羊脆木树皮的化学成分研究（Ⅰ）＊

2014-11-23吴云飞罗蕾李祖强潘明俊吴焕马国义

云南师范大学学报（自然科学版） 2014年4期

吴云飞，罗蕾，李祖强，潘明俊，吴焕，马国义

（1.云南师范大学化学化工学院，云南昆明650092；2.云南大学化学科学与工程学院，云南昆明650092；3.密西西比大学药学系，美国）

羊脆木（PittosporumkerriiCraib）为海桐花科（Pittosporaceae）海桐花属（pittosporumBank）植物，该属植物约150种，本属一些种的根及果实常供药用，根皮治毒蛇咬伤，有镇痛、消炎等作用.羊脆木根皮及树皮可入药，具有疏风、解表、止疟功效［1］.本研究小组已对羊脆木枝叶的化学成分作过报道［2］，本文则对其树皮化学成分及细胞毒活性进行研究.

对羊脆木树皮的氯仿和甲醇部位进行化学成分分离纯化，得到7个单体，通过波谱分析，分别鉴定为：β－stigmsterol（1）、β－stigmasterol－3－O－β－D－glucopyranoside（2）、ethyl caffeate（3）、2，6－dimethoxy－1，4－benzoquinone（4）、3－hydroxy－4－methoxybenzoic acid（5）、syringaresinol－4，4′－di－O－β－D－glucoside（6）、3，4，5－trimethoxyphenol－1－O－β－D－glucopyranoside（7），化合物1－7的结构见图1.其中化合物4、5为首次从该属中分离得到.细胞毒试验表明氯仿提取物以及从其中分离出来的化合物3、4具有明显的细胞毒活性，对K562细胞的IC50分别为3.7、4.0、3.0μg／mL.

1 实验部分

1.1 仪器和材料

熔点用北京泰克仪器有限公司XT－4型显微熔点测定仪测定，温度未校正.NMR用Bruker公司 Avance 500型核磁共振仪测定，TMS为内标.MS用Waters公司Xevo TQ－S质谱仪测定.Agilent 1200制备型高效液相色谱仪，Eclipse XDB－C18（9.4×250mm，5μm）（美国安捷伦公司）.柱层析用粗硅胶（37～75μm），为青岛海洋化工厂产品；细硅胶（40～60μm）及TLC硅胶片（F254）为Merck公司产品.羊脆木树皮采自云南省石屏县，由云南大学胡志浩教授鉴定，植物拉丁学名为PittosporumkerriiCraib.

1.2 分离提取

取20kg干燥的羊脆木树皮用95%乙醇冷浸30d，减压浓缩提取液，得粗提物浸膏Y0（1 200g），对浸膏进行处理后，加入填充剂，再分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等溶剂依次萃取，得组分 Y1（80g）、Y2（70g）、Y3（80g）、Y4（150g）、Y5（330g）.其中氯仿组分经过反复硅胶柱层析及多次重结晶的方法，分离、纯化、鉴定了5个单体（化合物1－5）.甲醇组分通过半制备高压液相色谱分离得到2个单体（化合物6、7）.

1.3 细胞毒性试验

分别称取10～15mg的 Y0、Y1、Y2、Y3、Y4、Y5及化合物（1－7）12个样品，用二甲亚砜溶解配成0、1、10、100μg／mL等4种浓度，置于培养瓶中，分别加入含有等同数目K562（人白血病）细胞的RPMI1640培养基（10%小牛血清），保存在5%CO2的37℃的恒温箱内.分别在12、24、48、72小时观察细胞生长情况，最后用染料排斥试验法计算对K562细胞生长抑制率.体外试验由美国密西西比大学药学系药理实验室负责人马国义合作完成.

2 结果与讨论

2.1 细胞毒活性

羊脆木树皮的粗提物（Y0）及其分步提取组分（Y1、Y2、Y3、Y4、Y5）对 K562细胞的IC50分别为6.6、23.0、3.7、6.2、40.0、50.0μg／mL，化合物（1－7）对 K562细胞的IC50分别为30.0、40.0、4.0、3.0、35.0和20.0μg／mL.结果表明，氯仿及乙酸乙酯提取组分及化合物3、4有明显的细胞毒活性.

2.2 结构鉴定

化合物1，白色针晶（石油醚－乙酸乙酯），m.p.145～146℃.分子式：C29H48O.ESI－MS（m／z）：413［M ＋ H］＋.1H－NMR（500MHz，CDCl3）δ：5.38（1H，d，J＝4.7Hz，H－6），5.19（1H，dd，J＝15.1，8.7Hz，H－22），5.04（1H，dd，J＝15.1，8.6Hz，H－23），3.56（1H，m，H－3），1.06（3H，d，J＝6.6Hz），1.04（3H，s），0.89（6H，d，J＝6.4Hz），0.83（3H，d，J＝6.4Hz），0.74（3H，s）；13C－NMR（125MHz，CDCl3）δ：37.3（t ，C－1），31.7（t，C－2），71.8（d，C－3），42.3（t，C－4），140.8（s，C－5），121.7（d，C－6），31.9（t，C－7），31.8（d，C－8），50.2（d，C－9），36.5（s，C－10），21.1（t，C－11），39.7（t，C－12），42.2（s，C－13），56.9（d，C－14），24.4（t，C－15），28.9（t，C－16），56.0（d，C－17），12.2（q，C－18），19.4（q，C－19），40.5（d，C－20），21.2（q，C－21），138.3（t，C－22），129.3（t，C－23），51.3（d，C－24），31.9（d，C－25），19.0（q，C－26），21.1（q，C－27），25.4（t，C－28），12.1（q，C－29）.以上数据与文献［2］对照，鉴定为β－stigmsterol.

化合物2，白色粉末（氯仿－甲醇），m.p.275～277℃.分子式：C35H58O6.ESI－MS（m／z）：573

［M－H］－

.1H－NMR（500MHz，C5D5N）δ：5.33（1H，d，J＝4.7Hz，H－6），5.18（1H，d，J＝15.1，8.7Hz，H－22），5.06（1H，dd，J＝15.1，8.6Hz H－23），5.03（1H，d，J＝7.8Hz，H－1′of Glc），4.57（1H，dd，J＝12.0，1.5Hz，Ha－6′），4.42（1H，dd，J＝12.0，5.6Hz，Hb－6′），4.31（2H，m，H－3′，4′），4.07（1H，t，J＝7.8Hz，H－2′），3.98（1H，m，H－5′），3.98（1H，m，H－3），1.05（3H，d，J＝7.0Hz），0.92（3H，s），0.90（3H，d，J＝6.5Hz），0.87（3H，t，J＝7.0Hz），0.84（3H，d，J＝6.5Hz），0.65（3H，s）；13C－NMR（125MHz，C5D5N）δ：37.3（t，C－1），30.1（t，C－2），78.4（d，C－3），39.1（t，C－4），140.7（s，C－5），121.7（d，C－6），32.0（t，C－7），31.8（d，C－8），50.1（d，C－9），36.7（s，C－10），21.1（t，C－11），39.6（t，C－12），42.1（s，C－13），56.7（d，C－14），24.3（t，C－15），29.1（t，C－16），55.9（d，C－17），11.9（q，C－18），19.2（q，C－19），40.6（d，C－20），21.1（q，C－21），138.6（t，C－22），129.2（t，C－23），51.2（d，C－24），32.0（d，C－25），19.0（q，C－26），21.3（q，C－27），25.5（t，C－28），12.3（q，C－29），102.4（d，C－1′），75.1（d，C－2′），78.3（d，C－3′），71.5（d，C－4′），77.9（d，C－5′），62.6（t，C－6′）.上述数据与文献［2］对照，鉴定为β－stigmasterol－3－O－β－D－glucopyranoside.

化合物3，白色针晶（石油醚－乙酸乙酯），分子式：C11H12O4.ESI－MS（m／z）：209［M＋H］＋，231 ［M＋Na］＋，439［2M＋Na］＋.m.p.145～147℃.1H－NMR（500MHz，（CD3）2CO）δ：7.55（1H，d，J＝16.0Hz，H－3），7.18（1H，d，J＝2.0Hz，H－5），7.06（1H，dd，J＝8.2，2.0Hz，H－9），6.89（1H，d，J＝8.2Hz，H－8），6.30（1H，d，J＝15.9Hz，H－2），4.20（2H，q，J＝7.1Hz，－OCH2－），1.29（3H，t，J＝7.1Hz，－CH3），13CNMR（125MHz，（CD3）2CO）δ：166.5（s，C－1），115.5（s，C－2），145.4（d，C－3），126.8（s，C－4），115.5（d，C－5），145.4（d，C－6），147.8（d，C－7），116.5（d，C－8），121.7（s，C－9），59.6（t，－OCH2－），13.8（q，－CH3）.上述波谱数据与文献［3］对照，鉴定为ethyl caffeate.

化合物4，黄棕色针晶（石油醚－乙酸乙酯），分子式：C8H8O4.ESI－MS（m／z）：359［2M ＋Na］＋.1H－NMR（500MHz，CDCl3）δ：5.88（2H，s，H－3，5），3.85（6H，s）.13C－NMR（125MHz，CDCl3）δ：186.83（s，C－4），176.66（s，C－1），157.34（s，C－2，6），107.42（d，C－3，5），56.47（q，2，6－OCH3）.以上数据与文献报道［4］对照，鉴定为2，6－dimethoxy－1，4－benzoquinone.

化合物5，白色粉末（石油醚－乙酸乙酯），分子式：C8H8O4.ESI－MS（m／z）：167［M－H］－.1HNMR（500MHz，（CD3）2CO）δ：7.61（1H，dd，J＝8.2，1.9Hz），7.58（1H，d，J＝1.9Hz），6.93（1 H，d，J＝8.2Hz），3.92（3H，s）.以上数据与文献报道［5］对照，鉴定为 3－hydroxy－4－methoxybenzoic acid.

化合物6，白色粉末（氯仿－甲醇），分子式：C34H46O18.ESI－MS（m／z）：765［M＋Na］＋.1H－NMR（500MHz，C5D5N）δ：6.93（4H，s，H－2，6，2′，6′），4.95（2H，s，H－1″），4.33（2H，s，H－7，7′），4.04（2H，d，J＝8.8Hz，Hb－9，9′），3.94（2H，brs，Ha－9，9′），3.15（2H，m，H－8，8′），3.79（12H，s，3，5，3，5′－OCH3），5.82（2H，d，J＝6.8Hz，H－1″）；13C－NMR（125MHz，C5D5N）δ：153.8（s，C－3，5，3′，5′）138.1（s，C－4，4′），135.1（s，C－1，1′），104.7（d，C－2，6，2′，6′），86.0（d，C－7，7′），72.1（t，C－9，9′），54.6（d，C－8，8′），56.6（q，3，5，3′，5′－OCH3），104.9（d，C－1″），78.5（d，C－5″），78.2（d，C－3″），75.9（d，C－2″）71.4（d，C－4″），62.4（t，C－6″）.上述波谱数据与文献［3］对照，鉴定为syringaresinol－4，4′－di－O－β－D－glucoside.

化合物7，白色晶粒（氯仿－甲醇），分子式：C15H22O9.1H－NMR（500MHz，CD3OD）δ：6.77（2H，s，H－2，6），4.62（1H，d，J＝7.0Hz，H－1′），3.82（3H，s，4－OCH3），3.70（6H，s，3，5－OCH3）；13C－NMR（125MHz，CD3OD）δ：156.0（s，C－1），96.2（d，C－2，6），154.8（s，C－3，5），134.5（s，C－4），103.2（d，C－1′），74.9（d，C－2′），78.4（d，C－3′），71.7（d，C－4′），78.1（d，C－5′），62.7（t，C－6′），56.5（q，3，5－OCH3），61.2（q，4－OCH3）.上述波谱数据与文献［6］对照，鉴定为3，4，5－trimethoxyphenol－1－O－β－D－glucopianoside.

2.3 讨论

对有细胞毒活性的羊脆木树皮氯仿部分进行分离纯化，鉴定出5个化合物（1－5），其中化合物4、5为首次从该属中分离得到.由于化合物5获得量较少，所以只对化合物1－4做了细胞毒试验，通过试验发现苯丙素类化合物3及苯醌类化合物4具有明显的细胞毒活性.需要对该部位继续进行分离纯化、单体结构鉴定和细胞毒药理试验，以望获得更多的活性成分.

由于甲醇部位的得率相对较高，遂对非活性的甲醇部位进行分离纯化，鉴定出2个单体（6、7）.通过细胞毒试验发现这两个化合物也表现出一定的细胞毒活性，表明从非活性部位也可以获得含有活性的单体，继续分离该部位有望获得其他活性成分.