夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的体外抗菌活性研究

马英 刘晔 王倩倩 吴湜 杨洋 黄海辉 项蕾红

夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的体外抗菌活性研究

马英 刘晔 王倩倩 吴湜 杨洋 黄海辉 项蕾红

目的评价夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的体外抗菌活性。方法上海华山医院2013年3-9月收集的50株痤疮丙酸杆菌，按美国临床实验室标准化研究所推荐的琼脂稀释法测定夫西地酸及其他抗菌药的最低抑菌浓度（MIC）。数据分析采用WHONET 5.4软件。结果夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的MIC50和MIC90分别为0.5和1.0 mg/L，敏感率为90%；莫西沙星与夫西地酸大致相仿，敏感率为90%；克林霉素和红霉素的敏感率分别为54%和46%，MIC90值均＞128 mg/L；对甲硝唑耐药。在药物质量浓度为128 mg/L时，克林霉素的累积抑菌率达到70%，红霉素只有48%，而夫西地酸在2 mg/L时的累积抑菌率已达到100%。结论夫西地酸对临床分离的痤疮丙酸杆菌具有良好的体外抗菌活性。

丙酸杆菌，痤疮；梭链孢酸；微生物敏感性试验

夫西地酸（fusidic acid）是一种水溶性钠盐，是从红色梭链孢霉提取、唯一有类似甾族化合物结构而没有类固醇活性的抗生素［1］，为窄谱抗革兰阳性菌药物，对葡萄球菌具有较强抗菌活性，也可抗多种厌氧菌和其他细菌如梭状芽孢菌属、棒状杆菌等。基于夫西地酸的这些特性，有研究［2］观察了夫西地酸治疗痤疮的疗效。本试验评价夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的体外抗菌活性。

一、材料

1.细菌来源：痤疮丙酸杆菌分离自2013年3-9月我院皮肤科门诊中重度痤疮患者皮损组织，脆弱拟杆菌标准菌株ATCC 25285由复旦大学附属华山医院抗生素研究所惠赠，痤疮丙酸杆菌标准菌株ATCC 6919购自广东省微生物研究所菌种保藏中心。本研究通过复旦大学附属华山医院伦理委员会审查。

2.抗菌药物：夫西地酸标准品，香港澳美制药厂生产；甲硝唑、克林霉素、红霉素、头孢曲松、头孢西丁、米诺环素、四环素、氨苄西林、舒巴坦等标准品均购自中国食品药品检定研究院技术服务部；亚胺培南，默沙东公司产品；莫西沙星，拜耳公司产品；氨苄西林/舒巴坦的配比按美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）标准推荐为2∶1。

3.培养基和主要试剂：布氏杆菌琼脂为美国BD公司产品，血红素和维生素K1为Sigma-Aldrich公司产品；脱纤维羊血为上海闵行区诸翟无菌动物血试剂供应站产品；痤疮丙酸杆菌培养所需的厌氧产气袋、厌氧菌鉴定API 20A条均为法国生物梅里埃公司产品。

二、方法

1.细菌鉴定：用碘酊消毒患者脓疱处，用针头刺破皮肤表面，挤出脓液，以无菌棉拭子沾取脓血，同时接种厌氧和需氧血琼脂平板，37℃孵育48～72 h后观察菌落，分离纯化并连续3次耐氧试验（厌氧环境的气体条件为5%CO2、10%H2、85%N2）。分离细菌并经涂片、革兰染色镜检后，用API 20A厌氧菌鉴定条鉴定为痤疮丙酸杆菌后，置于40%甘油肉汤，-70℃冰箱菌种保存，留待药敏试验。

2.夫西地酸抗菌活性测定：按CLSI标准M11-A8，采用琼脂稀释法，测定夫西地酸等抗菌药物对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度（MIC），用直接菌落悬浮法制备0.5麦氏单位浊度的菌液，采用DENLEY A400多点接种仪将受试菌悬液接种于含不同抗菌药物浓度的琼脂上。痤疮丙酸杆菌的接种菌量为105CFU/点，抗菌药物的测试质量浓度为0.06～128 mg/L，37℃厌氧培养48 h后阅读结果。

3.结果分析和判断标准：获得的结果按CLSI2013 M100-S23标准［3］进行分析，其中夫西地酸采用EUCAST2010临界浓度标准［4］，数据分析采用WHONET 5.4软件。累积抑菌率（%）=抑菌菌数总和/总菌数×100%。

三、结果

1.痤疮丙酸杆菌的培养与鉴定：从66例痤疮患者皮损标本中共分离出50株痤疮丙酸杆菌，阳性检出率为75.8%。

2.夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的抗菌活性（表1）：夫西地酸对痤疮丙酸杆菌的MIC范围为0.25～2 mg/L，MIC50和MIC90值分别为0.5和1.0 mg/L。对夫西地酸的敏感率按EUCAST2010标准为90%，未发现耐药株。

表1 夫西地酸及其他抗菌药对50株痤疮丙酸杆菌的体外敏感率、耐药率

3.夫西地酸与其他抗菌药物对痤疮丙酸杆菌的抗菌活性比较（表1）：夫西地酸对50株痤疮丙酸杆菌的抑菌率约为90%，MIC90为1 mg/L，优于红霉素和克林霉素，并且明显优于甲硝唑。后三者的MIC90均≥128 mg/L，其中，红霉素的抑菌率为46%，克林霉素为54%；甲硝唑对痤疮丙酸杆菌无抑菌作用，耐药。莫西沙星对50株痤疮丙酸杆菌的抑菌率为90%。与β-内酰胺类相比，夫西地酸的抗菌作用略差于氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、头孢西丁及亚胺培南。后者的MIC90为≤0.06～0.5 mg/L，抑菌率为100%。夫西地酸与克林霉素和红霉素累积抑菌率比较发现，在药物质量浓度为128 mg/L时，克林霉素的累积抑菌率达到70%，红霉素只有48%，而夫西地酸在2 mg/L时的累积抑菌率已达到100%，明显优于前两者。

四、讨论

痤疮丙酸杆菌通过免疫和非免疫途径引起皮损局部炎症反应［5］。随着口服或外用抗生素在治疗痤疮中的广泛使用，痤疮丙酸杆菌对抗生素的敏感性逐渐降低［6］。在33例长期接受四环素治疗的痤疮患者中，四环素对痤疮丙酸杆菌的MIC是未接受抗生素治疗的痤疮患者或健康受试者的4～5倍，在长时间接受红霉素治疗的患者中红霉素的平均MIC是其他患者或健康受试者的100倍以上［7］。经过抗生素治疗的痤疮患者耐药菌携带率明显高于未接受治疗的患者，而且治疗无效或者病情复发者耐药菌的携带率高于治疗有效的患者，提示口服或外用抗生素均可诱导该菌产生耐药性，并且与治疗失败有关。Ross等［8］对欧洲多中心664例痤疮患者面部耐药性痤疮丙酸杆菌携带率及其表型的研究也发现，痤疮患者中耐药性痤疮丙酸杆菌的携带率均较高，而且对红霉素和林可霉素同时耐药的发生率高于四环素。我们的研究显示，受试痤疮丙酸杆菌对红霉素的耐药率为54%，对克林霉素的耐药率为34%，而对甲硝唑则全部耐药。

夫西地酸主要是通过干扰延长因子G（EF-G）抑制细菌核糖体的易位、阻碍细菌蛋白质的合成而产生杀菌作用，因其独特的作用机制，避免了与其他抗菌药物的交叉耐药性。临床使用40余年的经验表明，它能有效地治疗葡萄球菌所致的败血症、肺炎、心内膜炎、皮肤和软组织感染、骨与关节感染［9］。夫西地酸同时可以很好地治疗特应性皮炎继发的皮肤感染［10］。其通过抑制细菌的蛋白质合成而产生抗菌作用，对痤疮丙酸杆菌同样具有较好的抗菌活性。本研究结果显示，夫西地酸对2013年3-9月我院皮肤科门诊患者组织培养所得的痤疮丙酸杆菌仍保持较高的抗菌活性。该菌对夫西地酸的敏感率达到90%，未发现耐药株。相比较该菌对红霉素54%的耐药率和对克林霉素34%的耐药率，夫西地酸的抗菌活性明显优于这两者。虽然莫西沙星的抑菌率也达到90%，β-内酰胺类更是达到100%，但是对系统性感染目前主要或常用的抗生素我们都要尽量避免选择［11］。本研究中米诺环素和四环素同样有优越的抗菌活性，但两者都是系统使用抗生素，有潜在的各种不良反应。文献报道夫西地酸不仅能直接杀灭细菌，还可通过免疫调节起到抗炎作用［12］，能迅速消除细菌所致的细胞水肿、渗出、变性、坏死等炎症反应，并且由于夫西地酸抗菌谱窄，不易引起菌种耐药，组织、体液分布广，血浆半衰期长，患者耐受性好，已成为治疗痤疮丙酸杆菌的又一选择。

[1]Godtfredsen WO,Jahnsen S,Lorck H,et al.Fusidic acid；a new antibiotic[J].Nature,1962,193；987.

[2]Cesur S.Topical antibiotics and clinical use[J].Mikrobiyol Bul,2002,36（3-4）；353-361.

[3]White GM.Recent findings in the epidemiologic evidence,classification,and subtypes of acne vulgaris[J].J Am Acad Dermatol,1998,39（2 Pt 3）；S34-S37.

[4]Jugeau S,Tenaud I,Knol AC,et al.Induction of toll-like receptors byPropionibacterium acnes[J].Br J Dermatol,2005,153（6）；1105-1113.

[5]Webster GF,Leyden JJ,Norman ME,et al.Complement activation in acne vulgaris；in vitrostudies withPropionibacterium acnes and Propionibacterium granulosum[J].Infect Immun,1978,22（2）；523-529.

[6]Eady EA,Gloor M,Leyden JJ.Propionibacterium acnesresistance；a worldwide problem[J].Dermatology,2003,206（1）；54-56.

[7]Leyden JJ,McGinley KJ,Cavalieri S,et al.Propionibacterium acnesresistance to antibiotics in acne patients[J].J Am Acad Dermatol,1983,8（1）；41-45.

[8]Ross JI,Snelling AM,Carnegie E,et al.Antibiotic-resistant acne；lessons from Europe[J].Br J Dermatol,2003,148（3）；467-478.

[9]Schöfer H,Simonsen L.Fusidic acid in dermatology；an updated review[J].Eur J Dermatol,2010,20（1）；6-15.

[10]Wilkinson JD.Fusidic acid in dermatology[J].Br J Dermatol,1998,139 Suppl 53；37-40.

[11]Nast A,Dréno B,Bettoli V,et al.European evidence-based（S3）guidelines for the treatment of acne[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2012,26 Suppl 1；1-29.

[12]Verbist L.The antimicrobial activity of fusidic acid[J].J Antimicrob Chemother,1990,25 Suppl B；1-5.

2014-02-14）

（本文编辑：颜艳）

In vitroevaluation of antibacterial activity of fusidic acid againstPropionbacterium acnes

Ma Ying*,Liu Ye,Wang Qianqian,Wu Shi,Yang Yang,Huang Haihui,Xiang Leihong.*Department of Dermatology,Huashan Hospital,Fudan University,Shanghai 200040,China

s；Xiang Leihong,Email；flora-xiang@vip.163.com；Huang Haihui,Email；huanghaihui@fudan.edu.cn

ObjectiveTo evaluate thein vitroantibacterial activity of fusidic acid againstP.acnes.MethodsFifty strains ofP.acneswere clinically isolated from Huashan Hospital,Fudan University from March to September 2013.The minimum inhibitory concentrations （MICs） of several antibacterial agents including fusidic acid against theseP.acnesisolates were determined by using the agar dilution method according to the recommendations of Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI）.Data were analyzed using the WHONET 5.4 software.ResultsAmong the 50P.acnesisolates,90%were sensitive to fusidic acid,90%to moxifloxacin,54%to clindamycin,46%to erythromycin,but 100%were resistant to metronidazole.The minimum concentration required to inhibit the growth of 50%organisms（MIC50） and 90%organisms（MIC90） were 0.5 and 1.0 mg/L respectively for fusidic acid,whereas clindamycin and erythromycin both showed higher MIC90 values （＞ 128 mg/L）.At the concentration of 128 mg/L,clindamycin inhibited the growth of 70%of theP.acnesisolates,and erythromycin inhibited the growth of 48%of them,while the growth of all the isolates was inhibited by fusidic acid at 2 mg/L.ConclusionFusidic acid exhibits excellent antibacterial activity against clinical isolates ofP.acnes in vitro.

Propionibacterium acnes；Fusidic acid；Microbial sensitivity tests

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.011.018

国家科技部“国家科技重大新药创制”专项资助（2012ZX09303004-001）；2013年中西医结合（CAIM）-澳美中国痤疮研究基金

200040上海，复旦大学附属华山医院皮肤科（马英、刘晔、王倩倩、项蕾红），抗生素研究所（吴湜、黄海辉、杨洋）

项蕾红，Email：flora-xiang@vip.163.com；黄海辉，Email：huanghaihui@fudan.edu.cn