抗犬瘟热病毒与犬细小病毒特异性免疫制剂的检测

陈超阳 和彦良 霍志云 程俊生

近年来，随着我国社会经济的发展，我国的宠物文化也相应有了较大的提升，越来越多的宠物进入到人们的日常生活中，它们已经成为众多人生活中的重要组成部分。据统计，在饲养宠物的人群中，大约80%的人饲养宠物犬，因此犬的健康问题也越来越引起人们的重视，宠物犬在饲养中遇到的常见病比较多，其中犬瘟热和犬细小病毒病因其传染性强、发病率高、死亡率高，已成为危害我国养犬业的主要传染病。

目前，疫苗免疫注射对预防这两种病取得了一定效果，但由于受疫苗自身、免疫程序、母源抗体及个体差异等多种因素的影响，仍有部分免疫犬因感染而发病，因此对犬瘟热和犬细小病毒病的被动免疫和疾病早期的有效治疗也成为该疾病防治的重要措施。大量的临床治疗案例表明，在两种疾病的早期，皮下或肌肉注射特异性抗血清和单克隆抗体可收到较好的治疗效果。但由于目前市场上出售的抗血清和单克隆抗体种类繁多，存在使用说明不详，使用方法不同，特别是所含抗体水平不明确等问题，这对疾病的临床有效治疗造成了一定影响。为给宠物医院的临床治疗提供一定的参考信息，作者对泰州市多家宠物医院的抗血清和单克隆抗体进行检测，并作报告一份。

一、材料与方法

（一）材料

1.抗体及制剂 犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）高免血清（二联、五联）及单克隆抗体购自江苏省泰州市内多家宠物医院；抗犬瘟热病毒阳性血清、抗犬细小病毒阳性血清由本公司研发部自行研制；犬瘟热病毒、犬细小病毒中和抗原由本公司研发部制备保存。

2. 实验仪器 微量移液器、低速离心机等。

（二）方法

1. 制剂的细菌培养 无菌条件下每种制剂各取100μl 分别加入到5ml 无抗性LB 液体培养基中，37℃、210r/min 培养5 天，观察是否有菌生长。

2. 制剂中犬瘟热病毒抗体中和效价测定 按本公司《犬瘟热病毒中和试验标准操作规程》的方法进行。犬瘟热病毒抗体中和效价（SN）判定标准见表1。

3. 制剂中犬细小病毒抗体的血凝抑制效价测定 按本公司《细小病毒血凝抑制试验标准操作规程》的方法进行。犬细小病毒抗体的血凝抑制（HI）效价判定标准见表1。

表1 犬瘟热病毒与犬细小病毒抗体效价判定标准

二、结果与分析

（一）通过制剂的细菌培养，对宠物医院使用的犬瘟热病毒、犬细小病毒高免血清及单克隆抗体进行了无菌检测，共4个品牌，8 份样品。结果显示品牌2 的犬五联 （犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒、犬冠状病毒）高免血清在培养的第2天，LB 液体培养基即出现严重的浑浊现象，表明该制剂存在着大量细菌污染；其他制剂培养物培养5 天后均无菌生长，较为洁净。结果详见表2。

表2 8 份制剂的无菌检验结果

（二）试验对8 份特异性免疫制剂同时进行犬瘟热病毒抗体中和效价的测定，检测结果显示品牌1 的两种制剂中犬瘟热中和抗体效价均为1∶4，判定结果为无抗体；品牌2 与品牌3 制剂中的犬瘟热中和抗体效价均为1∶32，水平较弱；品牌4 制剂中犬瘟热中和抗体效价均为1∶64，水平一般。但在品牌2、3、4 的抗犬细小病毒的特异性免疫制剂中均检测到了不同水平的犬瘟热中和抗体，其中品牌3 的犬细小病毒单克隆抗体的犬瘟热病毒中和抗体效价达到1∶128。结果详见表3。隆抗体中也检测到了不同水平的犬细小病毒抗体。结果详见表4。

表3 8 份制剂中犬瘟热病毒抗体中和效价检测结果

（三）试验对8 份特异性免疫制剂同时进行犬细小病毒抗体的血凝抑制(HI)效价的测定，检测结果显示抗体水平最低的为品牌1，其两种制剂中犬细小病毒抗体的HI效价均为1∶80；抗体水平最高的为品牌3，其犬细小病毒单克隆抗体的HI 效价可达1∶640。同样，在品牌3 和品牌4 的犬瘟热单克

三、讨论

本试验细菌培养结果表明，大部分品牌还是保证了特异性生物制品没有细菌污染，但品牌2 的犬五联高免血清出现了严重的细菌污染，说明同一厂家不同产品之间还是存在一定的差异，由此提醒临床上的宠物医生在使用同一品牌不同产品时还是要谨慎对待，制剂溶解后出现混浊、沉淀的应禁止使用，对建议静脉滴注的制剂需更加小心谨慎，避免宠物医疗事故的发生。

表4 8 份制剂的犬细小病毒抗体血凝抑制效价检测结果

据文献报道：抗犬瘟热中和效价达到1∶40，抗犬细小病毒的HI 效价达到1∶80，即可安全保护犬免受犬瘟热和犬细小病毒的攻击。制剂的抗体检测结果表明，不论是高免血清，还是单克隆抗体，不同品牌之间存在着较大的差异，部分品牌的制剂还可能会出现抗体极低、无抗体，甚至出现单一抗体制剂中会含有另一种抗体成分的情况。这提醒宠物医生在临床治疗中需要做到因药而异，不能一贯的采取相同的治疗剂量与方法，对于治疗效果不明显的，应重新选择以提高临床治疗效果。

通过走访多家宠物医院发现，宠物医生在临床上使用的抗犬瘟热病毒或犬细小病毒的高免血清和单克隆抗体的牌子多、规格乱，且有很大一部分产品并没有获得农业部新兽药注册证书，因此给临床上疾病的及时、准确、有效的治疗带来了很大的隐患与风险，这需要相关兽药监管部门加大、加强对特异性免疫制剂这类产品的监管与查处力度，同时相关主管部门也应加强对宠物医院的监管，以及对宠物医生的培训教育和宣传指导，进一步规范宠物医疗市场。