res， 2009， 69（16）：6721-6729.

[4] Wang H， Bloom O， Zhang M， et al. HMGB1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science， 1999， 285（5425）：248-251.

[5] Scaffidi P， Misteli T， Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation. Nature， 2002， 418 （6894）：191-195.

[6] Thorburn J， Frankel AE， ThorburnA. Regulation of HMGB1 release by autophagy. Autophagy， 2009， 5（2）：247-249.

[7] Chung HW， Lee SG， Kim H ， et al. Serum high mobility group box-1 （HMGB1） is closely associated with the clinical and pathologic features of gastric cancer. J Transl Med， 2009（7）：38.

[收稿日期：2014-08-22]endprint