树突状细胞自体回输联合TA方案化疗治疗乳腺癌22例临床观察

徐 彬，马俊杰，2，王小龙，李智强，周 雷，徐增柏

(1沭阳县中医院，江苏沐阳223600;2南京中医药大学基础医学院)

化疗是目前晚期或复发乳腺癌患者主要的治疗手段，但仍有40%的患者死于肿瘤复发和转移［1］。近年来随着免疫学的发展及深入研究，生物治疗取得了较大进展，以树突状细胞(DC)为基础构建的乳腺癌治疗疫苗成为研究热点［2］。但如何将DC疫苗特异性免疫治疗与放、化疗联合，发挥综合治疗优势，尚需进一步探索。近2年来，我们采用DC自体回输联合TA方案化疗治疗晚期乳腺癌患者22例，取得较好效果。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 44例晚期乳腺癌患者，年龄33～75岁，平均45岁;病程3～21个月。均经病理及影像学检查确诊。排除合并有心脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病;并发其他恶性肿瘤;有精神或心理疾病不能配合治疗及疗效评估者;妊娠、哺乳期妇女及过敏体质患者。按照《中国常见恶性肿瘤诊疗规范》［3］中的诊断标准，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期，存活期预计＞3个月，体力状况(KPS)评分＞60分。血常规、肝肾功能、心电图等检查正常。曾先后行3～6个周期化疗，化疗方案为CAF或CEF;已停止化疗1～3个月。将患者随机分为观察组和对照组各22例。

1.2 治疗方法 对照组给予TA方案化疗，第1～3天口服地塞米松片4.5 mg，2次/d。第2天静滴多西紫杉醇(应用前先予西咪替丁、非那根，预防其可能引起的胃肠道及过敏反应)75 mg/m2。第3天静脉推注表柔比星50 mg/m2。同步予护胃、镇吐、补液等常规对症治疗。21 d为1个疗程。观察组在上述治疗基础上给予DC，疗程与化疗同步。具体操作方法:采集患者外周血50 mL，分离外周血单核细胞(PBMC)加粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GMGSF)、IL-4及培养液培养，采用同源异体的肿瘤细胞株裂解物作为肿瘤相关抗原(TAA)进行抗原冲击，培养7 d后成为致敏的成熟DC，取少量培养成熟的DC进行细菌和真菌培养，结果为阴性时收集细胞。观察组在采血后第2天进行TA方案化疗，用法、用量同对照组。化疗第8、15、21、28天进行DC回输，每次回输DC数量为(1.0～3.0)×107个，选择腋下或腹股沟皮下注射。

1.3 血清IL-2和TNF-α检测方法 采集治疗第1天及治疗后第29天清晨空腹静脉血3 mL，待血块收缩后，以4 000 r/min离心10 min，置-75℃冰箱保存。采用双抗夹心ELISA法测定血清中IL-2和TNF-α。试剂盒购于北京四正柏生物科技有限公司。按说明书操作，并进行质量控制。酶标仪(瑞士帝肯公司Rainbow型)由专人操作，自动打印结果。

1.4 疗效评价方法 ①近期疗效。按WHO实体瘤标准判定，肿瘤完全消失并维持4周以上，无新病灶出现为完全缓解(CR);肿瘤体积减小50%以上，并维持4周以上，无新病灶出现为部分缓解(PR);肿瘤体积增大25%以下或缩小25%以下，并维持4周以上，无新病灶出现为稳定(SD);肿瘤体积增大25%以上或有新病灶出现为进展(PD)。②生活质量。采用KPS评分方法对生活质量进行评价。③不良反应。按WHO抗癌药物急性亚急性毒性反应分度标准分为0～Ⅳ度。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量资料以±s表示，两组比较采用t检验;计数资料比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组CR 6例，PR 10例，SD 4例，PD 2例，有效率为72.7%，对照组分别为 3、6、9、4 例，40.9%，两组有效率比较，P＜0.05。两组治疗前后血清IL-2和TNF-α水平及KPS评分比较见表1。两组患者在治疗过程中出现的毒性反应主要是骨髓抑制、恶心、呕吐、末梢神经毒性等。观察组骨髓抑制反应如白细胞、血小板的下降程度较对照组轻;恶心、呕吐、乏力的发生率低于对照组(P＜0.05)。末梢神经毒性不良反应未见明显差异，均为Ⅰ～Ⅱ度，于治疗结束后逐渐恢复。观察组患者行DC治疗时主要的不良反应为发热(5例，约22.7%)、关节疼痛(2例，约9%)，均为Ⅲ度以下，予消炎痛类药物对症处理后改善。未发现过敏反应，无治疗相关性死亡发生。

表1 两组治疗前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 评分比较(±s)

表1 两组治疗前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 评分比较(±s)

注:与同组治疗前比较，*P＜0.01;与对照组治疗后比较，▲P＜0.01

组别 KPS 评分(分) IL-2(μg/L) TNF-α(μg/L)63.00 ±11.74 8.04 ±2.24 3.85 ±1.53观察组治疗前 72.05 ± 9.03 8.33 ±1.66 4.40 ±1.47治疗后 74.75 ±14.46＊▲ 12.49 ±1.71＊▲ 6.62 ±2.81＊▲对照组治疗前 73.42 ± 9.45 8.81 ±3.93 4.37 ±1.49治疗后

3 讨论

乳腺癌是危及女性健康的主要疾病之一，发病率及病死率随年龄的升高而上升。目前研究［4］发现，肿瘤的发生、发展及复发与机体的免疫功能下降密切相关，大部分肿瘤患者机体长期处于免疫力低下状态。

DC作为专职抗原呈递细胞，因其抗原呈递功能及免疫佐剂作用，可诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫，越来越引起国内外学者的重视［5］。研究［6］表明，DC是已知体内功能最强的专职抗原呈递细胞，最大特点是能刺激初始型T细胞活化和增殖，是特异性免疫应答的始动者。DC还能诱导机体的体液免疫，激活 NK、NK-T细胞，参与非特异性免疫［7］。马腾等［8］用热休克法制备的DC肿瘤疫苗治疗乳腺癌疗效满意，且能增强机体的抗肿瘤免疫反应。TA方案是治疗乳腺癌常用的化疗方案，疗效肯定，耐受性好［9］，然而目前国内外尚缺乏DC联合该方案治疗乳腺癌的临床随机对照研究报道。本研究结果发现，观察组治疗有效率及生活质量改善程度明显优于对照组，而不良反应尤其是骨髓抑制情况却显著低于对照组，此可能与DC能减轻化疗对机体造成的短暂免疫抑制状态有关［10］。

IL-2又称T细胞生长因子，可促进T淋巴细胞的增殖反应;增强T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖反应及自然杀伤细胞与单核细胞的吞噬作用，在机体抗肿瘤、抗感染中具有重要作用。TNF-α参与机体的免疫调节，在肿瘤发生、发展中具有双向作用［11］。TNF-α能增强宿主免疫力，激活 NK细胞、LAK细胞，对肿瘤细胞产生杀伤作用;高水平TNF-α能促进肿瘤血管生成，使氧化应激反应增强，导致肿瘤细胞增殖及分化。本研究中，对照组血清 IL-2和TNF-α水平较治疗前下降，说明化疗降低了机体的免疫功能。而观察组患者免疫功能明显较治疗前改善。

近年来，随着DC在肿瘤治疗中的广泛应用，其临床应用时出现的不良反应日益受到重视。其引起的不良反应类似于化疗药物，可见发热恶寒、乏力、流感样症状，注射部位红肿、酸痛、瘙痒等［12］;胃肠道反应主要是恶心、呕吐，食欲下降［13］。严重影响患者的生活质量，干扰进一步治疗计划。而在这些常见不良反应中尤以发热最常见，是决定DC治疗成败的重要因素［14］。本研究观察组行DC回输时，常见的不良反应有发热、关节疼痛，均为Ⅲ度以下，予消炎痛类药物对症处理后改善。未发现严重的不良发应，与国外报道［15］一致。据报道，此类发热为非细菌性炎症引起，主要与抗原抗体复合物引起的免疫性炎症密切相关［16］。我们认为回输的DC虽然由患者自体的外周血培养而来，但培养过程中的坏死组织残留，抗原残余的影响需要考虑。综上所述，DC自体回输联合TA方案化疗治疗乳腺癌效果较好，可改善患者免疫功能，提高生活质量，减轻化疗的不良反应。

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