某地区淋球菌对抗菌药物敏感性及质粒耐药流行状况研究＊

刘小凤，沈守星，魏秋姣，徐刚，周俭中，吴兴中（.广东省珠海市慢性病防治中心 59000；.广东省皮肤性病防治中心，广东广州 50500）

淋病是性传播疾病之一，也是一种公共卫生疾病，能够促进艾滋病的感染和传播，多年来由于抗菌药物的滥用和不规范使用，使淋球菌对外环境产生了适应性变异，致使其对多种抗菌药物的敏感性不断下降。为了解珠海地区淋球菌流行株对抗菌药物的敏感性及产β－内酰胺酶的淋球菌（PPNG）和质粒介导的四环素高度耐药淋球菌（TRNG）的流行状况，现对2011～2013年度珠海地区临床分离的192株淋球菌流行株检测其对6种抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）、PPNG 和TRNG，报道如下。

1 资料现方法

1.1 一般资料来自2011年1月至2013年6月珠海市22家性病监测点实验室从STD 门诊患者和高危人群体检者的泌尿生殖道分泌物中，分离得到的192株淋球菌株。所有菌株经革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验证实后，在选择性培养基（TM）上传代1次，经18h培养后，将纯菌株洗脱于小牛血清中，保存于－70℃低温冰箱冻存备用。

1.2 药物与菌株6种抗菌药物（青霉素、四环素、环丙沙星、壮观霉素、头孢曲松和头孢克肟）由广东省皮肤性病防治中心提供。GC基础培养基（Oxoid公司生产）加入10%脱纤维新鲜羊血。6株淋球菌标准菌株D、G、J、L 由广东省皮肤性病防治中心提供，其中D、G、L 株为产β－内酰胺酶阴性菌株，J株为PPNG 菌株。

1.3 方法

1.3.1 最小抑菌浓度（MIC）测定采用世界卫生组织（WHO）西太区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂稀释法测定MIC［1］。先将各抗菌药物用适当的缓冲液按要求配制成原液，再倍比稀释成多个浓度，各抗菌药物在培养皿上的最终浓度，青霉素、四环素、环丙沙星和壮观霉素均为0.03～32μg／mL，头孢克肟、头孢曲松0.002～1μg／mL。试验菌株和标准菌株首先在无选择性培养基（GC）上传代两次，选用16～18h的新鲜培养物制成107～108cfu／mL菌悬液，用多头接种器蘸取菌液接种于含各种不同浓度抗菌药物的琼脂平板上，置35℃、5%CO2环境下培养，24h后观察结果，记录无菌落生长的最低药物浓度为该药的MIC。每批试验均由标准菌株质控，按WHO 西太平洋地区淋球菌耐药监测项目推荐的标准判断药物敏感性［1］。头孢克肟敏感性试验和判断标准按美国临床和实验室标准化研究所（CLSI）标准判断［2］。并统计出MIC50及MIC90。

1.3.2 产β－内酰胺酶淋球菌（PPNG）的检验采用纸片酸度法［3］，即先将滤纸吸足青霉素溶液（以溴甲酚紫为指示剂），取待检菌涂于滤纸上，置37℃温育30min，滤纸上菌落颜色由紫色变为黄色为β－内酰胺酶阳性，颜色无变化为阴性。每批试验以标准菌株J株作阳性对照，标准菌株L株作阴性对照。

1.3.3 质粒介导的四环素高度耐药淋球菌（TRNG）的检验采用监测规划要求的琼脂稀释法，当四环素MIC≥16μg／mL时判为TRNG 株［3］。

2 结果

2.1 质粒介导的淋球菌耐药性192株淋球菌中共检出PPNG 66株（34.4%），检出TRNG 94株（49.0%）。

2.2 MIC测定结果2011～2013年度监测的淋球菌对青霉素耐药率为68.8%（132／192），环丙沙星耐药率为100.0%（192／192），四环素耐药率为99.0%（190／192），其中同时对青霉素、四环素和环丙沙星三重耐药的有130株（67.7%）；青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50和MIC90均已超过耐药标准。壮观霉素、头孢曲松和头孢克肟耐药株，敏感性分别为100.0%、66.7%和95.8%，头孢曲松中敏率为33.3%（64／192），头孢克肟中敏率为4.2%（8／192）。见表1、2。

表1 192株淋球菌对6种抗菌药物MIC的结果比较（n）

表2 192株淋球菌对6种抗菌药物的敏感性［n（%）］

3 讨论

淋球菌对抗菌药物耐药性的问题早已引起全球关注，1987年WHO 在全球范围内开展淋球菌耐药性监测，建议对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松和壮观霉素5种核心组抗菌药物进行监测，以动态了解和掌握各国、各地流行的淋球菌株对抗菌药物的敏感性。从国内外学者的研究报道中显示，淋球菌的耐药性及质粒介导耐药菌株的流行状况随时间和地区的不同而存在差异［4－8］。本研究通过对6种抗菌药物MIC 测定，结果显示珠海地区淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星的耐药率均很高，分别为68.8%、99.0%和100.0%，与2010年该地区的监测结果基本相近［4］。青霉素的耐药率低于广州、佛山、江门和肇庆4个城市的84.8%、深圳的85.7%和汕头的84.8%，也低于上海的98.11%，可能与该地区较少使用青霉素有关［5－8］。四环素及环丙沙星该地区耐药率为99.0%和100.0%，均高于国内其他地区的报道［5－8］。提示青霉素、四环素、环丙沙星对该地区流行的淋球菌株的敏感性差，不应作为治疗淋病的首选药物。

质粒介导的淋球菌PPNG 和TRNG 的检出率为34.4%和49.0%，与2010年该地区的监测结果31.4%和48.6%基本相近，说明该地区PPNG 和TRNG 仍处于高流行率［4］。虽然青霉素和四环素很少作为治疗淋病的首选药物，但PPNG 和TRNG 流行率仍是淋球菌耐药性流行病学监测的重要指标之一，PPNG 和TRNG 是由质粒介导的耐药性，耐药质粒可以在同种菌属间传递造成耐药质粒的广泛传播和高水平的耐药性，通过对质粒介导的淋球菌耐药株的监测，可以评估淋球菌耐药发展趋势，了解流行病学状况。

头孢菌素作为淋病治疗的首选药物，多年来一直为临床医师所关注，但近年来其敏感性受到挑战，低敏株不断上升，本组监测的192株临床菌株，中敏率为33.3%（64／192），与吴兴中等［5］报道的广东省4个城市的34.0%中敏率基本一致，也与2010年该地区的监测结果37.10%基本相近，低于2008年中国淋球菌监测网监测头孢曲松低敏率的47.42%［4－5，9］。虽然该地区尚未出现耐药菌株，但2009年在日本东京已分离到头孢曲松耐药株，香港也有口服头孢布烯治疗淋病失败的报道［10－11］。珠海是珠三角中心城市和旅游城市，比邻港澳，接壤中山、江门，各地经济及商务活动联系密切，人口流动性大，容易造成各地耐药菌株的携入性传播，因此，应引起临床和有关部门的高度重视，治疗时应注意剂量和疗效的观察，防止头孢曲松耐药菌株在该地区的出现。头孢克肟为第3代口服头孢菌素类的抗菌药物，在珠海地区用于治疗淋病的仍较少，从监测结果显示，其敏感率为95.8%，低敏率为4.2%，提示头孢克肟对该地区淋球菌流行株有较好的敏感性，也可以作为淋球菌治疗的首选药物。

壮观霉素的抗菌活性仍较强，MIC50和MIC90均为16μg／mL，仍处在敏感范围，该地区流行的淋球菌株对壮观霉素的敏感性为100%，与各地报道的一致，提示该种药物仍是该地区治疗淋病的有效药物［4－9］。但苏晓红等［12］报道壮观霉素治疗淋球菌失败的3例中，有2例为壮观霉素耐药株，因此临床在选用壮观霉素治疗淋病时，应足量规范用药。

本研究分析了珠海地区淋球菌对6种抗菌药物的敏感性和PPNG、TRNG 的流行状况，提示头孢曲松、头孢克肟和壮观霉素可作为该地区治疗淋病的首选药物，但随着其广泛的应用，耐药性也逐渐上升，当1种抗菌药物在某一地区对某种细菌的耐药性达到5%以上时，就不应成为临床上治疗该细菌感染所致疾病的第一线药物，因此，加强该地区淋球菌耐药性及耐药株的流行状况的持续监测很有必要。

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