气相色谱法测定苦参苍术口服液中三氯甲烷残留量

范 强，刘自扬，万仁玲，段文龙

（中国兽医药品监察所，北京100081）

苦参苍术口服液由苦参和苍术两味中药组成，具有清热、燥湿、止痢之功效，主治鸡大肠杆菌病，其在制剂制备过程中使用三氯甲烷提取苦参总生物碱。三氯甲烷是一种强挥发性物质，高剂量的三氯甲烷能抑制中枢神经，并可造成肝肾损害及肿瘤［1］。《中华人民共和国兽药典》二○一○年版规定，三氯甲烷属第二类残留溶剂，应限制使用，限度为0.006%［2］，控制其残留量对保证兽药质量和用药安全具有重要意义。因此，本研究按照《中国兽药典》残留溶剂测定法的要求，在参考相关文献基础上［3-5］，建立了苦参苍术口服液中三氯甲烷残留量的检测方法，并进行了方法学验证，现报告如下。

1 仪器与试药

Aglient 7890A气相色谱仪，FID检测器；梅特勒XS205分析天平。三氯甲烷（国药集团化学试剂有限公司提供，分析纯，批号：20090116），N-N二甲基甲酰胺（DMF）（迪马公司提供，色谱纯，批号：62106）。苦参苍术口服液由洛阳惠中兽药有限公司提供，批号：20101001，20101002，20101003。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性［3-5］采用DB-FFAP毛细管柱（30 m ×0.53 mm×1 μm）；进样口温度：220℃；程序升温，初始温度40℃保持10 min，以10℃／min的速率升温至70℃，保持3 min后，再以20℃／min的速率升温至200℃；FID检测器温度250℃；载气为氮气，流速3.0 mL／min；分流比1∶1；进样方式为直接进样；进样量：1 μL。三氯甲烷色谱峰与其他色谱峰的分离度大于1.5，色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.2 对照品溶液的制备 取三氯甲烷对照品适量，精密称定，用DMF稀释制成24 μg／mL的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取苍术苦参口服液样品作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 精密称取三氯甲烷对照品151.16 mg，置已有一定量DMF的50 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液适量，用DMF稀释配制成含三氯甲烷6.0464、12.0928、24.1856、30.232、60.464、120.928 μg／mL的系列对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，连续测定2次，以平均峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标进行线性回归，得回归方程为 A ＝ 0.9722C－0.1428（r＝0.99995），线性范围为 6.0464～120.928 μg／mL。

2.5 检测限和定量限 取浓度为6.046 μg／mL的对照品溶液，逐步稀释，依照测定法测定三氯甲烷峰的信噪比，得三氯甲烷的检测限（S／N＝3）为0.91 μg／mL，定量限 （S／N ＝ 10） 为 2.42 μg／mL。

2.6 仪器精密度试验 精密吸取浓度为60.464 μg／mL的三氯甲烷对照品溶液1 μL，连续进样6次，测定其峰面积，计算RSD为1.1%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液1 μL，分别在0，2，6，8，10，12 h 进样，测定三氯甲烷的峰面积，计算RSD为2.3%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 取批号为20101001的苦参苍术口服液，按上述方法平行测定6次，得平均含量为22.036 μg／mL，RSD 为2.7%，表明方法的重复性良好。

2.9 回收率试验 精密量取已知含量的供试品（批号：20101001）5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入浓度为22.003 μg／mL的三氯甲烷对照品溶液5 mL，混匀，共制备6份，按上述方法测定，结果见表1。

表1 回收率试验数据

2.10 供试品的测定 按“2.1”项下条件进行测定，记录三氯甲烷峰的峰面积，按外标法计算其含量，结果3批供试品中均检出三氯甲烷，其残留量均低于《中华人民共和国兽药典》的限度规定，数据见表2。

表2 样品的含量测定结果 （n＝4）

3 讨论与小结

3.1 色谱柱的选择 研究中分别采用HB-5、DB-624、DB-WAX、DB-FFAP等色谱柱进行了色谱条件摸索，结果表明采用DB-FFAP色谱柱分离效果最好，三氯甲烷峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，符合气相色谱法的规定。

3.2 检测器的选择 三氯甲烷含有3个电负性的氯原子，在FID检测器上响应较低，最适宜采用电子俘获检测器（ECD）对其进行测定。ECD检测器仅对那些能俘获电子的化合物，如卤代烃、含N、O和S等杂原子的化合物有响应，但其对检测样品要求较高。研究中发现，供试品成分较为复杂且含有一定量的乙醇，极易对ECD检测器造成污染而影响测定，故最终选用了FID检测器。

3.3 进样方式的选择 研究中分别对直接进样方式和顶空进样方式进行了比较，结果由于供试品中含有大量的挥发油和乙醇，采用顶空进样的方式无法达到减小干扰的目的，反而增加了干扰，故最终采用直接进样的方式。

3.4 测定方法的选择 气相色谱法测定含量时，内标法可减少由仪器系统或操作过程引入的误差，比外标法具有更高的准确度。但由于供试品中含有的挥发性成分较多，对测定的干扰较大，研究中未能从异丙醇、正丁醇、丙酮、正己烷等有机试剂中选出合适的内标物，故最终采用外标法进行测定。

3.5 柱温的选择 试验中分别对恒温方式和程序升温方式进行了考察，结果采用恒温方式时，三氯甲烷峰不能与其他色谱峰完全分离；采用程序升温的方式时，三氯甲烷峰达到基线分离，峰形较好，分析时间较短；故试验中采用程序升温的方式进行样品测定。

本研究首次利用气象色谱法对中药口服液中三氯甲烷的残留量进行了测定。结果表明，该方法简便、快速、准确、重现性好，可作为苦参苍术口服液中三氯甲烷残留量的检测方法。此外，根据产品的制剂工艺，本方法亦可用于苍术挥发油和苦参总生物碱中三氯甲烷残留量的测定。

［1］邹 梅，赵生友，王 玮.氯仿的免疫毒性作用［J］.中国免疫学杂志，2002，18（3）：178-183.

［2］中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二○一○年版一部［S］.

［3］宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛细管气相色谱法测定盐酸美金刚原料药中三氯甲烷的残留量［J］.中国药房，2010，21（37）：3536-3537.

［4］李志刚，李 晶，高 强，等.气相色谱法测定甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量［J］.中国生物制品学杂志，2010，23（7）：778-780.

［5］李雪春，张卫国.中草药制剂中三氯甲烷残留量的顶空气相色谱测定法［J］.职业与健康，2011，27（1）：37-38.