不同剂量白头翁汤微粉对大鼠内皮细胞NO分泌的影响

李 志，王金秋，刘 朗

（1.北京农业职业学院畜牧兽医系，北京 房山 102442；2.北京伴侣动物医院，北京 西城 100035）

白头翁汤是中医治疗出血性胃肠炎的经典方剂。前期研究表明，白头翁汤对小鼠内毒素症有很高的保护率，白头翁汤有效成分对内毒素引起的微血管内皮细胞NO分泌升高有明显下调作用。本试验利用中药（生物）细胞破壁技术加工白头翁汤微粉，研究了白头翁汤普粉和白头翁汤微粉对抗内毒素作用，以期为兽医临床应用中药微粉防治疾病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 DMEM培养基、优级胎牛血清（购自Gibco公司）；LPS（E.coli O55:B5，购自Sigma公司）；ET-1及sICAM-1试剂盒（购自R&D公司）；NO试剂盒（购自晶美生物工程有限公司）；七叶亭（标准品，由白求恩医科大学中药研究室提供）。

1.2 试验细胞准备及处理 试验使用第5代细胞。将融合生长的内皮细胞以0.25%胰蛋白酶消化，细胞悬液接种于96孔细胞培养板，细胞密度5×107cells/L，每孔 500 μL，置 5%CO2培养箱培养。待细胞融合成单层细胞，开始试验。分组：（1）对照组（加含2%血清的维持培养基）；（2）LPS组（1 μg/mL的LPS）；（3）LPS＋七叶亭组（分别用10 μg/mL、5 μg/mL、1 μg/mL预孵2 h后加入1 μg/mL的LPS）；（4）七叶亭组（10 μg/mL七叶亭），每组设6个重复孔，分别于培养12 h后收集上清液，贮存于-20℃冰箱内待测。

1.3 试验动物及其处理 昆明系小鼠50只，分为正常对照组、内毒素症组、白头翁汤煎剂组（0.3 mL）、白头翁汤微粉2/3剂量悬液组（0.2 mL）、白头翁汤微粉1/3剂量悬液组（0.1 mL），每组10只。小鼠腹腔注射1 mg/mL内毒素0.2 mL，同时腹腔注射中药制剂，观察死亡率，24 h后小鼠用乙醚麻醉后眼眶采血，血样用肝素抗凝（血样:肝素（v:v）=1∶10），4℃保存待测血浆NO水平。

1.4 血清和细胞培养上清液NO含量测定 NO测定采用还原酶法，测试方法均参照试剂盒说明书。

2 结果

通过SPSS统计软件分析，白头翁汤微粉2/3剂量组和1/3剂量组与内毒素组相比，极其显著地降低了内毒素引起的内皮细胞分泌NO的水平，与白头翁汤普粉组相比无显著差异（表1）。

3 讨论

中药制剂传统粉碎方法的药物细胞破壁率极低，超微粉碎技术是近年来刚刚兴起的一项高新技术，对提高中药药效，提高中药药品质量，降低中药资源浪费与消耗，提高企业和社会经济效益，都具有十分重要的现实意义和应用价值[1]。已有研究表明，单味中药和中药复方经超微粉碎后，能促进药物有效成分的溶出，提高其生物利用率和药物疗效，同时节省药材用量，使用小剂量的超微细粉就能达到大剂量传统粗粉的药效。

表1 白头翁汤对微血管内皮细胞分泌NO的影响（n=6，X±S）

本试验以体外培养的肠黏膜微血管内皮细胞为模型，建立了LPS损伤模型，研究了白头翁汤微粉对内毒素引起的内皮细胞分泌NO增加的影响，结果白头翁汤微粉2/3剂量组和1/3剂量组与内毒素组相比，极其显著地降低了内毒素引起的内皮细胞分泌NO升高，与白头翁汤普粉组相比无显著差异。

本试验结果证实，白头翁汤微粉提高疗效，降低用量，和其他研究结果一致[2-4]。中药超微粉可以提高中药药效、降低中药资源的浪费与消耗，改善中草药的适口性、提高中医药的研究水平，增加畜禽、水产养殖业的经济效益和社会效益，本试验可为临床应用中药超微粉提高理论依据。

[1]张瑜，范丙义，张大禄.超微粉碎技术在中药加工中的应用与思考[J].中国药学杂志，2002，37(11):801-802.

[2]杜晓敏，刘璐，何煜.原生药材超细微粉制剂的药效学研究[J].中草药，1999，30(9):680-684.

[3]王爱武，徐济萍，张敏.当归散超微粉碎对养血安胎作用的影响[J].现代中西医结合杂志，2002，11(23):2325-2326.

[4]郭琪，杜晓敏，何煜.单方、复方细胞级粉碎和普通粉碎质量对比[J].中成药，2001，23（1）:70-72.