邓川黑白花奶牛同期发情及胚胎移植试验报告

李国华，杜杰亮，董跃武，李茂森，李四焘

(1.洱源县凤羽镇畜牧工作组，云南 洱源 671200;2.洱源县畜牧工作站，云南 洱源 671200;3.洱源县茈碧湖镇畜牧工作站，云南 洱源 671200)

邓川黑白花奶牛是云南省地方品种，该品种是在20世纪50年代开始，以当地乳用黄牛品种邓川牛为母本，引入黑白花奶牛种公牛，开展杂交改良，经过不断选育而成。邓川黑白花奶牛存栏在15万头左右，中国西部地区多数奶牛都含其血液成分。牛胚胎移植是一项新的育种技术，是快速提高良种化的很好途径。尽管奶牛胚胎移植推广多年，但基层畜牧兽医部门能够掌握该项技术的人员较少，特别县、乡两级尤为突出，影响了奶牛胚胎移植的推广应用。为提高育种技术，开展同期发情及胚胎移植试验，让基层畜牧科技人员进一步了解奶牛胚胎移植，掌握技术要领，部分人员在专家的指导下初次完成移植。

1 受体牛及材料

1.1 试验地点和时间

地点在洱源县凤羽、茈碧湖、三营3个乡(镇)奶牛养殖区，时间2012年10月至2013年8月。

1.2 材料

CIDR栓、CIDR枪、PGF2α注射液、1%普鲁卡因注射液、10 mL注射器、一次性针头、新洁尔灭溶液、酒精棉球、塑料桶3只、毛巾2条、直检手套、凡士林、纸巾。

1.3 受体母牛准备

待选受体牛品种为邓川黑白花奶牛，以18～24月龄的育成牛为主。体格较大，后躯发育好;膘情中等，体重350 kg以上;健康(无传染病、生殖道疾病、肢蹄病等);性周期正常，发情表现良好。胎次为0，已有2次发情期未配种，生殖器官正常(包括阴道、子宫和卵巢)，乳房发育良好。在开展移植前10 d，由改良点技术人员调查统计、登记。待选受体母牛数通常是移植胚胎数的5倍，本次试验有159头待选。

1.4 奶牛胚胎

由大理州家畜繁育指导站从外地购买34枚奶牛冷冻胚胎，品种为荷斯坦奶牛，运输至洱源县奶牛改良点备用。

2 方法及步骤

2.1 受体母牛初步筛选

通知养牛户(场)，按规定时间，把待选母牛牵拉到各改良点。保定后，向畜主询问基本信息，了解年龄大小和饲养管理情况，评定体型、体重，检查子宫、卵巢形状、大小、质地，卵巢在长2 cm、宽2 cm 、厚1 cm(直径)以上。生殖器官正常无疾病者留用，异常者淘汰。

2.2 同期发情处理

采用CIDR栓+PGF2α法诱导处理，使母牛群体在相对集中时间内发情。对每头初选合格的母牛，用新洁尔灭溶液清洗外阴部，酒精消毒;用新洁尔灭溶液对CIDR枪消毒，将CIDR栓装入CIDR枪，将CIDR栓置入母牛阴道，保留10～20 cm尾线。从埋植当日起开始记时，该日为第1天。第8天时对每头母牛注射PGF2α注射液0.6mg。第10天时取出 CIDR栓;第11～13天，每天定时观察母牛发情情况并记录;第18～20天每天检查生殖道、卵巢及黄体，判定是否可作为受体母牛，以及确定移植时间。当卵巢上的黄体大小超过1 cm(直径)，坚实有弹性、轮廓明显，体积占卵巢1/3以上时，就达到移植条件。

2.3 移植方法

2.3.1 受体母牛准备

母牛常在注射PGF2α后3 d开始出现发情症状，主要表现为鸣叫，烦躁不安，相互爬胯，阴门流出黏液，尿频，外阴肿胀、潮红，见红色黏液等。发情后6～8 d(多数在第7天)卵巢上出现黄体，黄体明显突出卵巢表面，顶部有冠状开口，直径大于1.5 cm，弹性好。保定好母牛，在受体牛百会穴硬膜外麻醉，即1～2尾椎间剪毛消毒，注射普鲁卡因4mL。固定尾巴，清洗、擦拭外阴部。

2.3.2 解冻胚胎

从液氮中取出冷冻胚胎细管，在空气中保持6 s，使液氮充分挥发，放入35℃温水中20 s后取出，左手持细管，以右手的拇指和中指轻弹数次，把空气排到上端，剪切口，将装有胚胎的细管装上移植枪，给移植枪套上硬外套，用塑料环卡紧，再套上保护膜软外套。

2.3.3 移植

一只手戴塑料手套，伸入直肠，把握住子宫，另一只手持移植枪插入母牛阴道，顺着子宫颈、子宫体、子宫角，当移植枪头部达到有黄体一侧子宫角的上1/3～1/2处(子宫大弯)时，轻推移植枪，把胚胎移植到母牛子宫角内，然后轻轻拔出移植枪，让母牛休息片刻。

3 移植后饲养管理

3.1 登记检查

记录移植时间、品种、胚胎的各种信息。移植2个月后，进行着床及妊娠检查，确诊为妊娠，每头注射黄体酮2mL，推算预产期，记录入表格。

3.2 饲养管理

做到规范饲养管理，环境清洁，饲草、饲料结构合理，饮水要新鲜，补充食盐和必要的添加剂。分群合理，防止过挤，避免机械性流产。长期舍饲的母牛要注意加强运动。防止在移植前后因饲料及环境改变造成的应激反应。

4 结果及分析

4.1 结果

对邓川黑白花奶牛同期发情处理，移植34枚荷斯坦奶牛胚胎，妊娠16头，妊娠率为47.1%。产犊11头。本次奶牛胚胎移植顺利完成，达到预期效果。

表1 同期发情结果

表2 妊娠及产犊结果

4.2 分析

4.2.1 发情率高

待选母牛153头，初选96头，再经综合检查、筛选后，对60头母牛埋植CIDR栓，44头出现发情，发情率73.3%。CIDR+PGF2α法对邓川黑白花奶牛诱导发情效果显著，可成为将来同期发情胚胎移植首选方法，还可应用于同期发情人工授精。

4.2.2 妊娠率高

对34头邓川黑白花奶牛移植胚胎，妊娠率为47.1%。说明此次试验技术方案成熟，技术路线合理。全部选用了育成母牛，减少了隐性子宫内膜炎对胚胎附植的影响。以邓川黑白花奶牛作受体母牛开展胚胎移植，同其它品种相比，差异不大。

4.2.3 有可供示范的良种犊牛群

产犊11头，给养殖场(户)增加6头后备良种奶牛，5头肉用公牛。这批胚胎源于纯种荷斯坦奶牛，从犊牛阶段就可看出乳用特征明显，将来能有较高的产奶量，给当地养殖场提供优秀个体实物，以示范带动提高良种意识。

4.2.4 给当地培养了技术人员

当地有10人参加受体母牛初选，有3人全程跟踪观摩，有1人在专家手把手指导下，独立完成移植6枚胚胎，有2头妊娠。当地技术人员得到实践操作，有了信心，为将来独立承担牛胚胎移植打下了基础。

5 讨论

5.1 育成牛为受体

子宫内膜炎是影响胚胎附植及妊娠率的主要因素，一旦有炎症，机体就把炎性分泌物和胚胎当成异物进行排斥。经产母牛产后胎衣血污排不干净，人工授精器械消毒不严，常发生子宫内膜炎。另外，常发生营养失衡，微量元素不足，导致卵巢及黄体发育不良，奶牛的生殖机能异常，不利于胚胎着床及妊娠。育成牛为受体，减少子宫内膜炎发病率，减少排斥因素。育成牛不产犊，不产奶，不易发生营养代谢性疾病，生殖系统机能正常，利于胚胎着床。

5.2 体成熟为标准

母牛性成熟时，有些器官还未发育成熟，不具备着床及妊娠条件，或妊娠后胎儿发育、母体自身发育都有影响。检查时要看年龄，不低于18个月龄;体重不低于350 kg;子宫发育良好对称;卵巢大小正常。每个环节都要认真细致检查，严格筛选，好中选好。待选母牛群体以1∶5最好。

5.3 同期发情效果好

对初选母牛进行同期发情处理，在集中时限内移植，省力省时。阴道栓 CIDR埋植，诱导发情，注射PGF2α溶解黄体，发情率高，发情状态好。对于缺乏技术，异地聘请技术人员是较好的方法。

5.4 加大技术培训

奶牛胚胎移植工程生产和使用已明确分工，冷冻胚胎已批量化生产，商品化出售。冷冻胚胎移植技术程序相似于人工授精，不同点在于排卵后第6～8天(多应用第7天)，触摸黄体大小、质地进行判断;只要对人工授精技术熟练的人员开展培训，就能掌握技术。鼓励养殖场购买奶牛胚胎，聘请当地技术人员到场进行移植，实现奶牛胚胎移植技术的普及化。

5.5 自然发情成本低

以孕激素+PGF2α法进行诱导同期发情，效果显著，但移植前处理费用高，每头药费800～1 300元。如牛群数量大，有技术人员，可用自然发情，不需生殖激素处理，一旦有发情母牛应及时检查，及时移植，减少成本。

5.6 经产母牛也可作为受体

如果受体母牛少，育成牛有特殊用途，可选择1～4胎经产母牛为受体。须防治子宫内膜炎，开展布病监测，及时淘汰阳性牛，净化牛群。分娩前饲喂牛羊舔砖和营养舔砖，补充硒等矿物质。产后灌服益母生化散:益母草120 g、当归 75 g、川芎 65 g、桃花 70 g、干姜55 g，根据情况可加减党参、黄芪，温水灌服，每天1次，连用3～4 d。同时子宫内灌注宫净康(或青霉素钠、硫酸链霉素注射液、硫酸庆大霉素注射液、乳酸环丙沙星注射液、头孢曲松钠、盐酸左氧氟沙星、土霉素)，或用催产素、氯前列醇钠加速排胎，恢复子宫及卵巢机能。

5.7 饲养管理不可忽视

在移植后2个月内，有5头奶牛发生流产，这可能与饲养管理不当有关。对于受体母牛，外来胚胎是异物，胚胎着床是一个复杂过程，任何刺激都会引起应激反应，加大排斥，导致胚胎流出，出现流产。移植后，除给优质饲料，合理搭配外，尽量避免受体母体受到驱打、碰撞、跌倒、惊吓，圈舍潮湿，饮冷水，不要注射、投服胎动药。妊娠检查后，注射黄体酮50～100mg保胎。有些妊娠母牛在2个月内会出现假发情，暂不要配种，要进一步观察。