氢化物发生－原子荧光光谱法测定止痢散中三氧化二砷的含量

杨修镇

(山东省兽药质量检验所;山东省畜产品质量安全监测与风险评估重点实验室，济南250022)

止痢散收载于《中华人民共和国兽药典》二○一○年版二部，具有清热解毒，化湿止痢的功能［1］。处方中含有雄黄，雄黄属有毒中药材，主要成分是二硫化二砷，其中夹杂有剧毒可溶性砷盐三氧化二砷［2］。三价砷可能与多种重要的巯基酶结合，导致酶失活，从而阻止细胞的正常呼吸和代谢，造成细胞损害［3］。含雄黄制剂在加工处理过程中二硫化二砷在80℃以上会部分转化为三氧化二砷［4］，雄黄粉碎的较好方法为水飞法［5］，但有些兽药厂仍采用直接干粉碎法来加工含雄黄制剂，致使其三氧化二砷含量较高。止痢散标准中虽有三氧化二砷检查法，但该检查法为古蔡氏法，无法精确定量且当样品所显砷斑与标准砷斑较为接近时仅凭肉眼是难以判定的。为了更好的控制本品质量，研究对止痢散中三氧化二砷的含量测定方法进行了探索。

1 仪器和材料

Afs－930双道原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司)，1000 μg/mL砷标准储备液(国家有色金属及电子材料分析测试中心，12530－1)。止痢散(批号 2013080110、2013080111、2013080112 山东华尔康生物技术有限公司生产，批号201301112、201301113、201301114山东恒利生物制药有限公司生产，批号 131201、131202、131203潍坊永昌药业有限公司，批号 130801、130802、130803淄博昊威兽药有限公司生产)。盐酸为优级纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 仪器条件 根据参考文献方法［6］，载流为3.0%盐酸溶液，还原剂为含0.5%氢氧化钾的1%硼氢化钾溶液，氩气载气流量为600 mL/min，砷空心阴极灯电流为60 mA。

2.2 供试品溶液制备 根据参考文献方法［1］，取止痢散约 1.4 g，精密称定，加稀盐酸(取盐酸234 mL，加水稀释至1000 mL，即得)20 mL，不断搅拌30 min，滤过，残渣用稀盐酸洗涤2次，每次10 mL，搅拌10 min。洗液与滤液合并，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置200 mL量瓶中加入硫脲2 g，加3.0%盐酸溶液至刻度，摇匀，放置30 min以上，即得。

2.3 空白样品溶液制备 按止痢散标准制法项根据处方制备不含雄黄的散剂并按供试品溶液制备方法制备空白样品溶液。

2.4 工作曲线的绘制 取砷标准储备液，用3.0%的盐酸溶液逐级稀释成含砷 0、10、20、40、80、100 ng/mL的系列工作标准溶液，每100 mL砷工作标准溶液加入硫脲1 g，摇匀，放置 30 min以上［6］，在上述仪器条件下进行测定，以荧光强度值(y)为纵坐标，砷工作标准溶液(x，ng/mL)为横坐标，进行线性回归分析，回归方程为:y=141.77x －4.4368(r=0.9999)，结果表明砷元素进样浓度在0～100 ng/mL范围内与荧光强度值呈良好的线性关系(图1)。

图1 砷元素进样浓度与荧光强度值曲线图

2.5 精密度试验

2.5.1 仪器精密度试验 取10 ng/mL砷工作标准溶液，注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，连续测定11次，荧光强度值RSD为1.1%，表明有仪器有良好的精密度。

2.5.2 重复性试验 分别称取同一止痢散样品，按供试品溶液制备项制备样品溶液，制备6份，分别注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，三氧化二砷含量(以砷计)RSD为1.6%，表明重复性好。

2.6 回收率试验 分别取已知三氧化二砷含量的止痢散约0.7 g，精密称定，加入 1000 μg/mL 砷标准储备液0.25 mL，自“加稀盐酸20 mL，不断搅拌30 min”起按供试品溶液制备项制备样品溶液，平行6份，注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，三氧化二砷(以砷计)平均回收率为95.3%，RSD 为1.9%，结果见表1。

表1 回收率试验

2.7 检出限与定量限 取空白样品溶液，注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，连续测定11次，计算3倍11次空白样品溶液测量值的标准偏差与工作曲线的斜率的比值［7］，得砷的检出限为0.10 ng/mL。计算10倍11次空白样品溶液测量值的标准偏差与工作曲线的斜率的比值，得砷的定量限为0.32 ng/mL。

2.8 耐用性试验

2.8.1 供试品溶液的稳定性 取同一供试品溶液，于制备后0、1、2、4、8、16、24、48 h 分别注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，荧光强度值的RSD为1.4%，表明样品溶液在48 h内稳定。

2.8.2 仪器条件的微小变动 取同一供试品溶液，将载流调整为2.5%、3.5%盐酸溶液;还原剂调整为含0.45%氢氧化钾的0.95%硼氢化钾溶液、含0.55%氢氧化钾的1.05%硼氢化钾溶液;将载气流量调整为590、610 mL/min;砷空心阴极灯电流调整为55、65 mA，分别进行测定，三氧化二砷(以砷计)含量的相对相差为1.8%，表明仪器条件的微小变动对测量结果无明显影响。

2.8.3 供试品溶液制备条件的微小变动 取同一止痢散样品将稀盐酸用量调整±5%，搅拌时间调整±5%，制备供试品溶液，分别进行测定，三氧化二砷(以砷计)含量的相对相差为1.5%，表明供试品溶液制备条件的微小变动对测量结果无明显影响。

2.9 12 批样品含量测定 取不同批号的止痢散，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，注入原子荧光光度计，在上述仪器条件下进行测定，计算止痢散中三氧化二砷的含量(以砷计)。12批止痢散中三氧化二砷(以砷计)含量在0.15～0.64 mg/g之间，结果见表2。

表2 12批样品含量测定结果

3 讨论与小结

测定止痢散中三氧化二砷的含量应首先排除二硫化二砷的干扰，传统的干消解法、湿消解法以及微波消解法都无法有效实现三氧化二砷与二硫化二砷的分离，利用三氧化二砷易溶于稀盐酸二硫化二砷不溶于稀盐酸的性质，参考止痢散标准中三氧化二砷检查法制备供试品溶液避免了消解不完全、赶酸不彻底等因素的干扰，回收率大大提高。

古蔡氏法系以碘化钾、氯化亚锡将高价砷还原为三价砷然后与锌粒和盐酸产生的新生态氢生成砷化氢气体，再与溴化汞试纸生成黄色至橙色的色斑，色斑的深浅与砷的量呈一定的关系。该方法易于操作，但无法精确定量且用肉眼观察难免受主观影响。氢化物发生－原子荧光光谱法测砷系在盐酸介质中，硼氢化钾将砷转化为砷化氢，以氩气作载气将砷化氢导入石英炉原子化器中进行原子化，以砷特种空心阴极灯激发出荧光，荧光强度在一定范围内与砷的含量成正比。该方法可精确定量且简便、准确、重现性好。止痢散标准中三氧化二砷检查法规定供试品所显砷斑颜色不得深于标准砷斑，但130803批样品在使用古蔡氏法检查时样品所显砷斑与标准砷斑较为接近难以判定结果。采用氢化物发生－原子荧光光谱法测定12批止痢散中三氧化二砷(以砷计)含量在0.15～0.64 mg/g之间，根据标准换算止痢散中三氧化二砷含量(以砷计)不得超过0.71 mg/g，130803批样品三氧化二砷(以砷计)含量为0.64 mg/g，并未超过标准的要求。

试验建立的氢化物发生－原子荧光光谱法测定止痢散中三氧化二砷的含量的方法，为进一步控制止痢散的质量提供了依据。

［1］中国兽药典委员会﹒中华人民共和国兽药典二○一○年版二部［S］.

［2］刘小兰﹒中国药典雄黄炮制方法与中成药三氧化二砷含量［J］.北京中医，2000，19(1):42－44.

［3］徐智，黄可龙﹒砷的代谢及毒性机制的相关性研究［J］.药学专论，2009，18(12):19 －21.

［4］潘雪英﹒探讨温度对雄黄中三氧化二砷含量的影响［J］.中国药师，2005，8(9):797 －799.

［5］原思通，张广强﹒雄黄炮制新工艺的探讨［J］.中成药，1996，18(1):22－23.

［6］方跃强，马冰洁，徐群英，等.氢化物原子荧光法测定生活饮用水中砷的不确定度评价［J］.中国卫生检验杂志，2008，18(3):542－543.

［7］王 滨，王耀成，江永圣.氢化物发生原子荧光法测定食品中无机砷［J］.理化检验 －化学分册，2004，40(11):687 －688.