结肠腺癌患者癌组织MDM2、TBX2和Pokemon表达及相关性

崔 婷 魏 强 (中卫市人民医院消化内科，宁夏 中卫 755000)

结肠腺癌患者进展较快，且病变进展与基因和蛋白密切相关。TBX2基因是T-BOX基因基因家族成员之一，其编码蛋白TBX2是一个指导组织器官轴向发育的重要转录因子，TBX2在多种肿瘤中高表达〔1，2〕。MDM2是从一个含有双微体的自发转化的BALB/3T3细胞中克隆出来的一个高度扩增基因，学者认为其高度扩增与肿瘤性进程有关〔3，4〕。Pokemon是调节肿瘤进展的原癌基因，可促进多种蛋白异常释放〔5，6〕。本实验关注结肠腺癌患者癌组织TBX2、MDM2和Pokemon表达及相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 我院2010年1月至2013年11月行结肠癌根治手术患者119例术后均留取新鲜组织，置于-80℃冰箱中冻存。均符合世界卫生组织(WHO)2008版诊断标准，同时由病理医师再次确诊并分型。术前均未进行放疗和化疗。男60例，女59例，年龄52～76(平均67.7)岁。选取距肿瘤边缘＞5 cm的正常结肠黏膜新鲜组织78例为对照组，样本保存方法同上。男40例，女38例，年龄54～73(平均65.4)岁。两组一般临床特征无明显差别(P均＞0.05)。

1.2 流式细胞术检测TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达 实验用兔抗人TBX2、MDM2和Pokemon蛋白均由福建迈新公司代购。将冻存的新鲜标本取出后置于75%的酒精中存放24～48 h，用眼科剪子剪碎组织后过滤，制备1×106/ml的单细胞悬液，取1 ml，严格按实验步骤加入一抗及二抗后上机检测，应用美国BC公司生产的流式细胞仪及系统自带软件分析。

1.3 TBX2、MDM2和 Pokemon蛋白结果判读 TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达应用荧光指数(FI)。FI=(TBX2、MDM2或Pokemon蛋白表达的荧光强度)/对照样品的平均荧光强度。

1.4 统计学处理 应用SAS6.12统计软件进行t检验和线性相关分析。

2 结果

2.1 两组TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达量比较 两组TBX2、MDM2和Pokemon表达量差别显著(P＜0.000 1)。见表1。

表1 两组TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达量比较(s)

表1 两组TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达量比较(s)

TBX2 MDM2 Pokemon观察组分组 n 119 1.43±0.24 1.38±0.38 1.39±0.28对照组 78 1.00±0.25 1.00±0.29 1.00±0.21 t/P值8.75/＜0.000 1 7.68/＜0.000 1 7.99/＜0.000 1

2.2 观察组不同临床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达比较 观察组TBX2、MDM2和Pokemon表达与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期和 Ki67表达密切相关(P均 ＜ 0.05)。见表2。

表2 观察组中不同临床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达的比较(s)

表2 观察组中不同临床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表达的比较(s)

临床病理特征 n TBX2 χ2值 P值 MDM2 χ2值 P值 Pokemon t值 P值分化程度 高 55 1.28±0.32 6.43 0.008 2 1.23±0.32 7.64 0.0043 1.32±0.16 7.54 0.006 7中+低 64 1.54±0.25 1.48±0.31 1.46±0.41浸润深度 未及浆膜 70 1.35±0.42 6.92 0.007 6 1.28±0.35 6.75 0.009 2 1.33±0.43 6.42 0.008 5浆膜及以外 49 1.60±0.32 1.49±0.25 1.48±0.26临床分期 Ⅰ+Ⅱ 69 1.37±0.20 6.12 0.010 2 1.30±0.39 6.57 0.007 2 1.31±0.29 6.11 0.011 0Ⅲ+Ⅳ 50 1.54±0.25 1.50±0.28 1.50±0.34 Ki67表达 ＜25% 67 1.32±0.14 7.21 0.005 7 1.32±0.32 5.65 0.017 2 1.32±0.29 5.23 0.013 1≥25% 52 1.55±0.43 1.45±0.37 1.45±0.36

2.3 观察组TBX2、MDM2和Pokemon表达相关性 观察组TBX2和MDM2(r=0.49，P=0.014 3)表达正相关;而TBX2和Pokemon、MDM2和Pokemon表达无明显相关性(P＞0.05)。

3 讨论

结肠腺癌发病及进展中的癌基因促癌进展机制、浸润性生长的过程和肿瘤细胞的异常增殖均是近年研究的热点〔7〕。由此引发学者关注多种蛋白的结构及其在肿瘤中调节的功能〔8〕。TBX2定位于17q23染色体，其编码的蛋白TBX2主要通过其C末端的转录抑制结构域发挥转录抑制作用〔9〕，也有学者认为TBX2是一个具有指导胚胎、组织器官轴向发育的重要转录因子〔10〕。TBX2的作用还有:①与 RAS、MYC等相关基因协同作用，引起细胞癌变〔11〕;②TBX2可以抑制细胞衰老和凋亡进程，使细胞停滞在G/S和Q/M期，此时当TBX2的异常表达累积后，引起细胞突破临界值，进而引起细胞的恶性转化〔12〕;③TBX2通过抑制P21基因的表达抑制细胞凋亡，此种作用主要是与 TBX2参与 p21WAF1/CIP1突变的致瘤作用相关〔13〕。MDM2是P53的重要负性调节因子，通过P53途径、非P53依赖途径等多种方式调节细胞的增殖和凋亡进展。有学者认为MDM2在多种肿瘤中高表达，并认为其不仅促进肿瘤浸润和转移，还可以对判断肿瘤的预后有一定作用〔14，15〕。Pokemon是由ZBTB7编码的基因，具有2个外显子和2个内含子。Pokemon氨基末端的BTB/POZ结构域被广泛发现存在于人体细胞和组织中〔16，17〕，Pokemon家族羧基末端的锌指结构可以调节特定DNA的识别和结合，其作用机制是以染色质重构实现的〔18，19〕。

本实验提示TBX2、MDM2和Pokemon可能对肿瘤的发生过程和癌变过程起重要促进作用，Pokemon是经典的原癌基因，而TBX2和MDM2在结肠腺癌中的作用与癌基因类似，其调节过程中也可能具有相关级联反应的相关蛋白被激活。TBX2、MDM2和Pokemon参与腺癌的分化过程，分化是肿瘤恶变和肿瘤形成中内在基因变化的镜下特征，因此三种蛋白对肿瘤的成熟过程有重要影响。3种蛋白与肿瘤的侵袭性生长密切相关，结肠癌的浸润生长过程中受到多种蛋白的调节，尤其是其在向肌层生长过程中，当TBX2、MDM2和Pokemon高表达，对肌层的破坏越强，肿瘤生长越快，肿瘤危险性明显增加，分期越高。TBX2、MDM2和Pokemon的表达与临床分期密切相关，由于临床分期是判断肿瘤生物学行为和预后的重要指标，因此三者蛋白高表达可能提示肿瘤患者预后较差。TBX2、MDM2和Pokemon蛋白作用过程中均对肿瘤异常增殖起明显作用，也提示蛋白的异常表达使肿瘤细胞的增殖是失控状态的。TBX2和MDM2在肿瘤进展中起协同作用。二者的联系可能与内在结构有相似位点相关，也可能是通过对增殖的影响联系在一起的。研究认为TBX2和MDM2在增殖活性过程中可能对细胞分裂有明显增效作用〔20〕。此机制在结肠腺癌细胞增殖和分化过程中表现明显。当TBX2和MDM2有效的活化后，能有效抑制细胞凋亡，促进细胞分化和细胞增殖进程，最终引起结肠腺癌细胞的异常增生并形成肿瘤，同时加速肿瘤侵袭和进展〔21〕。本实验未发现Pokemon与其他两种蛋白的协同作用，因此Pokemon的促癌机制是另有通路的〔22〕，其调节过程也有待更多实验证实。

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