丹酚酸B热稳定性研究

晋迎申

摘 要 目的：考查不同因素对丹酚酸B溶液稳定性的影响，为工业化生产应用提供实验依据。方法：通过HPLC检测溶液中丹酚酸B的含量变化。结果：温度和加热时间对丹酚酸B的稳定性有较大的影响，乙醇溶液比水溶液更有利于丹酚酸B的稳定。结论：生产过程中应将浓缩温度控制在60 ℃以下，时间在4 h以内，且溶液中丹酚酸B浓度高有利于稳定。

关键词 丹参 丹酚酸B 稳定性

中图分类号：R284.2； TQ461 文献标识码：B 文章编号：1006-1533（2014）21-0078-03

Study on the thermal stability of salvianolic acid B

JIN Yingshen

（Shanghai Green-Valley Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To examine the influence of different factors on the stability of salvianolic acid B and to provide an experimental basis for their application in industrial production. Methods： Changes in the content of salvianolic acid B were determined by HPLC. Results： There was a significant effect of temperature and heating time on the stability of salvianolic acid B and salvianolic acid B was more stable in alcohol solution than in water. Conclusion： The temperature for the concentration of salvianolic acid B should be controlled below 60 ℃ and time within 4 hours，and higher concentrations of salvianolic acid B in the alcohol solution are of benefit to its stablity in the production process.

KEY WORDS salvia； salvianolic acid； stability

丹参来源于唇形科多年生草本植物丹参的干燥根及根茎，是我国传统中药之一。丹酚酸（salvianolic acids）是丹参药效成分中水溶性的酚酸类成分，具有较强的抗脂质过氧化和清除自由基作用，丹酚酸A和丹酚酸B是其中含量最高、活性最强的2个成分，抗心肌缺血与缺氧的活性比丹参素和原儿茶醛都强，近年来的研究表明，丹酚酸具有保护心肌细胞、抗动脉粥样硬化、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用[1-3]。丹酚酸不稳定，在水溶液中易降解，对温度很敏感，在高温、高压下很容易降解为丹参素等物质[4-6]。

丹参多酚酸盐是我公司的主要产品之一，是从丹参中提取的1组酚酸盐类成分，其中丹酚酸B的含量高达80%以上，丹酚酸类成分达100%，为了稳定产品质量和得率，我们对产品生产的工艺进行了研究，掌握了影响丹酚酸B稳定性的因素及关键工艺参数和操作方法，报道如下。

仪器、试剂与材料

Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent紫外检测器，色谱柱Zorbax C18（4.6 mm×25 cm，5 μm）；METTLE AG135电子天平；HH-S11-2-S电热恒温水浴锅。

丹参药材来自山东库山；丹参提取液来自公司生产车间。

乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析纯。

丹参素钠（中国药品生物制品检定所110855-200508，纯度>98%）；咖啡酸（中国药品生物制品检定所111562-200605，纯度>98%）、丹酚酸B（中国药品生物制品检定所110885-200102，纯度>98%）。

丹酚酸B的分析方法

高效液相色谱条件与系统适用性试验用色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）为流动相；流速1 ml/min，检测波长286 nm；进样体积10 μl；理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。

丹酚酸B对照品溶液的配制：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加入体积分数75%的甲醇溶液，制成质量浓度为0.14 mg/ml的丹酚酸B对照品溶液。

实验方法

丹酚酸B不稳定，易受温度、加热时间、光照、溶液pH、溶液性质、添加剂等因素影响而产生降解。在工业化生产过程中，温度和受热时间是必须考虑的可控因素；选用全封闭的管道化生产可以不考虑光照对其的影响；调节溶液的pH及添加剂，不利于药品品质的控制和GMP管理。因此，在生产过程中主要对温度、时间、浓度等因素进行考察。

温度和时间对乙醇溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份浓度为10%的丹酚酸B乙醇溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴摇床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在不同温度下丹酚酸B的变化曲线图。判断短时间恒定温度加热对丹酚酸B含量的影响情况，分析温度对丹酚酸B乙醇溶液稳定性的影响。

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份浓度为10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴摇床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在不同温度下丹酚酸B的变化曲线图。判断短时间恒定温度加热对丹酚酸B含量的影响情况，分析温度对丹酚酸B水溶液稳定性的影响。

溶液中丹酚酸B浓度对丹酚酸B含量的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入60 ℃的水浴摇床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在相同温度下不同丹酚酸B浓度的变化曲线图。分析浓度对丹酚酸B稳定性的影响。

结果

温度和时间对乙醇溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B乙醇溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同时间下丹酚酸B的含量，结果如图1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40℃下加热5 h，丹酚酸B含量几乎没有下降，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到温度升高有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，所以选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B水溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B的含量，结果如图2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的94.35%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40 ℃下加热5 h，丹酚酸B含量下降很小，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到较高温度有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，对于丹酚酸水溶液的浓缩，选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

同时，对比图1和图2可以看出，在较高的温度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加热3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的温度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在较低温度下，丹酚酸B在醇溶液中的稳定性较好。

不同浓度和时间对水溶液中丹酚酸B稳定性的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B含量的变化（图3）。。

低、中、高浓度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度为低浓度>中浓度>高浓度，提示水溶液中高浓度的丹酚酸B稳定性较好。考虑到工业生产中损耗和设备等因素，浓度升高损耗也会相应增加，因此在设备条件允许的情况下，保持丹酚酸B高浓度比较适宜。

讨论

不论是水溶液体系或醇溶液体系，温度和加热时间对丹酚酸B的稳定性都有显著性影响，丹酚酸B在高温下降解迅速，低温下降解缓慢，工艺选择在60 ℃真空状态下加热，在降低丹酚酸B降解速度的同时，也加快了溶剂的挥发，缩短浓缩时间。

醇溶液体系与水溶液体系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的稳定，故对于醇溶液可适当提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的浓度对丹酚酸B的稳定性也有较大影响，高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

根据稳定性实验结果，高温和长时间加热不利于丹酚酸B的稳定，在浓缩工艺中应控制温度在60 ℃以下，加热时间控制在4 h以内。醇溶液体系和高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

在丹酚酸B生产过程中，工艺参数较为复杂，特别是生产过程中人为控制因素较多。在工业化生产过程中应积累数据，将关键指标量化，变人为控制为自动化控制，变主观判断为客观指标，使生产过程智能化，从而降低人为差错，提高控制的精确度，减少环境因素的影响。丹酚酸产品中丹酚酸B的含量达80%以上，丹酚酸类成分的含量达100%，但是，质量标准中并没有明确产品中的其他丹酚酸类成分及其含量，对杂质成分也没有明确，为了保证产品质量，有必要对其进行进一步考察，从而进行控制，保证产品有效成分的稳定、均一。

参考文献

杜冠华， 张均田. 丹参水溶性有效成分丹酚酸研究进展[J]. 基础医学与临床， 2000， 20（5）： 394-398.

李朝霞， 王地. 丹参水溶性成分的研究进展[J]. 北京中医， 2004， 23（3）： 176-178.

黄诒森， 张均田. 丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用[J]. 药学学报， 1992， 27（2）： 96-100.

倪力军， 邬科芳， 张立国. 加热方式对丹酚酸提取物质量的影响[J]. 中药新药与临床药理， 2006， 17（1）： 55-57.

张军， 王凤云， 詹丽玲， 等. 丹参药材提取液中丹酚酸B稳定性影响因素的考察[J]. 中国中药杂志， 2005， 30（10）： 789-790.

岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹参酚酸B在水溶液中的稳定性研究[J]. 中草药， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份浓度为10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴摇床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在不同温度下丹酚酸B的变化曲线图。判断短时间恒定温度加热对丹酚酸B含量的影响情况，分析温度对丹酚酸B水溶液稳定性的影响。

溶液中丹酚酸B浓度对丹酚酸B含量的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入60 ℃的水浴摇床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在相同温度下不同丹酚酸B浓度的变化曲线图。分析浓度对丹酚酸B稳定性的影响。

结果

温度和时间对乙醇溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B乙醇溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同时间下丹酚酸B的含量，结果如图1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40℃下加热5 h，丹酚酸B含量几乎没有下降，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到温度升高有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，所以选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B水溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B的含量，结果如图2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的94.35%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40 ℃下加热5 h，丹酚酸B含量下降很小，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到较高温度有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，对于丹酚酸水溶液的浓缩，选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

同时，对比图1和图2可以看出，在较高的温度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加热3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的温度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在较低温度下，丹酚酸B在醇溶液中的稳定性较好。

不同浓度和时间对水溶液中丹酚酸B稳定性的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B含量的变化（图3）。。

低、中、高浓度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度为低浓度>中浓度>高浓度，提示水溶液中高浓度的丹酚酸B稳定性较好。考虑到工业生产中损耗和设备等因素，浓度升高损耗也会相应增加，因此在设备条件允许的情况下，保持丹酚酸B高浓度比较适宜。

讨论

不论是水溶液体系或醇溶液体系，温度和加热时间对丹酚酸B的稳定性都有显著性影响，丹酚酸B在高温下降解迅速，低温下降解缓慢，工艺选择在60 ℃真空状态下加热，在降低丹酚酸B降解速度的同时，也加快了溶剂的挥发，缩短浓缩时间。

醇溶液体系与水溶液体系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的稳定，故对于醇溶液可适当提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的浓度对丹酚酸B的稳定性也有较大影响，高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

根据稳定性实验结果，高温和长时间加热不利于丹酚酸B的稳定，在浓缩工艺中应控制温度在60 ℃以下，加热时间控制在4 h以内。醇溶液体系和高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

在丹酚酸B生产过程中，工艺参数较为复杂，特别是生产过程中人为控制因素较多。在工业化生产过程中应积累数据，将关键指标量化，变人为控制为自动化控制，变主观判断为客观指标，使生产过程智能化，从而降低人为差错，提高控制的精确度，减少环境因素的影响。丹酚酸产品中丹酚酸B的含量达80%以上，丹酚酸类成分的含量达100%，但是，质量标准中并没有明确产品中的其他丹酚酸类成分及其含量，对杂质成分也没有明确，为了保证产品质量，有必要对其进行进一步考察，从而进行控制，保证产品有效成分的稳定、均一。

参考文献

杜冠华， 张均田. 丹参水溶性有效成分丹酚酸研究进展[J]. 基础医学与临床， 2000， 20（5）： 394-398.

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黄诒森， 张均田. 丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用[J]. 药学学报， 1992， 27（2）： 96-100.

倪力军， 邬科芳， 张立国. 加热方式对丹酚酸提取物质量的影响[J]. 中药新药与临床药理， 2006， 17（1）： 55-57.

张军， 王凤云， 詹丽玲， 等. 丹参药材提取液中丹酚酸B稳定性影响因素的考察[J]. 中国中药杂志， 2005， 30（10）： 789-790.

岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹参酚酸B在水溶液中的稳定性研究[J]. 中草药， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份浓度为10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴摇床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在不同温度下丹酚酸B的变化曲线图。判断短时间恒定温度加热对丹酚酸B含量的影响情况，分析温度对丹酚酸B水溶液稳定性的影响。

溶液中丹酚酸B浓度对丹酚酸B含量的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液100 ml置于锥形瓶中，分别放入60 ℃的水浴摇床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取样，测定丹酚酸B的含量。以含量为纵坐标，时间为横坐标，绘制在相同温度下不同丹酚酸B浓度的变化曲线图。分析浓度对丹酚酸B稳定性的影响。

结果

温度和时间对乙醇溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B乙醇溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同时间下丹酚酸B的含量，结果如图1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40℃下加热5 h，丹酚酸B含量几乎没有下降，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到温度升高有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，所以选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

温度和时间对水溶液中丹酚酸B含量的影响

将3份丹酚酸B水溶液分别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B的含量，结果如图2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降较快，加热3 h后，丹酚酸B的含量为初始含量的94.35%，高温对丹酚酸B的降解影响较大；在60 ℃下加热4 h，丹酚酸B含量略有下降，温度在60 ℃下对丹酚酸B的降解影响很小；而在40 ℃下加热5 h，丹酚酸B含量下降很小，说明低温对丹酚酸B的降解影响甚微。考虑到较高温度有利于溶剂的蒸发，加快浓缩进程，对于丹酚酸水溶液的浓缩，选择60 ℃为蒸发温度较为适宜。

同时，对比图1和图2可以看出，在较高的温度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加热3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量为初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的温度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在较低温度下，丹酚酸B在醇溶液中的稳定性较好。

不同浓度和时间对水溶液中丹酚酸B稳定性的影响

将3份浓度分别为2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B浓度的水溶液别放入不同温度水浴中，测定不同间隔时间下丹酚酸B含量的变化（图3）。。

低、中、高浓度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度为低浓度>中浓度>高浓度，提示水溶液中高浓度的丹酚酸B稳定性较好。考虑到工业生产中损耗和设备等因素，浓度升高损耗也会相应增加，因此在设备条件允许的情况下，保持丹酚酸B高浓度比较适宜。

讨论

不论是水溶液体系或醇溶液体系，温度和加热时间对丹酚酸B的稳定性都有显著性影响，丹酚酸B在高温下降解迅速，低温下降解缓慢，工艺选择在60 ℃真空状态下加热，在降低丹酚酸B降解速度的同时，也加快了溶剂的挥发，缩短浓缩时间。

醇溶液体系与水溶液体系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的稳定，故对于醇溶液可适当提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的浓度对丹酚酸B的稳定性也有较大影响，高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

根据稳定性实验结果，高温和长时间加热不利于丹酚酸B的稳定，在浓缩工艺中应控制温度在60 ℃以下，加热时间控制在4 h以内。醇溶液体系和高浓度有利于丹酚酸B的稳定。

在丹酚酸B生产过程中，工艺参数较为复杂，特别是生产过程中人为控制因素较多。在工业化生产过程中应积累数据，将关键指标量化，变人为控制为自动化控制，变主观判断为客观指标，使生产过程智能化，从而降低人为差错，提高控制的精确度，减少环境因素的影响。丹酚酸产品中丹酚酸B的含量达80%以上，丹酚酸类成分的含量达100%，但是，质量标准中并没有明确产品中的其他丹酚酸类成分及其含量，对杂质成分也没有明确，为了保证产品质量，有必要对其进行进一步考察，从而进行控制，保证产品有效成分的稳定、均一。

参考文献

杜冠华， 张均田. 丹参水溶性有效成分丹酚酸研究进展[J]. 基础医学与临床， 2000， 20（5）： 394-398.

李朝霞， 王地. 丹参水溶性成分的研究进展[J]. 北京中医， 2004， 23（3）： 176-178.

黄诒森， 张均田. 丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用[J]. 药学学报， 1992， 27（2）： 96-100.

倪力军， 邬科芳， 张立国. 加热方式对丹酚酸提取物质量的影响[J]. 中药新药与临床药理， 2006， 17（1）： 55-57.

张军， 王凤云， 詹丽玲， 等. 丹参药材提取液中丹酚酸B稳定性影响因素的考察[J]. 中国中药杂志， 2005， 30（10）： 789-790.

岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹参酚酸B在水溶液中的稳定性研究[J]. 中草药， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）