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高效液相色谱法同时测定复合维生素B注射液中4种维生素的含量

2014-11-23陆春波蔡文金

中国兽药杂志 2014年8期
关键词:核黄素烟酰胺磷酸钠

陆春波,穆 琳,蔡文金

(浙江省兽药饲料监察所,杭州310020)

复合维生素B注射液为复方制剂,主要用于防治维生素缺乏所致的多发性神经炎,消化障碍,癞皮病,口腔炎等。复合维生素B注射液收载于农业部1960号公告[1],该标准只对维生素 B1、核黄素磷酸钠的含量进行了测定,其中维生素B1测定方法为重量法,核黄素磷酸钠测定方法为紫外-可见分光光度法。本研究在参考文献[2-4]的基础上,建立了高效液相色谱法同时测定本品中维生素B1、核黄素磷酸钠、维生素B6、烟酰胺含量的方法,结果较为满意。

1 材料

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱,配Waters 2487紫外检测器(美国Waters公司);XS-205电子天平(Mettler公司)。

1.2 试剂 甲醇、冰醋酸、庚烷磺酸钠为色谱纯;三乙胺为分析纯;水为超纯水。

1.3 对照品 维生素B1对照品,批号为00311,含量为95.0%,德国Dr.Ehrenstorfer公司;核黄素磷酸钠对照品,批号为SLBD2777V,含量(以维生素B2计)为70.0%,SIGMA-ALDRICH公司;维生素B2对照品,批号为 11021,含量为 99.2%,德国 Dr.Ehrenstorfer公司;维生素B6盐酸盐对照品,批号为11020,含量为100.0%,德国Dr.Ehrenstorfer公司;烟酰胺对照品,批号为 100115-200703,含量为99.9%,中国食品药品检定研究院。泛酸钙对照品,批号为100370-200301,供含量测定用,中国食品药品检定研究院。

1.4 供试品 复合维生素B注射液,规格为10 mL,含维生素B1100 mg、核黄素磷酸钠13.7 mg(以维生素B2计10 mg)、维生素 B610 mg和烟酰胺150 mg, 批号分别为20140301、20140302、20140303,均由浙江金力制药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 混合对照品储备液的制备 取维生素B1对照品约100 mg,核黄素磷酸钠对照品约10 mg,维生素B6盐酸盐对照品约10 mg和烟酰胺约150 mg,精密称定,置同一25 mL棕色量瓶中,用流动相A溶解并稀释至刻度,作为混合对照品储备液。

2.1.2 混合对照品溶液的制备 精密量取混合对照品储备液1 mL,置10 mL棕色量瓶中,用流动相A稀释至刻度,作为混合对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密量取供试品1 mL,置25 mL棕色量瓶中,用流动相A稀释至刻度,作为供试品溶液。

2.1.4 空白溶液的制备 取泛酸钙对照品50 mg,加水至100 mL,作为空白供试品;精密量取1 mL,置25 mL棕色量瓶中,用流动相A稀释至刻度,作为空白溶液。

2.2 高效液相色谱条件 采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相 A:三乙胺-冰醋酸-甲醇-0.015 mol/L庚烷磺酸钠(0.2 ∶7.5 ∶75∶820),流动相 B:甲醇,梯度洗脱(表1);检测波长 280 nm;流速 1.0 mL/min;柱温30 ℃;进样量 20 μL。

表1 流动相梯度参数

2.3 线性考察 精密量取 1、2、3、5、10 mL 对照品储备液,分别置50 mL棕色量瓶中,用流动相A稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件分析,以对照品浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,所得线性方程和相关系数结果见表2。

图1 核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1混合对照品溶液HPLC色谱图

图2 供试品溶液HPLC色谱图

表2 维生素B1、核黄素磷酸钠、维生素B6、烟酰胺线性结果

2.4 专属性考察 按2.2项色谱条件,分别对混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶液进行分析(结果见图1、图2、图3)。结果表明:空白溶液在核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1峰处无吸收峰,核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1的理论板数均大于3000,核黄素磷酸钠与烟酰胺分离度为6.6;烟酰胺与维生素B6分离度为15.7;维生素B6与维生素B1分离度为16.5。

用维生素B2对照品代替核黄素磷酸钠对照品,配制方法同2.1.1项和2.1.2项,液相色谱图如图4所示。

图3 空白溶液HPLC色谱图

图4 烟酰胺、维生素B2、维生素B6、维生素B1混和对照品溶液HPLC色谱图

2.5 回收率试验 取维生素B1、核黄素磷酸钠、维生素B6、烟酰胺对照品适量,用空白供试品溶解并稀释至刻度,摇匀,作为添加样品,进行加样回收率试验,以考察方法的准确度。每个浓度各制备3份平行样,结果见表3。

表3 回收率试验结果

2.6 重复性试验 取同一份供试品溶液,连续重复进样6次,记录峰面积,计算RSD,核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素 B6、维生素 B1的 RSD分别为0.3%,0.3%,0.2%,0.2%。

2.7 溶液稳定性试验 取混合对照品溶液,分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样,核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素 B6、维生素 B1的 RSD分别为 0.5%,0.3%,0.2%,0.2%。结果表明,供试品溶液在 12 h内稳定。

2.8 样品测定 取供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法计算核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1含量,结果见表4。

表4 样品中核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1含量测定结果(n=3)

3 讨论与小结

3.1 检测波长的确定 取核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1对照品适量,用流动相A溶解后,在400~200 nm的波长范围内扫描,核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素 B6、维生素 B1分别在 267、261、291、246 nm波长处有最大吸收,综合考虑,选择280 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择 流动相中加入三乙胺,可以消除碱性物质的拖尾现象,特别对于含有叔胺结构的维生素B1更有明显的作用。曾用流动相A作等度洗脱,维生素B1的出峰时间过长,为了缩短分析时间,选择了梯度洗脱。

3.3 农业部1960号公告方法的不足之处 农业部1960号公告关于复合维生素B注射液中的维生素B1、核黄素磷酸钠的含量测定方法采用的是重量法和紫外-可见分光光度法。重量法测定维生素B1的操作较为复杂;采用的垂熔玻璃坩埚的号数对结果影响较大;且洗涤溶剂丙酮对人体有危害。紫外-可见分光光度法测定核黄素磷酸钠,如果有维生素B2的干扰,核黄素磷酸钠和维生素B2均有吸收,用该方法测定的应为两者之和。

本文对色谱条件、方法线性、专属性、回收率和重复性等方面进行考察后,建立了高效液相色谱法。实验结果表明,该方法操作简便、结果准确,能有效检测复合维生素B注射液中4种维生素的含量。

[1]中国兽药典委员会.农业部1960号公告.兽用国家标准(化学药品、中药卷)第一册[S].

[2]李祥胜,阚家义.复合维生素B注射液中4种维生素的含量测定[J].安徽医药,2009, 13(7): 755-756.

[3]周 杰,梁建军,王晨光.复合维生素B注射液的含量测定[J].河北化工, 2007,30(4): 46-47.

[4]陈光龙,李玉兰,刘 敏,等.高效液相色谱法同时测定复合维生素B片中4种组分的含量[J].中国医院药学杂志,2006, 26(10): 1256-1258.

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